哮喘患兒外周血T淋巴細胞亞群、IL-5、IL-25水平變化及其與ACT評分的相關性研究

羅婷婷，胡夢嬌，趙靜利，程雨嘉，李青

寶雞市人民醫院兒科，陜西 寶雞 721000

支氣管哮喘屬于兒童慢性呼吸系統多發病，可對人體健康造成嚴重損害。有調查顯示，全球哮喘者有3億多，其中我國臨床發病率約為16%[1]。相關研究表明，Th1/Th2型免疫失衡(其中Th2優勢應答)為導致哮喘氣道炎癥反應的基礎[2]。而人體白介素25(IL-25)屬于Th2細胞因子，主要由肥大細胞以及Th2細胞分泌。當前研究指出，IL-25能夠協同Th2類有關細胞因子，與機體免疫反應中發揮重要作用[3]。亦有研究指出，白介素-5(IL-5)驅動的相應嗜酸性粒細胞(EOS)計數增多性呼吸道炎癥為大部分哮喘患者共同特征[4]。近年來隨著臨床研究不斷深入，已證實人體T淋巴細胞亞群(包括Th17細胞以及調節性T細胞等)能夠參與氣道炎癥反應，其數量及功能失衡與哮喘的出現、病程進展存在緊密聯系[5]。當前研究主要集中在對哮喘患者淋巴細胞亞群與相關細胞因子變化方面，關于其與哮喘病情控制關系的研究較少。為此，本文旨在探究哮喘患兒外周血T淋巴細胞亞群、IL-5、IL-25水平與哮喘控制測試(ACT)評分的相關性，希望為臨床提供一定指導依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2017年5月至2020年6月寶雞市人民醫院收治的115例哮喘患兒作為觀察組。納入標準：(1)符合《支氣管哮喘防治指南》[6]中有關診斷標準；(2)4～14周歲；(3)住院患兒；(4)家屬對本次研究知情，自愿簽署知情同意書。排除標準：(1)合并呼吸衰竭、肺部感染或者先天性心臟病等；(2)支氣管畸形或者異物吸入者；(3)合并免疫系統疾病或者內分泌疾病等；(4)腫瘤患者。另選取同期在我院體檢的50例健康兒童作為對照組。觀察組中男性64例，女性51例；年齡4～14歲，平均(7.65±1.28)歲；體質量(22.78±4.06)kg。對照組中男性28例，女性22例；年齡4～14歲，平均(7.39±1.26)歲；體質量(22.95±4.13)kg。兩組兒童的性別、年齡及體質量比較差異均無統計學意義(P＞0.05)，具有可比性。哮喘患兒依據臨床表現分為緩解期組47例和急性發作期組68例。本研究經我院醫學倫理委員會批注。

1.2 方法(1)檢測方法：抽取對照組兒童入院檢查時、觀察組入院后空腹靜脈血5 mL，采取3 000 r/min速率予以離心處理，取血清。通過八色流式細胞儀(型號：MACSQuant，購自德國Miltenyi Biotec)完成T淋巴細胞亞群(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)的檢測。通過Thermo Multiskan MK3酶標儀，使用酶聯免疫吸附試驗——雙抗體夾心法進行IL-5與IL-25水平檢測，相關試劑盒來自美國R&D公司，嚴格依據說明書完成操作過程。(2)采取哮喘控制測試評分表(ACT)[7]評估患兒哮喘控制情況，總分25分，控制良好：25分；基本控制：20～24分；未得到控制：＜20分。

1.3 觀察指標比較緩解期組、急性發作期組與對照組兒童外周血T淋巴細胞亞群(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)、IL-5、IL-25水平；比較緩解期組、急性發作期組兒童ACT評分。

