cHNSCC患者PD-L1、MMP1表達分析及與術后復發的關系*

靳書濱，劉曉燕，耿文華，焦建軍

邯鄲市中心醫院口腔頜面外科，河北邯鄲 056001

頭頸部皮膚鱗狀細胞癌(cHNSCC)發病率居惡性腫瘤第6位，有報道指出，2000年至2016年cHNSCC各個部位發病率均有所增加[1]。手術是治療cHNSCC患者的主要方案，但部分患者由于術后復發而導致治療失敗，生存率降低。目前臨床主要通過手術切緣病理性檢查評估cHNSCC患者術后復發風險，具有一定價值，但cHNSCC病理機制復雜，仍有部分患者手術切緣病理檢查陰性卻術后復發，尋找新的客觀指標評估患者術后復發風險具有重要價值。程序性細胞死亡蛋白配體-1(PD-L1)是近年來靶向免疫治療研究熱點，其免疫抑制作用與腫瘤轉移密切相關[2]，其陽性表達可能為術后復發的影響因素，但目前相關報道較少。基質金屬蛋白酶1(MMP1)具有降解細胞外基質作用[3]，可直接影響腫瘤細胞轉移、浸潤、增殖，對腫瘤惡性進展有促進作用，但關于其對術后復發的影響報道較少。基于此，本研究將本院cHNSCC患者納入研究，分析PD-L1、MMP1表達情況及對術后復發的影響，以期為臨床提供借鑒，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 將2020年5月至2021年8月該院收治的cHNSCC患者173例納入研究，男94例、女79例；年齡53～68歲、平均(60.43±3.52)歲。納入標準：符合cHNSCC的診斷標準[4]；首次發病；為原發性腫瘤且經病理組織活檢確診；預估生存期>6個月；年齡>18歲；行手術治療；術后隨訪資料完整。排除標準：合并嚴重心肺疾病；有放化療史；骨髓造血功能異常；合并全身系統性疾病。

1.2方法

1.2.1PD-L1、MMP1檢測 均以免疫組織化學染色法進行檢測，活檢組織標本經乙醇脫水、二甲苯透明、浸蠟處理，所有操作在組織處理機中進行。然后進行石蠟包埋、切片。對制備好的石蠟切片按常規免疫組織化學染色的步驟進行操作，最后用中性樹膠封片，顯微鏡下進行觀察。判定標準：隨機選取5個背景清晰、染色明確的視野，計算陽性細胞占全部細胞的百分比，若陽性細胞比例超過10%，則表明結果為陽性表達。

1.2.2術后復發觀察 患者均行cHNSCC根治術，術后根據患者實際情況決定是否進行靶向治療或放化療，隨訪6個月，以出現術后復發或遠處轉移為終點事件。

1.3觀察指標 (1)比較cHNSCC患者腫瘤組織與癌旁組織PD-L1、MMP1陽性表達情況。(2)比較不同臨床分期cHNSCC患者PD-L1、MMP1表達情況。(3)比較不同術后復發情況cHNSCC患者的一般資料，包括性別、年齡、臨床分期、合并癥、腫瘤部位、術后是否放化療、腫瘤浸潤深度及分化程度、淋巴結受累數目，PD-L1、MMP1陽性表達情況。(4)對cHNSCC患者復發的影響因素進行分析。(5)PD-L1、MMP1表達用于評估cHNSCC患者術后復發的價值。

1.4統計學處理 采用SPSS22.0軟件進行數據處理。計數資料以例數或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗；采用Logistic回歸分析cHNSCC患者術后復發的影響因素。計算PD-L1、MMP1陽性表達情況用于預測cHNSCC患者術后復發的靈敏度、特異度。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1cHNSCC患者PD-L1、MMP1陽性表達情況 cHNSCC患者腫瘤組織PD-L1、MMP1陽性表達率高于癌旁組織(P<0.05)，見表1。

表1 cHNSCC患者不同組織PD-L1、MMP1陽性表達情況比較[n(%)]

2.2不同臨床分期cHNSCC患者PD-L1、MMP1陽性表達情況比較 不同臨床分期cHNSCC患者腫瘤組織PD-L1、MMP1陽性表達率差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 不同臨床分期cHNSCC患者腫瘤組織PD-L1、MMP1陽性表達情況比較[n(%)]

2.3不同術后復發情況的cHNSCC患者臨床病理資料比較 隨訪6個月，173例cHNSCC患者中，術后復發49例作為復發組，未復發124例作為未復發組。復發組臨床分期、術后放化療、分化程度及PD-L1和MMP1的陽性表達情況與未復發組比較差異有統計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 不同術后復發情況cHNSCC患者臨床病理資料比較[n(%)]

2.4cHNSCC患者術后復發的影響因素分析 將臨床分期、術后放化療、分化程度，PD-L1、MMP1陽性表達情況進行多重共線性檢驗，發現臨床分期、術后放化療存在多重共線性(VIF>10)，手動移除術后放化療。以cHNSCC患者術后是否復發為因變量，以臨床分期、分化程度，PD-L1、MMP1陽性表達情況作為自變量，根據表4進行賦值，以Logistic回歸進行多因素分析，結果顯示，PD-L1、MMP1陽性表達情況是cHNSCC患者術后復發的危險因素(P<0.05)，見表5。

