經(jīng)肋間單孔胸腔鏡肺葉切除術(shù)聯(lián)合消癌平對(duì)非小細(xì)胞肺癌患者miR-210 和miR-101 表達(dá)的影響*

王維新，何國(guó)麗，張劍鋒，付紅艷，左晶晶，任宏玲

（1.河北省秦皇島市第二醫(yī)院，河北 秦皇島 066600；2.河北省秦皇島市第四醫(yī)院，河北 秦皇島 066600）

肺癌以非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）最常見，占70%～80%［1］。NSCLC 的癌細(xì)胞生長(zhǎng)分裂較慢，擴(kuò)散轉(zhuǎn)移相對(duì)較晚，早期無明顯癥狀，確診時(shí)多處于早中期階段，此時(shí)可通過手術(shù)切除治療而抑制癌細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移、擴(kuò)散［2］。經(jīng)肋間單孔胸腔鏡（IUVATS）肺葉切除術(shù)創(chuàng)傷小、痛苦輕、恢復(fù)快、療效確切、安全可靠，近年來廣泛應(yīng)用于治療NSCLC［3］。為了提高手術(shù)治療效果，臨床推薦術(shù)后行輔助化療。常規(guī)西藥化療對(duì)癌細(xì)胞有較好的抑制及殺滅作用，但存在細(xì)胞毒性大、患者免疫功能下降、耐藥等問題［4］。中醫(yī)認(rèn)為，癌癥是由癌毒積聚、正氣不足、脾腎虧虛等導(dǎo)致［5］。消癌平具有清熱解毒、化痰軟堅(jiān)、益氣養(yǎng)陰功效，既往用于肝癌、肺癌、胃癌、食管癌等癌癥的輔助化療效果較好［6］。微小RNA210（miR-210）、微小RNA101（miR-101）在癌癥腫瘤疾病中呈現(xiàn)異常表達(dá)，與NSCLC 病情進(jìn)展有一定關(guān)聯(lián)［7］，可作為NSCLC 診斷及療效評(píng)估的標(biāo)志物。本研究中探討了IUVATS 肺葉切除術(shù)后給予消癌平注射液輔助治療NSCLC 的療效，以及對(duì)miR-210 和miR-101 表達(dá)水平的影響。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

納入標(biāo)準(zhǔn)：確診NSCLC，符合《Ⅰ～ⅢB期非小細(xì)胞肺癌完全切除術(shù)后輔助診療指南（2021版）》中相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)［8］；IUVATS肺葉切除術(shù)治療指征；對(duì)消癌平注射液等治療藥物無禁忌證。本研究方案經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審查批準(zhǔn)，患者簽署知情同意書。

排除標(biāo)準(zhǔn)：預(yù)計(jì)生存周期不足3 個(gè)月；術(shù)后出現(xiàn)嚴(yán)重并發(fā)癥轉(zhuǎn)入重癥監(jiān)護(hù)室；入組前已接受其他治療藥物干預(yù)；未嚴(yán)格執(zhí)行預(yù)定的化療方案；治療期間出現(xiàn)嚴(yán)重不良反應(yīng)需停止治療。

病例選擇與分組：選取我院2020年4月至2021年4月收治的NSCLC 患者118例，按隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照組和觀察組，各59 例。兩組患者一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。詳見表1。

表1 兩組患者一般資料比較（n=59）Tab.1 Comparison of the patients' general data between the two groups（n=59）