1.4 統計學方法應用SPSS22.0統計軟件分析數據。計數資料組間比較采用χ2檢驗；計量資料符合正態分布，以均數±標準差(±s)表示，組間兩兩比較采用獨立樣本t檢驗，多組比較采用單因素方差分析法，多組兩兩比較采用LSD-t檢驗法；采取Pearson相關性檢驗法分析T淋巴細胞亞群、IL-5、IL-25與ACT評分的相關性。檢驗水準α(雙側)=0.05，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 緩解期組、急性發作期組與對照組兒童的T淋巴細胞亞群比較三組兒童的CD3+比較差異無統計學意義(P＞0.05)；急性發作期組兒童的CD8+明顯低于緩解期組和對照組，且緩解期組明顯低于對照組，差異均有統計學意義(P＜0.05)；急性發作期組兒童的CD4+、CD4+/CD8+明顯高于解期組和對照組，且緩解期組明顯高于對照組，差異均有統計學意義(P＜0.05)，見表1。

表1 緩解期組、急性發作期組與對照組兒童的T淋巴細胞亞群比較(±s)Table 1 Comparison of T lymphocyte subsets among the remission stage group,the acute attack group and the control group(±s)

表1 緩解期組、急性發作期組與對照組兒童的T淋巴細胞亞群比較(±s)Table 1 Comparison of T lymphocyte subsets among the remission stage group,the acute attack group and the control group(±s)

注：與對照組比較，a P＜0.05；與緩解期組比較，b P＜0.05。Note:Compared with the control group,a P＜0.05;compared with the remission stage group,b P＜0.05.

組別急性發作期組緩解期組對照組F值P值例數68 47 50 CD3+(%)65.01±10.57 65.24±10.62 65.92±10.73 0.109 0.897 CD4+(%)54.78±7.06ab 51.16±7.75a 47.61±5.02 16.478 0.001 CD8+(%)37.02±5.24ab 40.19±6.23a 43.05±5.03 17.656 0.001 CD4+/CD8+1.57±0.28ab 1.40±0.25a 1.18±0.17 37.201 0.001

2.2 緩解期組、急性發作期組與對照組兒童的IL-5、IL-25水平比較急性發作期組兒童的IL-5、IL-25水平明顯高于緩解期組和對照組，且緩解期組明顯高于對照組，差異均有統計學意義(P＜0.05)，見表2。

表2 緩解期組、急性發作期組與對照組兒童的IL-5、IL-25水平比較(±s)Table 2 Comparison of IL-5 and IL-25 levels among the remission stage group,the acute attack group and the control group(±s)

表2 緩解期組、急性發作期組與對照組兒童的IL-5、IL-25水平比較(±s)Table 2 Comparison of IL-5 and IL-25 levels among the remission stage group,the acute attack group and the control group(±s)

注：與對照組比較，a P＜0.05；與緩解期組比較，b P＜0.05。Note:Compared with the control group,a P＜0.05;compared with the remission stage group,b P＜0.05.

組別急性發作期組緩解期組對照組F值P值IL-25(pg/mL)57.24±8.96ab 48.73±8.05a 44.68±7.12 36.505 0.001例數68 47 50 IL-5(pg/mL)74.92±12.13ab 67.38±10.54a 50.86±9.85 69.476 0.001

2.3 緩解期組、急性發作期組兒童的ACT評分比較急性發作期組兒童的ACT評分為(16.15±2.76)分，明顯低于緩解期組的(20.84±2.37)分，差異有統計學意義(t=9.479，P＜0.05)。

2.4 T淋巴細胞亞群、IL-5、IL-25水平與ACT評分相關性經Pearson相關性分析結果顯示，CD8+與ACT評分呈顯著正相關(P＜0.05)，CD4+、CD4+/CD8+、IL-5、IL-25與ACT評分呈顯著負相關(P＜0.05)，見表3。

表3 T淋巴細胞亞群、IL-5、IL-25水平與ACT評分相關性Table 3 Correlation of T lymphocyte subsets,IL-5,and IL-25 levels with ACT score

