新型檢測技術(shù)在犬貓主要病原檢測中的應(yīng)用進(jìn)展

宋新宇，朱明哲,2，陳紫昱，印春生，夏應(yīng)菊，劉業(yè)兵*

(1.中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，北京 100081；2. 青島農(nóng)業(yè)大學(xué)，山東青島 266109)

犬貓作為人類伴侶動(dòng)物，備受人們喜愛，同時(shí)在疫病方面受到越來越多的關(guān)注。犬瘟熱和犬細(xì)小病毒病是犬常見的傳染病，臨床上都表現(xiàn)為高熱、嘔吐和腹瀉等相似癥狀[1-2]。犬冠狀病毒病是一種急性、腸炎型傳染病，鑒別診斷與以稀便為主的腸炎疾病相似，尤其區(qū)分輪狀病毒或細(xì)小病毒感染，這些具有相似癥狀的傳染病給診斷帶來了困擾。貓杯狀病毒常引起貓科動(dòng)物上呼吸道癥狀和口腔潰瘍，具有較高的感染率，目前還未研制出有效的疫苗，該病原嚴(yán)重威脅貓的健康[3]。引起貓呼吸道疾病的另一常見病原是皰疹病毒，患病貓常出現(xiàn)發(fā)熱，打噴嚏，鼻、眼中流出分泌物等臨床癥狀，主要威脅仔貓的健康，發(fā)病率可達(dá)100%。貓泛白細(xì)胞減少癥又稱貓瘟熱，是由細(xì)小病毒引起的傳染病，幼貓的感染率和死亡率較高[4]，白細(xì)胞顯著減少是患該病的一個(gè)重要特征。此外，大腸桿菌和結(jié)核分枝桿菌等引發(fā)的細(xì)菌病以及弓形蟲、旋毛蟲、鉤端螺旋體等寄生蟲病，都是威脅犬貓健康的重要病原。其中，部分疫病為人畜共患病，如狂犬病、弓形蟲病和鉤端螺旋體病等，存在病原的跨物種傳播的風(fēng)險(xiǎn)，對人類公眾健康構(gòu)成了重大威脅。因此，建立早期快速而準(zhǔn)確的檢測方法，對控制犬貓疾病的流行具有重要意義。

盡管病原體的分離和鑒定是診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但是某些病原為人畜共患病原體存在安全隱患，因此，在寵物門診和醫(yī)院實(shí)施較為困難。隨著分子生物學(xué)診斷技術(shù)的進(jìn)步，相關(guān)檢測技術(shù)不斷優(yōu)化，出現(xiàn)操作簡單、靈敏度高、特異性強(qiáng)的新型檢測技術(shù)，如實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)、等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)和基因芯片等核酸檢測技術(shù)，膠體金免疫層析技術(shù)、時(shí)間分辨熒光免疫層析技術(shù)、熒光微球免疫學(xué)檢測技術(shù)、化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)和免疫生物傳感器等免疫學(xué)檢測技術(shù)和基于CRISPR/Cas的核酸檢測系統(tǒng)等其他新型檢測技術(shù)，可以滿足在多種環(huán)境下快速檢測病原的需求，本文現(xiàn)針對犬貓主要病原的新型檢測技術(shù)的應(yīng)用和研究現(xiàn)狀作以下總結(jié)概述。

1 基于核酸分子雜交的檢測技術(shù)

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase chain reaction，PCR)技術(shù)主要針對病原基因組高度保守的序列，將微量的核酸分子進(jìn)行大量擴(kuò)增，是現(xiàn)代應(yīng)用較為廣泛的病原檢測手段之一，但是也存在缺點(diǎn)，需要提取樣品DNA，并且檢測結(jié)果只能依賴于凝膠電泳的定性分析。實(shí)時(shí)熒光PCR系統(tǒng)可以滿足定量分析[5]，目前，已經(jīng)建立了貓星狀病毒[6]、犬流感病毒[7]、犬肝片吸蟲[8]、犬鉤蟲[9]和犬鉤端螺旋體[10]等多種常見犬貓病原的實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法。該技術(shù)是寵物醫(yī)療檢測平臺(tái)的首選技術(shù)，但由于檢測結(jié)果需要依賴于昂貴的儀器設(shè)備，且對操作人員有一定要求，所以只能在設(shè)備全面的實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。此外，基于PCR反應(yīng)原理，衍生出操作簡單的等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)和可實(shí)現(xiàn)高通量的基因芯片技術(shù)等。

