枳術便秘通丸成型工藝及質量控制研究

何英蒙，賴 慧，米曉琴，蒲清榮，趙春妮，梁 剛，趙福蘭△

（西南醫科大學附屬中醫醫院 1.藥劑科，2.制劑室，3.腫瘤科，四川 瀘州 646000）

便秘是導致肛腸疾病、胃腸神經功能紊亂、心腦血管疾病、直腸癌等發生的重要原因[1］，更是惡性腫瘤患者在化學藥物治療（簡稱化療）過程中常出現的副反應之一[2］。晚期癌癥患者的便秘率為40%～60%[3-4］。常見的便秘治療藥物雖能有效緩解短期癥狀，但長期使用可能會導致其他不良反應，如腹瀉和代謝紊亂[5-6］。枳術便秘通丸是以古方枳術丸結合臨床加減而成，主要由大黃、麩炒枳實、麩炒白術等6味中藥材組方，具有健脾化濕、行氣通便功效。該方自2016年用于臨床，不僅能有效緩解化療過程中出現的便秘癥狀，同時還可減輕腹脹腹痛、惡心嘔吐等伴隨癥狀，改善癌癥患者的生活質量[7］。本研究中初步探討了其成型工藝和質控標準，為后續規模化生產和質量控制提供依據。現報道如下。

1 儀器與試藥

儀器：ZEJ-Z型全自動中型制丸機（甘肅恒悅制藥設備有限公司）；LC-20AT型高效液相色譜儀（日本Shimadzu公司）；101-2AB型電熱鼓風干燥箱（杭州江銳儀器設備有限公司）；JA-Series電子天平（常州市幸運電子設備有限公司）；JPCQ1020型超聲波提取器（武漢嘉鵬電子有限公司）；DOODLOOK-1000型薄層色譜成像系統（上海科哲生化科技有限公司）。

試藥：大黃、麩炒枳實、麩炒白術、木香、茯苓、砂仁飲片（成都吉安康藥業有限公司，批號分別為200101，200501，200401，200401，200401，00501）。大黃素對照品（批號為110756-201913，含量為89.7%）、大黃酚對照品（批號為110796-201922，含量為99.4%）、辛弗林對照品（批號為110727-202110，含量為99.5%），均購自中國食品藥品檢定研究院；淀粉（批號為200907）、羧甲基纖維素鈉（CMC-Na，批號為201108）、羥丙纖維素（HPC，批號為201011），均購自淄博豐匯生物科技有限公司；糊精（漢中秦發糊精責任有限公司，批號為200606）；硅膠G薄層板（青島海洋化工廠）；甲醇為色譜純；其余試劑均為分析純；水為純化水。

2 方法與結果

2.1 成型工藝

2.1.1 制法

按處方量稱取大黃60 g，麩炒枳實、麩炒白術、木香、茯苓各150 g，砂仁80 g，粉碎，過篩，混合均勻，得混合藥粉；黏合劑用熱水溶解后與混合藥粉攪拌均勻；采用塑制法制丸、干燥，即得。流程見圖1。

圖1 成型工藝流程圖Fig.1 Flow chart of forming process

2.1.2 黏合劑選擇

按處方量稱取混合藥粉5份，每份740 g；分別取水740 g及淀粉、糊精、CMC-Na、HPC各178 g，用593 mL熱水溶解后作為黏合劑，充分拌勻后轉入制丸機，觀察中藥條的性狀及成丸情況，烘干，參照2020年版《中國藥典（四部）》溶散時限測定法測定溶散時限。

以純化水、CMC-Na和HPC為黏合劑時，藥條成丸性較差；以淀粉或糊精為黏合劑時，藥條韌性良好，均可成丸。但以淀粉為黏合劑，所制得的丸劑呈棕黃色，表面粗糙且溶散時限較長；以糊精為黏合劑所制得的丸劑呈棕黃褐色，表面較光滑，溶散時限較短，故選擇糊精。各黏合劑成丸情況及溶散時限詳見表1。

表1 不同黏合劑下的成丸情況和丸劑溶散時限Tab.1 Pellet formation and dissolution time limit under different adhesives