3 討論

當前，臨床尚未明確哮喘詳細發病機制。近年來，免疫機制成為了哮喘患者發病中的一個研究熱點，希望為哮喘診治提供可靠指導。相關研究指出，哮喘發病以及發展和細胞免疫失衡具有緊密聯系[8]。人體T淋巴細胞是細胞免疫反應主要執行者，其在受刺激信號影響之后，能夠分化為各種亞群，T淋巴細胞亞群失衡于人體哮喘發生中發揮著重要作用[9]。通常情況下，T淋巴細胞依據功能分為抑制性T細胞(Ts)、輔助性T細胞(Th)以及殺傷T細胞(Tc)等，依據表面標志可以分為CD4+以及CD8+兩大亞群，其中CD4+屬于Th，CD8+屬于Ts/Tc。現階段，大部分學者認可的觀點是哮喘患者處于Th1/Th2亞群失衡以及Th2功能亢狀態，機體免疫平衡受損，導致哮喘發生[10]。當前亦有研究表明，CD8+T細胞以及CD8+CD28-T細胞均可參與哮喘患者免疫調節[11]。然而相關臨床資料非常少。CD4+/CD8+值平衡為保持機體免疫平衡主要環節，當人體受到外界變應原刺激后，可使外周T淋巴細胞亞群產生異常變化，其中速發性哮喘患者以CD8+降低較為常見，遲發性哮喘則以CD4+升高較為多見[12]。本研究中CD8+為：急性發作期組＜緩解期組＜對照組，CD4+、CD4+/CD8+為：急性發作期組＞緩解期組＞對照組，組間比較差異有統計學意義，與上述研究觀點基本一致。說明哮喘患兒外周血T淋巴細胞亞群失衡，其中以急性發作期患兒CD8+減少、CD4+與CD4+/CD8+異常升高更明顯。以往研究表明，CD8+細胞能夠通過抑制免疫球蛋白E(IgE)分泌、糾正Th1/Th2失衡以及抑制氣道炎癥等方式對哮喘起到保護作用[13]。本研究中CD8+在不同臨床表現患兒中比較結果反向支持了上述研究理論。

IL-25為目前新發現的一種Th2細胞因子，能夠導致Th2細胞因子于人體氣道中增多、上皮細胞增生以及嗜酸性粒細胞(EOS)浸潤，使得黏液分泌增多，造成氣道高反應性[14]。相關研究指出，哮喘患者血清里面IL-25表達水平升高，其能對氣道內部平滑肌細胞增殖起到促進作用，為引起氣道重塑重要影響因素[15-16]。本研究中，哮喘患兒IL-25水平明顯高于對照組，且急性發作期組明顯高于緩解期組，表明哮喘患兒出現了IL-25表達水平異常升高表現，且急性發作期患兒升高更顯著。主要由于Th2細胞大量增生、亢進造成正調節因子IL-25表達上調，而哮喘進入緩解期后，Th1/Th2失衡有所改善。有研究對小鼠采取抗IL-5抗體，發現可有效抑制抗原所致呼吸道EOS浸潤，同時該變化具有劑量依賴性[17]。亦有研究表明，IL-5可對EOS分化、成熟以及大量聚集起到促進作用，參與哮喘患者的呼吸道重塑[18]。本研究中IL-5為：急性發作期組＞緩解期組＞對照組，組間差異有統計學意義，與劉函曄等[19]研究觀點一致。說明哮喘患兒IL-5水平呈現異常升高變化，其中急性發作期患兒表現更嚴重。分析原因：EOS屬于哮喘發生重要炎性細胞，IL-5為其特異分化因子，而哮喘急性發作期EOS炎癥更嚴重，因此IL-5水平更高[20]。本研究相關性分析發現，CD8+、CD4+、CD4+/CD8+、IL-5、IL-25均和患兒ACT評分顯著相關，哮喘控制越好，CD4+、CD4+/CD8+、IL-5、IL-25水平越低，CD8+升高，臨床可通過其檢測評估哮喘患兒病情控制情況。

綜上，哮喘患兒出現了T淋巴細胞亞群失衡改變，且IL-5、IL-25呈現異常升高趨勢，其中以急性發作期更嚴重，CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、IL-5、IL-25表達水平和患兒ACT評分存在顯著相關性，臨床可根據其檢測有效評估患兒病情。本研究具有樣本量較少、為單中心研究等局限性，有待后續大樣本與多中心研究進一步補充、完善。