1.2 方法

對(duì)照組患者以IUVATS 肺葉切除術(shù)治療，行雙腔氣管內(nèi)插管靜脈復(fù)合全身麻醉后，采用健側(cè)側(cè)臥位，用3 孔法行手術(shù)操作。選擇腋中線與腋后線第7 或第8 肋間為觀察孔，肩腳下角線第7 或第8 肋間取長(zhǎng)約1.5 cm的切口為輔助操作孔，第4 或第5 肋間腋前線取長(zhǎng)約3～4 cm 的切口為主操作孔。胸腔鏡下探查胸腔，分離粘連，排除胸腔內(nèi)轉(zhuǎn)移情況。若術(shù)前病理診斷明確，則行肺葉切除及淋巴結(jié)清掃術(shù)；若術(shù)前病理診斷不明確，則術(shù)中行楔形切除，冰凍病理證實(shí)為腫瘤再行肺葉切除及淋巴結(jié)清掃，分別處理肺動(dòng)脈、肺靜脈及支氣管。具體方案：一般先游離切斷肺靜脈，處理肺動(dòng)脈和支氣管，以直線切割縫合器進(jìn)行切斷，離斷支氣管前請(qǐng)麻醉師鼓肺，確認(rèn)病變肺葉及余肺復(fù)張情況，用標(biāo)本袋自主操作孔取出病變肺組織，常規(guī)清掃肺門和縱隔淋巴結(jié)，即對(duì)目標(biāo)區(qū)域內(nèi)的所有淋巴結(jié)及周圍脂肪組織等進(jìn)行整塊切除。完成后胸腔內(nèi)注入0.9%氯化鈉注射液，麻醉師協(xié)助鼓肺檢查有無支氣管殘端及其他部位漏氣，分別放置上下胸腔閉式引流管，關(guān)閉切口。術(shù)后，輔以EP（順鉑+依托泊苷）化療方案，給予注射用順鉑（山東羅欣藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20046375，規(guī)格為每支10 mg）50 mg/m2+500 mL 0.9%氯化鈉注射液緩慢靜脈滴注，第1天；依托泊苷注射液（華潤(rùn)雙鶴藥業(yè)股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H11021801，規(guī)格為每支5 mL∶0.1 g）120 mg/ m2+500 mL 0.9%氯化鈉注射液緩慢靜脈滴注，第1 天至第3 天。以21 d 為1 個(gè)化療周期，1 個(gè)化療周期結(jié)束后休息7 d，觀察組患者在對(duì)照組治療基礎(chǔ)上加用消癌平注射液（南京圣和藥業(yè)有限公司，規(guī)格為每支20 mL，國(guó)藥準(zhǔn)字Z20025868）60 mL +250 mL 0.9%氯化鈉注射液靜脈滴注，滴注時(shí)間60～90 min。以21 d為1個(gè)化療周期，在化療周期的第1天至第14天每日給藥1次。兩組均連續(xù)治療4個(gè)周期。

1.3 觀察指標(biāo)與療效判定標(biāo)準(zhǔn)

腫瘤標(biāo)志物水平：分別于治療開始前、治療結(jié)束后1 d 采集空腹靜脈血各3 mL，采用TD-5M 型實(shí)驗(yàn)室高速離心機(jī)（山東博科醫(yī)學(xué)儀器廠）離心（離心半徑5 cm，轉(zhuǎn)速5 000 r/min）15 min。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物水平，包括糖類抗原199（CA199）、糖類抗原153（CA153）、人細(xì)胞角蛋白21-1片段（CYFRA21-1）水平，檢測(cè)儀器為HED-SY96S型多功能酶標(biāo)儀（山東霍爾德科技公司），試劑盒由深圳芬德生物技術(shù)公司提供。

2）免疫功能指標(biāo)：取血清上清液，采用FACS Canto10型熒光流式細(xì)胞儀（美國(guó)BD公司）檢測(cè)患者的T淋巴細(xì)胞亞群CD3+，CD4+，CD8+水平，計(jì)算CD4+/CD8+，試劑盒由上海康朗生物技術(shù)公司提供，將10 μL CD3+，CD4+，CD8+試劑加入各指標(biāo)檢測(cè)管中，分別加入抗凝血酶100 μL，并設(shè)立同型對(duì)照管，振蕩均勻，避光室溫孵育20 min。加入2 mL 溶血素，振蕩均勻，避光室溫孵育5 min，離心（轉(zhuǎn)速1 000 r/min）5 min，棄去上清液，加入2 mL 磷酸鹽緩沖液，離心（轉(zhuǎn)速1 000 r/min）5 min，棄去上清液，再加入300 μL 磷酸鹽緩沖液，混勻，然后采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)。miR-210 和miR-101 水平：采用逆轉(zhuǎn)錄合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）法提取細(xì)胞總RNA，檢測(cè)RNA 純度、含量，逆轉(zhuǎn)錄處理后獲得cDNA，采用Primer 5.0軟件設(shè)計(jì)引物，采用2-ΔΔCt方法計(jì)算（內(nèi)參U6），采用2-ΔΔCt法計(jì)算。