1.1 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù) 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(Loopmediated isothermal amplification，LAMP)是由日本學(xué)者Notomi等[11]建立的體外恒溫?cái)U(kuò)增核酸的技術(shù)，1 h之內(nèi)即可對靶基因進(jìn)行高效擴(kuò)增。

國內(nèi)外已有利用LAMP技術(shù)進(jìn)行檢測的報(bào)道。關(guān)瑋琨等[12]根據(jù)犬細(xì)小病毒(Canine parvovirus，CPV)VP2基因設(shè)計(jì)引物建立了LAMP方法，最低檢出量為2.1×10-2TCID50，敏感性是PCR技術(shù)的100倍，在臨床樣品進(jìn)行檢測中，其與PCR檢測結(jié)果符合率達(dá)100%。目前，已有犬細(xì)小病毒[13]、犬瘟熱病毒[14]和貓泛白細(xì)胞減少癥病毒[15]等LAMP的檢測方法，該技術(shù)還運(yùn)用到犬馬鞭毛蟲[16]、犬帶絳蟲[17]、犬孢子蟲[18]等多種犬寄生蟲病的檢測。值得注意的是，LAMP技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于食源性致病菌的檢測[19-20]，但在犬貓細(xì)菌性疾病檢測研究較少。相比于普通PCR，LAMP技術(shù)只需要簡單的恒溫水浴即可完成對微量病原的高效擴(kuò)增，但是還未出現(xiàn)檢測犬貓病原的商品化試劑盒。該技術(shù)尚有設(shè)計(jì)引物較難的缺點(diǎn)，引物之間常存在二聚體結(jié)構(gòu)，進(jìn)而導(dǎo)致結(jié)果的假陽性。

1.2 重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù) 重組酶聚合酶擴(kuò)增(Recombinase polymerase amplification，RPA)是Piepenburg等[21]于2006年研發(fā)出的核酸等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)。該技術(shù)主要依賴于多種酶和蛋白參與，通過模擬DNA體內(nèi)擴(kuò)增，以實(shí)現(xiàn)DNA特定區(qū)域的指數(shù)擴(kuò)增。

近年來，許多研究工作都報(bào)道了應(yīng)用RPA技術(shù)實(shí)現(xiàn)對病原快速且靈敏的檢測。Wang等[22]針對犬瘟熱病毒核衣殼基因設(shè)計(jì)三種引物和探針，篩選后選出最佳組合，建立RPA快速檢測方法，該方法與實(shí)時(shí) RT-PCR 診斷符合率為100%，但相比之下，RPA方法更加省時(shí)方便，檢測時(shí)間為3～12 min。Hu等[23]建立貓冠狀病毒的RPA檢測方法，在39 ℃條件下，15 min即可特異性檢測出該病毒的膜基因，最低檢測限為233拷貝。目前，已建立起貓皰疹病毒[24]、狂犬病病毒[25]和犬細(xì)小病毒[26]等RPA檢測方法，結(jié)果均具有較高的靈敏性和特異性，但目前尚未有關(guān)于犬貓病原檢測的RPA產(chǎn)品完成研發(fā)與上市。RPA技術(shù)的優(yōu)勢主要在于體外37～42 ℃恒溫?cái)U(kuò)增，反應(yīng)時(shí)間只需5～20 min，可以實(shí)現(xiàn)及時(shí)準(zhǔn)確的檢測。該技術(shù)還存在不足，如沒有專門的軟件設(shè)計(jì)引物和探針，只能通過消耗大量的時(shí)間和成本，篩選效果良好的引物和探針。此外，RPA擴(kuò)增后需要對其進(jìn)行純化，否則在瓊脂糖凝膠電泳時(shí)會(huì)導(dǎo)致結(jié)果模糊。

1.3 基因芯片技術(shù) 基因芯片又稱DNA微陣列，基于核酸雜交技術(shù)原理將靶基因固定到固體支持物上，隨后將處理后的樣品與靶基因進(jìn)行特異性結(jié)合，以實(shí)現(xiàn)對所測樣品基因的大規(guī)模定量檢驗(yàn)[27]，因其高通量的特點(diǎn)而被應(yīng)用于各個(gè)領(lǐng)域。

