舌下特異性免疫治療對變應性鼻炎患者Treg/Th17細胞平衡的影響

張文娟，張 林，劉亞輝

(廈門醫學院附屬第二醫院耳鼻喉科，福建 廈門 361021)

變應性鼻炎(AR)是耳鼻喉科的常見疾病，是由免疫球蛋白E(IgE)介導的Ⅰ型變態反應。塵螨是AR中最常見的誘發因素，在AR患者中約有70%在變應原皮膚點刺試驗中呈現塵螨陽性，塵螨在日常生活環境中廣泛分布，因而患者很難避免與其接觸，而藥物治療只能暫時緩解癥狀，對控制疾病發展的效果并不理想[1-2]。特異性免疫治療(SIT)是針對病因的治療方法，通過特異性致敏變應原的持續刺激，使機體對變應原的刺激產生耐受，進而達到阻斷疾病發展的目的。SIT包括皮下注射特異性免疫治療(SCIT)和舌下特異性免疫治療(SLIT)，而SLIT具有安全性高、使用方便等優點。本研究旨在探究SLIT對AR患者調節性T細胞(Treg)/輔助性T細胞17(Th17)細胞平衡的影響。

1 資料與方法

1.1一般資料：將2019年12月～2021年2月廈門醫學院附屬第二醫院收治的64例AR患者作為研究對象，按照隨機數字表法分為觀察組和對照組，各32例。觀察組男17例，女15例；年齡18～54歲，平均(35.12±10.57)歲。對照組男16例，女16例；年齡18～52歲，平均(35.07±10.49)歲。兩組性別、年齡等一般資料差異無統計學意義(P>0.05)，組間具有可比性。本研究經本院倫理委員會審核同意，患者及其家屬對本研究的過程知情，并簽署知情同意書。

1.2選擇標準：納入標準：①入選患者均符合《變應性鼻炎的診治原則和推薦方案(2004年，蘭州)》[3]中的診斷標準；②鼻黏膜蒼白、充血或腫脹；③塵螨提取物皮膚點刺試驗呈陽性反應，其他變應原為陰性；④就診前1個月內無上呼吸道感染病史，無抗組胺類藥物、激素、免疫治療等用藥史。排除標準：①合并患有哮喘；②患有急慢性鼻竇炎；③患有自身免疫系統疾病或其他變態反應性疾病；④患有精神疾病或其他嚴重器質性疾病等。

1.3治療方法：對照組給予氯雷他定片(上海先靈葆雅制藥有限公司，國藥準字H10970410，10 mg/片)治療，1片/次，1次/d，同時給予丙酸氟替卡松鼻噴霧劑(GlaxoSmithKline,S.A，批準文號H20140117，50 μg/噴)治療，2噴/側，1次/d。觀察組在對照組的基礎上，給予粉塵螨滴劑SLIT治療(浙江我武生物科技股份有限公司，國藥準字S20060012，2 ml/瓶)治療，每天睡前將粉塵螨滴劑滴于舌下，含1 min后吞服，第1周使用粉塵螨滴劑1號(1 μg/ml)，第1～7天分別舌下含服1、2、3、4、6、8、10滴；第2周和第3周分別使用粉塵螨滴劑2號(10 μg/ml)和3號(100 μg/ml)，用藥劑量同1號；第4周起使用粉塵螨滴劑4號(333 μg/ml)，每天舌下含服3滴；第6周起使用粉塵螨滴劑5號(1 000 μg/ml)，每天舌下含服2滴，維持此劑量至治療結束。2組均治療1年。

1.4觀察指標與方法：①分別于治療前后采集兩組患者晨起空腹肘靜脈血5 ml抗凝，加入CD4-FITC、CD25-PE及Foxp3-PEcy5抗體標記Treg細胞，加入CD4-FITC和IL17-PE抗體標記Th17細胞，之后采用流式細胞儀(美國RD公司)檢測外周血中Treg和Th17的占比；②分別于治療前后采集兩組患者晨起空腹靜脈血5 ml于促凝管中，以1 000 r/min離心5 min，取上層血清，采用ELISA法檢測白細胞介素(IL)-17、轉化生長因子(TGF)-β1、IL-35水平和血清塵螨特異性免疫球蛋白(sIg)E、sIgG4水平，操作步驟嚴格按照試劑盒(上海喬羽生物科技有限公司)說明書進行；③比較兩組患者治療前后的癥狀評分，癥狀評分包括鼻癢、鼻塞、噴嚏和流涕4個方面，每個癥狀分為無癥狀(0分)、癥狀輕微(1分)、中度可忍受(2分)和重度難以忍受(3分)4個程度，評分越高癥狀越嚴重；④比較兩組患者在治療過程中相關不良反應發生情況，包括口腔干燥、舌下腫脹、嗜睡、頭暈、瘙癢和全身性蕁麻疹。

1.5統計學方法：采用SPSS22.0軟件進行t檢驗及χ2檢驗。

2 結果

2.1兩組治療前后外周血中Treg細胞與Th17細胞占比比較：與治療前比較，治療后兩組Treg細胞占比顯著增大，Th17細胞占比顯著減小；與對照組比較，治療后觀察組Treg細胞占比顯著大于對照組，Th17細胞占比顯著小于對照組，差異均有統計學意義(均P<0.01)。見表1。