2.1.3 成型工藝優化

以糊精漿體積分數[因素A，糊精漿體積分數（%）=糊精量/純水量×100%］、藥粉與水質量比（因素B）、干燥時間（因素C）為考察因素，以丸劑溶散時限和含水量（參照2020年版《中國藥典（四部）》水分測定法測定）的綜合評分（以綜合加權評分法[8-10］計算）為評價指標，采用L9（34）正交試驗優化。綜合評分=溶散時限最小值/溶散時限×0.5+含水量最小值/含水量×0.5，綜合評分越高表明丸劑質量越好。因素與水平見表2。

表2 因素與水平Tab.2 Factors and their levels

正交試驗設計與結果見表3。枳術便秘通丸成型工藝的3個主要因素影響大小順序依次為A＞B＞C。由方差分析結果（表4）可知，3個因素均對成型工藝有顯著影響，最佳成型工藝為A2B1C3，即以30%糊精漿為黏合劑，藥粉∶純水為5∶3（m/m），干燥24 h所得產品最佳。

表3 L9（34）正交試驗設計與結果Tab.3 Design and results of the L9（34）orthogonal test

表4 方差分析結果Tab.4 Results of the ANOVA

2.1.4 驗證試驗

根據上述試驗結果，進行枳術便秘通丸成型工藝的驗證試驗。取滅菌后的藥粉混合，粉碎成細粉；糊精用0.6倍藥粉量的熱水溶解制成30%糊精漿，與藥粉混勻，使藥粉充分潤濕轉入制丸機，制丸，將濕丸粒轉入拋光機，50℃烘干24 h，選丸，即得。

2.2 質量標準

2.2.1 定性鑒別

麩炒枳實：取樣品5 g，研細，加甲醇20 mL，超聲（功率100 W，頻率20 kHz；下同）處理20 min，濾過，取續濾液，蒸干，殘渣加甲醇0.5 mL使溶解，即得供試品溶液。取辛弗林對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的對照品溶液。按枳術便秘通丸處方和工藝制備缺麩炒枳實的陰性樣品5 g，同供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。按2020年版《中國藥典（四部）》薄層色譜（TLC）法試驗，吸取上述溶液各2μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水（4∶1∶5，V/V/V）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以0.5%茚三酮乙醇溶液，105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上顯相同顏色斑點，陰性對照無干擾。詳見圖2。

圖2 薄層色譜圖1-3.Test solution 4 Synephrine reference solution 5 Negative reference solution 6.Reference medicinal materials solution of Atractylodis Macrocephalae Rhizoma A.Bran-fried Aurantii Fructus B.Bran-fried Atractylodis Macrocephalae RhizomaFig.2 TLC chromatograms

麩炒白術：取樣品5 g，研細，加正己烷10 mL，超聲處理15 min，濾過，取濾液，即得供試品溶液。取白術對照藥材0.5 g，精密稱定，加正己烷2 mL，同供試品溶液制備方法制成對照藥材溶液。按枳術便秘通丸處方和工藝制備缺麩炒白術的陰性樣品5 g，同供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。按2020年版《中國藥典（四部）》TLC法試驗，吸取上述溶液各10μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（50∶1，V/V）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，105℃加熱至斑點清晰。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應位置上顯相同顏色斑點，陰性對照無干擾。詳見圖2。

2.2.2 含量測定[11-14］

色譜條件：色譜柱為Kromasil C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相為甲醇-0.1%磷酸溶液（85∶15，V/V）；流速為1.0 mL/min；檢測波長為254 nm；柱溫為40℃；進樣量為10μL。

溶液制備：分別取大黃素、大黃酚對照品4.25，4.32 mg，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，搖勻，得混合對照品溶液。取樣品粉末0.5 g，精密稱定，置具塞圓底燒瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定質量，加熱回流1 h，放冷，再次稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液；精密量取10 mL，置圓底燒瓶中，揮去溶劑，加8%鹽酸溶液10 mL，超聲處理2 min；再加三氯甲烷10 mL，加熱回流1 h，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗滌容器并倒入分液漏斗中，分取三氯甲烷層，酸液再用三氯甲烷提取3次，每次10 mL，合并三氯甲烷液；加壓回收溶劑至干，殘渣加甲醇溶解，轉移至10 mL容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，經0.22μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得供試品溶液。按枳術便秘通丸處方和工藝制備缺大黃的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