基因芯片技術(shù)不僅能區(qū)分多種病原的種屬，甚至可以同時(shí)跨物種檢測，極大的縮短了操作時(shí)間。李健等[28]建立了犬冠狀病毒、貓冠狀病毒和貓傳染性腹膜炎病毒的三種病毒的基因芯片技術(shù)，為病原的快速檢測提供了便利。Wu等[29]利用芯片技術(shù)原理同時(shí)檢測五種犬病毒，這些病毒包括犬瘟熱、犬細(xì)小病毒、犬副流感病毒、犬腺病毒和狂犬病病毒，通過靶向每種病毒的保守基因組區(qū)域來實(shí)現(xiàn)測定特異性，對臨床75個(gè)樣本進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示與普通PCR技術(shù)檢測結(jié)果的符合率為100%?；蛐酒瑱z測病原技術(shù)成功的關(guān)鍵在于提高雜交特異性和降低干擾背景，但其檢測結(jié)果多依賴于專業(yè)掃描儀器，成本較高。目前，該技術(shù)在犬貓疫病檢測方面尚處于實(shí)驗(yàn)研究階段。

2 基于抗原抗體反應(yīng)的免疫學(xué)檢測技術(shù)

由于病原標(biāo)識(shí)性抗原篩選技術(shù)、單克隆抗體、多克隆抗體以及重組抗體等生物技術(shù)的快速發(fā)展，使得基于抗原抗體特異性結(jié)合的免疫學(xué)診斷技術(shù)，以膠體金作為指示劑的層析技術(shù)，可以實(shí)現(xiàn)對待測樣品的直觀快速的檢測[30]，已研究出犬細(xì)小病毒[31]、犬貓弓形蟲[32]、貓冠狀病毒[33]和貓泛白細(xì)胞減少癥病毒[34]檢測試紙條，根據(jù)國家獸藥基礎(chǔ)數(shù)據(jù)庫查詢可知，目前已有約13種已經(jīng)批準(zhǔn)上市的犬貓膠體金檢測試紙條，由于操作簡單，結(jié)果只需肉眼觀察，被寵物醫(yī)院和基層單位的現(xiàn)場廣泛使用，但膠體金免疫層析試紙條檢測病原只能定性或是半定量，且準(zhǔn)確性低于PCR技術(shù)。在此基礎(chǔ)上，新的免疫學(xué)檢測技術(shù)相繼出現(xiàn)，如時(shí)間分辨免疫分析技術(shù)、免疫微球檢測技術(shù)、化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)和免疫生物傳感器等。

2.1 時(shí)間分辨免疫熒光層析技術(shù) 時(shí)間分辨免疫熒光層析技術(shù)(Time-resolved immunochromatographic fluorescent assay, TRIFA)是基于免疫層析和時(shí)間分辨熒光分析相結(jié)合的定量檢測技術(shù)[35]，利用熒光的鑭系元素或稀土粒子標(biāo)記抗原或抗體，使抗原抗體在硝酸纖維膜上發(fā)生反應(yīng)，用簡單配套的設(shè)備來測定熒光強(qiáng)度，從而實(shí)現(xiàn)定量分析待測樣本中的濃度。

TRFIA技術(shù)的主要標(biāo)記物為鑭系元素，因其特殊的發(fā)光特性可以有效減低外界熒光和非特異性熒光的干擾，增強(qiáng)檢測的靈敏度。Chen等[36]將犬細(xì)小病毒抗體與銪(Eu3+)偶聯(lián)標(biāo)記，建立雙抗體夾心式的時(shí)間分辨免疫層析技術(shù)以檢測犬細(xì)小病毒的含量，靈敏度達(dá)1.15 mEu/mL。韓陽瑞等[37]建立了檢測弓形蟲感染的血清中抗體的時(shí)間分辨免疫層析技術(shù)，結(jié)果通過統(tǒng)計(jì)學(xué)的分析，顯示該方法與ELISA之間具有較好的一致性，且具有足夠的精度、分析靈敏度和準(zhǔn)確度。我國已有研究人員基于TRFIA技術(shù)對犬冠狀病毒[38]和貓杯狀病毒[39]實(shí)現(xiàn)定量檢測，但未有針對犬貓病原檢測的商品用試劑盒。該技術(shù)既保留了膠體金免疫層析技術(shù)的反應(yīng)快速、操作簡單的特點(diǎn)，通過熒光技術(shù)實(shí)現(xiàn)了對試驗(yàn)結(jié)果的定量分析，但是實(shí)驗(yàn)結(jié)果的熒光信號(hào)需依賴于配套的儀器設(shè)備。