2.2兩組治療前后血清IL-17、TGF-β1及IL-35水平比較：與治療前比較，治療后兩組血清IL-17水平顯著降低，TGF-β1及IL-35水平顯著升高；與對照組比較，治療后觀察組血清IL-17水平顯著降低，TGF-β1及IL-35水平顯著升高，差異均有統計學意義(均P<0.05或P<0.01)。見表1。

表1 兩組治療前后血清IL-17、TGF-β1及IL-35水平比較

2.3兩組治療前后血清sIgE和sIgG4水平比較：與治療前比較，治療后兩組血清sIgE水平顯著降低，sIgG4水平顯著升高；與對照組比較，治療后觀察組血清sIgE水平顯著低于對照組，sIgG4水平顯著高于對照組，差異均有統計學意義(均P<0.01)。見表2。

表2 兩組治療前后血清sIgE和sIgG4水平比較

2.4兩組治療前后癥狀評分比較：與治療前比較，治療后兩組鼻癢、鼻塞、噴嚏、流涕的評分及總評分均顯著降低；與對照組比較，治療后觀察組鼻癢、鼻塞、噴嚏、流涕的評分及總評分均顯著低于對照組，差異有統計學意義(P<0.01)。見表3。

表3 兩組治療前后癥狀評分比較分，n=32)

2.5兩組不良反應發生情況比較：兩組各項不良反應的發生率比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表4。

表4 兩組不良反應發生情況比較[n(%),n=32]

3 討論

近年來，AR的發病率呈上升趨勢，是耳鼻喉科常見的難治性疾病，易發展為哮喘且易引發鼻息肉、鼻竇炎等疾病，嚴重影響患者的生活質量[4]。免疫-炎癥機制為AR發病機制的主流學說，過去認為Th2功能亢進造成的Th1/Th2失衡為AR的發病機制，但隨著人們對AR的不斷深入研究，Th1/Th2失衡已不能完全解釋AR的發生發展，而Treg和Th17是機體內調控炎性反應的CD4+T細胞亞群，Treg/Th17免疫失衡與AR病情的嚴重程度密切相關[5-6]。

粉塵螨滴劑是SLIT制劑的一種，由粉塵螨的抗原活性蛋白制成，其免疫機制可能為通過誘導機體生成特異性抗體，使其與致敏原結合，從而阻斷致敏原與嗜堿性粒細胞和肥大細胞的相互作用，阻斷Ⅰ型變態反應的發生，同時可抑制T淋巴細胞和嗜酸性粒細胞在靶器官處聚集，抑制淋巴細胞的脫顆粒變化，并對免疫系統產生調節作用[7-8]。有研究[9]表明，與健康人比較，AR患者體內會出現不同程度的Treg/Th17失衡，主要表現為Th17細胞應答增強，Treg細胞應答減弱。本研究結果提示SLIT可有效促進AR患者Treg/Th17恢復平衡，比單獨應用常規治療的效果好。IL-17是Th17細胞分泌的重要細胞因子，具有強促炎作用，參與IgE介導的免疫反應，促進IgE的分泌，同時高度表達的IL-17可放大免疫級聯反應，在AR患者的血清中含量較高；TGF-β1主要來源于Treg細胞，可通過細胞間的接觸直接抑制抗原特異性的免疫應答，促進機體產生免疫耐受，在AR患者的血清中含量較低[10]。IL-35是一種具有免疫抑制活性的細胞因子，可直接抑制Th17細胞的增殖分化，同時可增強Treg細胞的增殖和免疫抑制功能，對維持Treg/Th17平衡有重要意義，在AR患者的血清中含量較低[11]。本研究結果提示SLIT治療AR可降低Th17相關細胞因子水平，提高Treg相關細胞因子水平，促進Treg/Th17恢復平衡，治療效果優于單獨常規治療。

有報道[12-13]稱，AR患者因變應原刺激，可出現肥大細胞脫顆粒現象，而肥大細胞依賴于IgE相關的免疫應答，而sIgG4可抑制變應原和效應細胞表面的IgE結合，進而阻止肥大細胞與嗜堿性細胞釋放炎性因子；此外sIgE在健康人和非變應性鼻炎患者中均呈陰性，在AR患者中呈陽性。本研究結果提示SLIT治療AR可調節患者的免疫應答，其作用強于單獨常規治療。有研究表明，粉塵螨滴劑用于治療AR可有效緩解臨床癥狀，安全性高，不僅可用于成人，還可用于兒童，兒童及成年患者在使用粉塵螨滴劑的過程中均未出現全身性嚴重不良反應，SLIT雖與劑量相關，但高劑量給藥也不會顯著增加發生全身或局部不良反應的概率[14-16]。本研究結果提示SLIT可顯著改善AR癥狀，效果優于單獨常規治療，且安全性高。

綜上所述，SLIT可促進AR患者恢復Treg/Th17平衡，降低血清炎性因子水平，調節免疫應答，改善臨床癥狀，治療效果優于單獨常規治療，且具有較高的安全性。但本研究的研究時間有限，沒有探究SLIT對AR患者的長期療效，因此臨床上有待進一步研究。