療效判定［9］：完全緩解（CR），治療4 個(gè)周期后，1 個(gè)月內(nèi)CT 探查顯示腫瘤病灶完全消退；部分緩解（PR），療程結(jié)束后1 個(gè)月內(nèi)，CT 探查腫瘤病灶減小超過50%；穩(wěn)定（SD），療程結(jié)束后1 個(gè)月內(nèi)，患者影像學(xué)檢查癌癥病灶縮小不超過50%，增大不超過25%；進(jìn)展（PD），療程結(jié)束后1 個(gè)月內(nèi)，CT 探查病灶無減小或有增大。客觀緩解（ORR）=CR+PR；疾病控制（DCR）=CR+PR+SD。

安全性：統(tǒng)計(jì)并比較兩組患者治療期間惡心嘔吐、腹瀉、消化道出血、關(guān)節(jié)痛等不良反應(yīng)發(fā)生情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 25.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析。計(jì)量資料符合正態(tài)分布和方差齊性規(guī)律以表示，行t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，行χ2檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

結(jié)果見表2至表6。

表2 兩組患者腫瘤標(biāo)志物水平比較（，U/L，n=59）Tab.2 Comparison of tumor marker levels between the two groups（，U/L，n=59）

表2 兩組患者腫瘤標(biāo)志物水平比較（，U/L，n=59）Tab.2 Comparison of tumor marker levels between the two groups（，U/L，n=59）

注：與本組治療前比較，*P ＜0.05。表3和表4同。Note：Compared with those before treatment，*P ＜ 0.05（for Tab.2-4）.

表3 兩組患者miR-210和miR-101表達(dá)水平比較（，ng/L，n=59）Tab.3 Comparison of miR-210 and miR-101 expression levels between the two groups（，ng/L，n=59）

表3 兩組患者miR-210和miR-101表達(dá)水平比較（，ng/L，n=59）Tab.3 Comparison of miR-210 and miR-101 expression levels between the two groups（，ng/L，n=59）

表4 兩組患者免疫功能指標(biāo)比較（，n=59）Tab.4 Comparison of immune function indexes between the two groups（，n=59）

表4 兩組患者免疫功能指標(biāo)比較（，n=59）Tab.4 Comparison of immune function indexes between the two groups（，n=59）

表5 兩組患者臨床療效比較［例（%），n=59］Tab.5 Comparison of clinical efficacy between the two groups［case（%），n=59］

表6 兩組患者不良反應(yīng)發(fā)生情況比較［例（%），n=59］Tab.6 Comparison of the incidence of adverse reactions between the two groups［case（%），n=59］

3 討論

對(duì)于有手術(shù)治療指征的早中期NSCLC 患者，IUVATS 肺葉切除術(shù)仍為首選治療方案，為了提高術(shù)后預(yù)后效果和生存周期，術(shù)后需行輔助化療［10］。EP 方案為NSCLC 常用一線化療方案，即給予抗癌藥物依托泊苷和順鉑抑制及殺滅癌細(xì)胞，兩藥聯(lián)用能從不同作用機(jī)制和途徑發(fā)揮協(xié)同增效作用。但常規(guī)化療藥物的毒性較大，殺滅癌細(xì)胞的同時(shí)對(duì)機(jī)體正常組織的損傷較大，患者耐受性較低，且不良反應(yīng)影響化療效果，破壞免疫功能系統(tǒng)［11］。