2.2 免疫微球分離檢測技術(shù) 免疫微球分離技術(shù)(Immunomagnetic beads separation technology, IMBS)是將磁珠的磁性、響應(yīng)性和抗原抗體的特異性反應(yīng)相結(jié)合的一項(xiàng)技術(shù)[40]，將特異性抗原(或抗體)偶聯(lián)在磁性微球表面，從而與待檢樣品的抗體(或抗原)特異性結(jié)合，達(dá)到分離濃縮的目的。

IMBS主要與其他檢測技術(shù)相結(jié)合以避免樣品中的其他成分對檢測的干擾，使檢測結(jié)果更加高效、特異。唐毓等[41]利用表達(dá)并純化的犬細(xì)小病毒中VP2基因的重組蛋白作為抗原與納米微球偶聯(lián)，建立了一種快速檢測犬細(xì)小病毒抗體的間接凝集方法，對臨床40份犬血清進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示,不僅檢測時(shí)間比ELISA用時(shí)短，而且與ELISA檢測方法的符合率達(dá)97%。Chen等[42]將磁珠免疫微球技術(shù)和化學(xué)發(fā)光層析技術(shù)相結(jié)合建立檢測犬血清中的犬細(xì)小病毒抗體的方法，1 h通過采集光度即可分析結(jié)果，可運(yùn)用該方法定量檢測犬細(xì)小病毒抗體的濃度和疫苗免疫效果的評(píng)價(jià)。相較于傳統(tǒng)的免疫學(xué)診斷技術(shù)，該技術(shù)可實(shí)現(xiàn)免疫分離與微量富集結(jié)合為一體，降低非特異性結(jié)合可能性，使檢測結(jié)果更加高效、特異。使用IMBS進(jìn)行高效富集的關(guān)鍵在于抗體的特異性和敏感性，但是受到樣品基質(zhì)的復(fù)雜性生物干擾，因此，IMBS的應(yīng)用性能還需要進(jìn)一步研究。

2.3 化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù) 化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)(Chemiluminescence immunoassay, CLIA)是以化學(xué)發(fā)光相關(guān)物質(zhì)為示蹤信號(hào)標(biāo)記抗原(或抗體)，利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度對待測物定量分析[43]。由于發(fā)光強(qiáng)度與待測物的濃度呈正相關(guān)，可以通過儀器測定發(fā)光強(qiáng)度，便可對待測物進(jìn)行定量分析。

吖啶酯是常見的化學(xué)發(fā)光物質(zhì)，其發(fā)光效率在1 s內(nèi)即可完成，成本低，適合各種檢測機(jī)構(gòu)使用。G?sior等[44]將吖啶酯與二抗(IgG)和SAG2-GRA1-ROP1L嵌合抗原連接起來，建立檢測血清中弓形蟲特異性抗體的化學(xué)發(fā)光免疫分析方法，以ROC曲線來分析的IgG CLIA與IgG ELISA測定的診斷價(jià)值，使用相同用量的二抗測得AUC(ROC曲線下的面積)的結(jié)果分別是0.966和0.985，結(jié)果表明，IgG CLIA比IgG ELISA的檢測結(jié)果更加敏感。Chen等[45]利用犬細(xì)小病毒重組蛋白為包被抗原，以吖啶酯標(biāo)記二抗，建立檢測犬細(xì)小病毒抗體的CLIA檢測方法，1 h后即可收集化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度，檢測限為0.36 ng/mL。楊富強(qiáng)等[46]利用堿性酶對犬瘟熱病毒抗原進(jìn)行標(biāo)記，以吖啶酯類作為發(fā)光底物，設(shè)計(jì)并發(fā)明檢測犬瘟熱病毒抗體。該方法具有即時(shí)診斷特點(diǎn)，37 ℃ 孵育半小時(shí)即可。其在靈敏度、穩(wěn)定性和檢測效率上明顯優(yōu)于ELISA測定方法。雖然該技術(shù)目前在犬貓病原檢測方面未有面向市場的產(chǎn)品，但在2021年完成了第一個(gè)動(dòng)物用化學(xué)發(fā)光試劑盒的審批注冊[47]，該技術(shù)不需要外界的激發(fā)光源，降低了背景的熒光信號(hào)，可以在較寬的線性范圍檢測極低濃度的樣品，具有較高的敏感性，但是其檢測結(jié)果依賴于專業(yè)的實(shí)驗(yàn)設(shè)備和對操作人員具有一定的要求，因此，在基層推廣還是有一定限制。