適用性試驗與專屬性試驗：取上述混合對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液各適量，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄色譜圖。結果，理論板數按大黃素和大黃酚峰計應不低于3 000；分離度均大于1.5，基線分離良好；陰性對照品溶液在與混合對照品溶液色譜相同保留時間處無干擾峰，表明專屬性良好。詳見圖3。

圖3 高效液相色譜圖1.Emodin 2.Chrysophanol A.Mixed reference solution B.Test solution C.Negative reference solutionFig.3 HPLC chromatograms

線性關系考察：分別精密量取混合對照品溶液，制成系列混合對照品溶液。精密量取10μL，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以待測成分質量濃度（X，μg/mL）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸，得大黃素和大黃酚回歸方程分別為Y1=35 017X1-9 008.6（r=0.999 9）、Y2=54 345X2-3 280.9（r=0.999 9）。結果表明，大黃素和大黃酚質量濃度分別在0.848～34.01μg/mL和0.864～34.56μg/mL范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：取混合對照品溶液適量，按擬訂色譜條件連續進樣測定6次，記錄峰面積。結果，大黃素和大黃酚峰面積的RSD分別為0.12%和0.07%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取供試品溶液適量，分別于室溫下放置0，2，4，6，8，12，24 h時按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果，大黃素和大黃酚峰面積的RSD分別為0.34%和0.42%（n=7），表明供試品溶液在室溫放置24 h內基本穩定。

重復性試驗：精密稱取樣品適量，各6份，按擬訂方法制備供試品溶液，再按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算含量。結果，大黃素和大黃酚含量的RSD分別為1.70%和1.03%（n=6），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：取已知含量樣品適量，共9份，分別加入低、中、高質量濃度的混合對照品溶液，按擬訂方法制備供試品溶液，再按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算加樣回收率，結果見表5。

表5 加樣回收試驗結果（n=9）Tab.5 Results of the recovery test（n=9）

樣品含量測定：取樣品各適量，分別按擬訂方法制備供試品溶液，再按擬訂色譜條件進樣測定，平行3次，記錄峰面積并計算樣品含量，結果見表6。

表6 樣品含量測定結果（mg/g，n=3）Tab.6 Results of the content determination of emodin and chrysophanol in the samples（mg/g，n=3）

按2020年版《中國藥典（四部）》中藥品質量標準與指導原則9101“分析方法驗證指導原則”相關要求，以大黃素和大黃酚總量下浮20%計算，將本品的大黃素和大黃酚總含量定為不得少于0.466 mg/g。

3 討論

枳術便秘通丸處方作為經驗方已在臨床使用多年，治療脾虛氣滯所致的便秘效果顯著。與市場中其他同類制劑相比，枳術便秘通丸對化療或阿片類藥物等引起的脾虛氣滯型便秘療效尤其顯著，能同時起到健脾、化濕和行氣的作用。本課題組在原有組方的基礎上進行制劑工藝研究，優化丸劑成型工藝，便于患者服用、攜帶和保存。

制劑工藝過程中，考慮到砂仁含有揮發性成分，在滅菌時選擇乙醇密閉滅菌法；其他藥味采用電熱滅菌法，且滅菌后均符合微生物限度要求。本試驗中通過正交試驗優化確定的枳術便秘通丸自動化生產最佳成型工藝，相比于傳統手工泛丸，具有操作簡便、生產高效、質量與藥物療效穩定等優點。

在生產工藝的基礎上建立了麩炒枳實、麩炒白術專屬性強且簡便的TLC法，對比了3種不同展開系統，結果均顯示斑點清晰，分離效果良好，且陰性對照無干擾，可作為質量標準項下的鑒別方法。對枳術便秘通丸中大黃的有效成分進行定量控制，藥典中對大黃飲片的含量測定包括了大黃素、蘆薈大黃素、大黃酚、大黃酸和大黃素甲醚5種成分，但在實際檢測時發現，蘆薈大黃素和大黃酸的出峰時間接近，且由于制劑中含有其他藥材及輔料，可能對蘆薈大黃素和大黃酸的測定造成干擾，影響準確度。因此，參考文獻[14］等中的含量測定方法，最終以大黃素和大黃酚為指標，對枳術便秘通丸中大黃質量進行控制。

綜上所述，枳術便秘通丸成型工藝合理，所建標準可用于制劑的質量控制。