中醫(yī)認(rèn)為，NSCLC 屬“癌病”“胸痛”“咳嗽”病變范疇，為正氣虧虛、外邪侵肺、臟腑失調(diào)等導(dǎo)致的邪積胸中、阻塞氣逆、痰血瘀滯等遂結(jié)成塊而發(fā)病，病機(jī)根本在氣陰兩虛、熱毒侵犯、痰瘀互結(jié)，故應(yīng)以清熱解毒、化痰軟堅(jiān)、扶正固本為主要治療原則［12］。觀察組患者增加消癌平治療，ORR 和DCR 均顯著升高，表明消癌平在NSCLC 術(shù)后輔助化療中有良好應(yīng)用價(jià)值。消癌平是中藥通關(guān)藤的活性提取成分。通關(guān)藤歸肺經(jīng)，具有清熱解毒、化痰通絡(luò)之功效，可有效對(duì)抗NSCLC 的熱毒侵犯、痰瘀互結(jié)［13］。通關(guān)藤提取物活性成分包括多種有機(jī)酸、生物堿、皂苷、多糖類成分。其中，綠原酸、咖啡酸等有機(jī)酸具有抗癌、抗病毒、抗菌和鎮(zhèn)痛作用；生物堿可促進(jìn)生長(zhǎng)抑素的分泌作用，抑制腫瘤細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡［14］；多糖類成分能清除機(jī)體氧自由基，減輕氧化應(yīng)激損傷；皂苷類活性成分可增強(qiáng)機(jī)體的免疫力，提高機(jī)體的活動(dòng)能力，改善術(shù)后的乏力、氣虛、神疲等不適感［15］。故從中醫(yī)理論和現(xiàn)代藥理學(xué)角度均證實(shí)消癌平對(duì)NSCLC術(shù)后的輔助治療效果良好。

CD3+是細(xì)胞免疫的主要組成部分，而CD4+主要起調(diào)節(jié)作用，CD8+為細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞，具有抑制CD4+及誘導(dǎo)靶細(xì)胞死亡的作用［16］。NSCLC 患者受癌細(xì)胞增殖及化療藥物治療的影響，免疫功能處于較低水平，表現(xiàn) 為CD3+，CD4+，CD8+等細(xì)胞免疫指標(biāo)的異常表達(dá)［17］。本研究中，觀察組患者治療后的CD3+，CD4+，CD4+/CD8+表達(dá)水平均顯著高于對(duì)照組，CD8+表達(dá)水平顯著低于對(duì)照組，表明消癌平能輔助改善患者的免疫功能。在癌癥發(fā)病過程中伴隨著多種血清學(xué)指標(biāo)水平的異常改變［18］，miR-210是微小RNA家族中的一員，在多種生物學(xué)過程中起重要作用。有報(bào)道顯示，miR-210與炎性損傷、癌細(xì)胞增殖有一定關(guān)聯(lián)，可通過抑制腫瘤細(xì)胞促凋亡基因的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖轉(zhuǎn)移［19］。miR-101 在NSCLC 患者中呈高表達(dá)，在肺上皮細(xì)胞中作為促癌炎性因子促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和癌細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移，在腫瘤病情的進(jìn)展中有重要調(diào)控作用［20］。本研究中，觀察組患者治療后的miR-210和miR-101表達(dá)水平均顯著低于對(duì)照組，表明消癌平的輔助化療能有效抑制上述指標(biāo)的表達(dá)，進(jìn)一步證實(shí)消癌平在NSCLC術(shù)后輔助化療中的良好作用。觀察組聯(lián)用消癌平治療的不良反應(yīng)未顯著增加，提示安全性良好。

綜上所述，IUVATS 肺葉切除術(shù)聯(lián)合消癌平治療NSCLC 的臨床療效良好，能降低患者的腫瘤標(biāo)志物水平，增強(qiáng)免疫力，抑制miR-210和miR-101的表達(dá)，且治療安全性較好。