2.4 免疫生物傳感器 生物傳感器是分子生物學(xué)、電化學(xué)、微生物學(xué)等多學(xué)科相互滲透的新型技術(shù)，由分子識(shí)別元件即敏感元件(如酶、抗原、細(xì)胞器、核酸、細(xì)胞受體、生物膜等)和信號(hào)轉(zhuǎn)換器(如半導(dǎo)體、光電轉(zhuǎn)換、熱敏電阻、壓電晶體等)組成[48]，可以與靶標(biāo)物質(zhì)發(fā)生生化反應(yīng)并且將其濃度轉(zhuǎn)換為可測量的電信號(hào)或光信號(hào)，達(dá)到定量定性分析的目的。

生物傳感器的種類眾多，其中免疫生物傳感器在病原檢測方面是可靠手段，具有特異性、長期穩(wěn)定性、快速反應(yīng)性等特點(diǎn)。Jiang等[49]先將硫氨酸在nafion-石墨烯修飾的電極上電聚合形成生物敏感膜，在膜上固定弓形蟲特異性抗原，基于雙抗體夾心法的原理，構(gòu)建了一種用于檢測弓形蟲特異性IgM的新型電化學(xué)免疫傳感器，結(jié)果表明，電流與IgM濃度具有正相關(guān)性，檢測限為0.016 AU/mL (S/N=3)。Kim等[50]設(shè)計(jì)出檢測犬細(xì)小病毒的石英晶體微天平生物傳感器，將特定抗體嵌合在金涂層的石英晶體表面，通過抗原抗體相結(jié)合的頻率變化以檢測犬細(xì)小病毒的含量。該生物傳感器具有納米級(jí)的敏感度，通過對臨床261份糞便樣本分析，結(jié)果顯示，與PCR相比，具有95.4%的敏感度和98%的特異性?；诿庖邔W(xué)的生物傳感器技術(shù)具有特異、靈敏、快速的優(yōu)勢，但是也存在缺點(diǎn)，如抗體結(jié)合到生物傳感器易失活，穩(wěn)定性較差；非特異性吸附會(huì)影響結(jié)果的準(zhǔn)確性等。目前針對犬貓病原檢測的免疫生物傳感器方法仍停留在科研實(shí)驗(yàn)室階段，還未出現(xiàn)可應(yīng)用的商品。

3 其他新型檢測技術(shù)

成簇規(guī)律間隔的短回文重復(fù)序列(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats, CRISPR)以及相關(guān)蛋白(CRISPR-associated protein, Cas)組成的CRISPR/Cas系統(tǒng)是廣泛存在于古細(xì)菌和細(xì)菌中的獲得性免疫系統(tǒng)[51]，用于抵御外來病毒的入侵。由于CRISPR/Cas系統(tǒng)具有較高特異性和靈敏度,可作為新型的核酸檢測平臺(tái)，其中Cas蛋白作為高特異性的序列識(shí)別靶標(biāo)元件，可以與信號(hào)讀取方法相結(jié)合，進(jìn)行核酸的定量檢測。