表4 cHNSCC患者術后復發影響因素分析賦值方案

表5 cHNSCC患者術后復發影響因素分析

2.5PD-L1、MMP1表達情況用于評估cHNSCC患者術后復發的價值 PD-L1陽性表達用于預測cHNSCC患者術后復發的靈敏度、特異度分別為93.55%、51.02%，MMP1陽性表達用于預測cHNSCC患者術后復發的靈敏度、特異度分別為94.35%、44.90%，二者聯合預測cHNSCC患者術后復發的靈敏度、特異度分別為87.90%、79.59%。

3 討 論

cHNSCC是常見惡性腫瘤，世界范圍內每年新增患者約50萬人，嚴重威脅患者健康。目前臨床治療cHNSCC的方案仍以手術切除為主。雖然手術技術發展迅速，但患者遠期生存率卻未得到明顯提高，其原因主要在于術后的局部復發。有研究顯示，cHNSCC患者術后復發率可達17.61%[5]。因此，預防術后復發對改善患者遠期生存結局有重要價值，而尋找評估術后復發風險的客觀指標對臨床盡早干預有積極作用。

近年來，程序性細胞死亡蛋白-1(PD-1)抑制劑是腫瘤免疫療法研究的熱點，作為免疫哨點單抗藥物，在應答廣度、深度、持久性方面均具有明顯優勢，其主要通過抑制PD-1、PD-L1進行靶向治療，具有較強抗腫瘤效果[6-7]。腫瘤進展時，腫瘤微環境誘導T細胞高表達并提高PD-1分子活性，腫瘤細胞則可通過傳遞負性調控信號激活PD-1/PD-L1信號通路，抑制T細胞對腫瘤細胞的殺滅作用，從而促進腫瘤進展[8-9]。因此，以PD-1/PD-L1為靶點的免疫療法治療cHNSCC具有良好效果，而且已在部分臨床研究中得到證實[10-11]。另有研究證實，cHNSCC患者PD-L1 2級染色更有可能發生腫瘤轉移，而且與局部復發顯著相關[12-13]。本研究發現，cHNSCC患者腫瘤組織PD-L1表達陽性率明顯高于癌旁組織且晚期患者PD-L1陽性表達率更高，提示PD-L1與cHNSCC患者預后有關。這與相關研究結果基本一致[14]。本研究結果顯示，術后復發患者的PD-L1陽性表達率明顯高于未復發患者，PD-L1陽性表達是cHNSCC患者術后復發的獨立危險因素，提示其可作為反映cHNSCC患者術后復發風險的指標。

MMP1是基質金屬蛋白酶家族第一個被定性的成員，在多種器官、細胞培養液、組織提取物中均可發現，有報道指出，MMP1可作為良性腫瘤向惡性進展的標志物[15]。MMP1在cHNSCC、肺癌、卵巢癌、乳腺癌、直腸癌等多種腫瘤細胞中均有表達，具有降解明膠及膠原的作用。相關研究指出，間質細胞對促進腫瘤增殖、侵襲、遷移有重要作用，而細胞外基質中大量存在的膠原蛋白是角質形成細胞遷移的必要條件[16]。細胞外基質是細胞與細胞間自分泌調節、旁分泌調節的緩沖，對細胞生存有直接影響，其水平變化受MMP1影響。MMP1可通過誘導基質重塑、血管形成、細胞黏附等作用降解細胞外基質，降低細胞外基質對惡性腫瘤浸潤、轉移的阻礙，從而促進腫瘤轉移、惡化[17]。陳艷丹等[18]研究指出，通過miR-134靶向MMP1蛋白表達可直接影響喉癌細胞的侵襲、增殖，證實MMP1在喉癌中具有促進腫瘤侵襲、轉移的作用。本研究結果顯示，cHNSCC患者腫瘤組織細胞MMP1陽性表達率高，其高表達提示患者術后存在較高復發風險。

既往臨床評估腫瘤患者術后復發風險主要依據為手術切緣組織病理學檢查，但其效果并不理想，有研究指出存在部分手術切緣陰性的患者術后出現局部復發或淋巴結轉移[19-20]。這說明傳統組織病理學檢查具有一定局限性，而在病理學檢查基礎上聯合免疫組織化學檢測，可一定程度上提高診斷準確率。本研究中PD-L1、MMP1陽性表達對預測cHNSCC患者術后復發均有較高價值，二者聯合預測cHNSCC患者術后復發的靈敏度、特異度分別為87.90%、79.59%，提示PD-L1、MMP1陽性表達情況可作為評估cHNSCC患者術后復發風險的參考指標。

綜上所述，cHNSCC患者術后腫瘤組織PD-L1、MMP1陽性表達率較高，而且與患者術后復發存在密切關系，通過檢測PD-L1、MMP1陽性表達情況有助于評估術后復發風險，有助于臨床盡早干預以降低復發率。本研究不足之處在于僅探究了PD-L1、MMP1與術后復發的關系，受限于現有條件未分析其表達情況是否對遠期生存有影響，這可作為下一步研究的方向。