基于CRISPR/Cas系統(tǒng)的核酸檢測方法主要由三個(gè)步驟構(gòu)成，包括核酸擴(kuò)增、特異性核酸序列識(shí)別以及檢測結(jié)果讀取。Khan等[52]將重組酶介導(dǎo)的擴(kuò)增技術(shù)與CRISPR-Cas13a檢測系統(tǒng)相結(jié)合，建立快速、特異檢測犬細(xì)小病毒的熒光報(bào)告系統(tǒng)，該系統(tǒng)可在30 min內(nèi)檢測到100 amol/L CPV-2 DNA。該方法具有較高的特異性，通過與其他犬類病毒(犬瘟熱病毒、犬冠狀病毒、犬副流感病毒)進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示，犬細(xì)小病毒的平均熒光值顯著更高。CRISPR/Cas系統(tǒng)可以與熒光信號(hào)、免疫層析試紙條等方法相結(jié)合，便可實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場操作，可在寵物醫(yī)院和大型養(yǎng)殖場推廣使用。但該技術(shù)還存在缺點(diǎn)：如脫靶效應(yīng)，可能會(huì)在檢測過程中出現(xiàn)假陽性的結(jié)果；RNA酶廣泛存在，可能會(huì)使CRISPR檢測體系的重要組分向?qū)NA被降解，影響檢測結(jié)果的穩(wěn)定性。目前該系統(tǒng)在人類疾病領(lǐng)域出現(xiàn)商品化診斷試劑[53]，但在犬貓病原檢測研究尚少。

4 小結(jié)及展望

近年來，各種新型檢測技術(shù)在準(zhǔn)確度、靈敏度及操作時(shí)間都有跨越式發(fā)展，但大多數(shù)的核酸檢測技術(shù)依賴精密甚至昂貴的儀器設(shè)備和專業(yè)的操作人員，不能在基層大規(guī)模普及。鑒于熒光檢測系統(tǒng)和側(cè)向流動(dòng)分析技術(shù)可提供一個(gè)簡單的可視化結(jié)果分析，因此可以考慮將多個(gè)技術(shù)聯(lián)合使用，發(fā)揮各技術(shù)的優(yōu)勢，從而實(shí)現(xiàn)優(yōu)勢互補(bǔ)以實(shí)現(xiàn)快速、敏感的檢測。在免疫檢測技術(shù)中，標(biāo)記物是影響靈敏度和檢測效率的重要因素，與傳統(tǒng)的基于金納米顆粒標(biāo)記相比，使用彩色微球、量子化、鑭系元素和膠體碳等新型材料標(biāo)記可以進(jìn)一步提高靈敏度和檢測效率，可能使得免疫層析技術(shù)更快速、靈敏、準(zhǔn)確，在犬貓病原檢測方面具有良好的應(yīng)用前景。尤其是近年來，成熟應(yīng)用于人類臨床醫(yī)學(xué)的化學(xué)發(fā)光免疫層析技術(shù)，已開始在動(dòng)物疫病檢測方面從研究走向市場，未來就需要有條件的企業(yè)或科研平臺(tái)加大科研投入，以促進(jìn)成果轉(zhuǎn)化，相信在犬貓病原檢測方面將會(huì)有巨大的市場。

隨著科技學(xué)技術(shù)的發(fā)展，檢測的智能化、數(shù)字化和便攜化趨勢越來越明顯，快速、高效、準(zhǔn)確的快速檢測方法，是犬貓等動(dòng)物檢測的發(fā)展趨勢。人工智能提供了一個(gè)準(zhǔn)確分析數(shù)據(jù)的平臺(tái)，高分辨率的攝像頭和精確的計(jì)算能力，可彌補(bǔ)目測帶來的不準(zhǔn)確性，實(shí)現(xiàn)對病原含量客觀、精準(zhǔn)的閱讀，減少操作人員的主觀錯(cuò)誤判斷。

同時(shí)，多種病原同步檢測技術(shù)也是臨床檢測的發(fā)展趨勢，尤其是對于處于潛伏期感染的動(dòng)物，需要在疾病發(fā)生早期進(jìn)行病原篩查，這就需要實(shí)現(xiàn)多種病原的多重?cái)U(kuò)增，對寵物病原來講，目前仍然是一個(gè)挑戰(zhàn)。

未來，犬貓等寵物病原檢測技術(shù)會(huì)朝著多種檢測技術(shù)互相融合、高通量、高靈敏度、高準(zhǔn)確度、快速檢測、可普及推廣及可商品化的方向發(fā)展，以便滿足在不同檢測環(huán)境下的快速檢測，為犬貓的健康和公共生物安全保駕護(hù)航。