THBS-1、PPBP聯合CTP對缺血性腦卒中的診斷價值分析*

路 康，吳文鋒，許 倩，常興芳

河北省第八人民醫院/河北省老年病醫院檢驗科，河北石家莊 050011

缺血性腦卒中是臨床最為常見的缺血性腦血管疾病，有高發病率、高致殘率以及高致死率的特點，嚴重威脅患者的生命安全[1-2]?？焖?、有效地診斷缺血性腦卒中對患者的治療及預后有重要意義。臨床診斷缺血性腦卒中主要是根據患者的臨床特點及影像學檢查[3-4]。CT灌注成像(CTP)的原理是經靜脈注入對比劑后對腦組織進行動態CT掃描，獲得的數據經過處理，就可以得到腦組織的血流灌注狀態。該方法已被證明具有良好的準確性，目前廣泛被用于急診診斷早期缺血性腦卒中[5-6]。近年來，蛋白標志物的檢測為更準確地預防和診斷缺血性腦卒中提供了方法[7-8]?；诖?，本研究對血小板反應蛋白1(THBS-1)、前血小板堿性蛋白(PPBP)檢測聯合CTP用于缺血性腦卒中診斷的價值進行探討。

1 資料與方法

1.1一般資料 將本院2020年1月至2021年1月收治的缺血性腦卒中患者136例納入研究作為研究組。另外，選取同期于本院體檢的健康志愿者100例作為對照組。研究組：男75例、女性61例，年齡43～70歲、平均(56.5±10.8)歲。對照組：男56例、女44例，年齡44～68歲、平均(56.1±9.5)歲。所有患者一般資料比較，差異均無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。納入標準：所有缺血性腦卒中患者均符合中華醫學會中對缺血性腦卒中的診斷標準[9]；所有患者均通過CT、核磁共振(MRI)等影像學檢查確診為缺血性腦卒中。排除標準：(1)合并心、肝、腎等器官功能不全者；(2)有凝血功能障礙者；(3)合并呼吸系統疾病者；(4)依從性差，無法配合研究者。所有納入研究者均對本研究知情同意。本研究經本院倫理委員會審批通過。

1.2方法

1.2.1標本采集 采用3.2%枸櫞酸抗凝采血管抽取納入研究者清晨空腹肘靜脈血標本。靜脈血標本于4 ℃、4 000 r/min的條件下離心10 min，收集上清液之后在冰上進行分裝，隨后于-80 ℃環境下保存備用。

1.2.2CTP檢查 通過飛利浦Brilliance 64排多層螺旋CT進行CTP檢查?；颊呷⊙雠P位，行頭顱CT平掃，注射50 mL碘普羅胺(速率為5 mL/s)，延遲2 s后進行掃描，設置掃描層厚：0.625 mm，重建層厚：5 mm，螺距：0.8，視野：200 mm，掃描范圍為垂體窩下緣向顱頂96 mm，掃描線與顱底平行，管電壓：80 kV，管電流：120 mA，單次掃描時間：1.5 s，循環時間為3 s，間隔1.5 s，連續掃描18期。掃描后將容積數據傳輸至工作站通過CTP軟件包進行分析處理，繪制時間-密度曲線，獲取平均通過時間(MTT)、達峰時間(TTP)、腦血容量(CBV)、腦血流(CBF)。

1.2.3THBS-1、PPBP檢測 從血漿中提取蛋白之后，采用Western blot對THBS-1、PPBP進行檢測。每孔添加20 μg從血漿中提取的蛋白，加入蛋白緩沖液，隨后進行10 min電泳，然后將電轉膜浸泡在10%的牛奶中，在常溫環境下封存90 min。加入稀釋后的一抗孵育1 d，次日取出之后使用TBST沖洗，加入二抗放置60 min，然后開始清洗與顯色。采用β-actin作為內參，對THBS-1、PPBP蛋白的相對表達水平進行檢測。

2 結 果

2.1兩組間CTP參數比較 與對照組相比，研究組MTT、TTP增加，CBV、CBF減少，差異均有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 兩組CTP參數的比較

2.2不同嚴重程度缺血性腦卒中患者的CTP參數比較 與輕度組比較，中、重度組缺血性腦卒患者MTT、TTP增加，CBV、CBF減少，差異均有統計學意義(P<0.05)；與中度組相比，重度組MTT、TTP增加，CBV、CBF減少，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 不同嚴重程度缺血性腦卒CTP參數對比

2.3兩組間THBS-1、PPBP蛋白表達水平比較 與對照組比較，研究組THBS-1、PPBP蛋白相對表達水平升高(P<0.05)，見表3、圖1。

表3 兩組THBS-1、PPBP蛋白相對表達水平比較

注：A為對照組；B為研究組。

2.4不同嚴重程度缺血性腦卒患者THBS-1、PPBP蛋白表達水平比較 與輕度組相比，中、重度組THBS-1、PPBP蛋白相對表達水平增加(P<0.05)；與中度組相比，重度組THBS-1、PPB相對表達水平增加(P<0.05)。見表4。

表4 不同嚴重程度缺血性腦卒THBS-1、PPBP蛋白相對表達水平比較

2.5CTP參數及THBS-1、PPBP蛋白表達水平與缺血性腦卒中病情嚴重程度的關系 MTT、TTP、THBS-1、PPBP均與缺血性腦卒中病情嚴重程度呈正相關(r>0，P<0.05)，而CBV、CBF與缺血性腦卒中病情嚴重程度呈負相關(r<0，P<0.05)，見表5。

表5 MTT、TTP、CBV、CBF、THBS-1、PPBP與缺血性腦卒中病情嚴重程度的相關性

2.6CTP參數與THBS-1、PPBP蛋白表達水平的相關性 MTT、TTP與THBS-1、PPB均呈正相關(r>0，P<0.05)，CBV、CBF與PCBV、CBF均呈負相關(r<0，P<0.05)，見表6。

表6 CTP參數與THBS-1、PPBP蛋白表達水平的相關性(r)

2.7THBS-1、PPBP、MTT、TTP、CBV、CBF聯合用于缺血性腦卒診斷的ROC曲線分析 與THBS-1、PPBP、MTT、TTP、CBV、CBF單項診斷相比，六項聯合對缺血性腦卒中的診斷價值更高，差異有統計學意義(P<0.05)，見表7、圖2。

表7 THBS-1、PPBP、MTT、TTP、CBV、CBF聯合對缺血性腦卒中的診斷價值分析

圖2 THBS-1、PPBP、MTT、TTP、CBV、CBF單獨和聯合用于缺血性腦卒中診斷的ROC曲線

3 討 論

缺血性腦卒中的發生嚴重威脅患者身心健康及生命安全，給患者家庭帶來經濟負擔[10-11]。隨著人口老齡化的加快，缺血性腦卒中的危害越來越明顯。因此，研究缺血性腦卒中的防治有重大價值[12]。

隨著醫學影像技術的進步，CTP、CT血管造影、CT平掃等手段在腦卒中診斷中的應用越來越廣泛[13]。CTP可對腦卒中患者腦灌注狀態、梗死面積進行檢查，與MRI檢查結果具有較高的一致性。有研究顯示，缺血性腦卒中發生后，患者腦血流量會明顯下降，CBV、CBF水平隨之降低，進而導致MTT、TTP延長，并且與缺血性腦卒中嚴重程度有關[14-16]。造成參數變化的可能原因：早期主干供血動脈出現栓塞時，代償機制開始發揮作用，側支循環開始供給，由于側支循環代償血流路線較長,導致血流到達組織的時間延長[17-18]。CTP可在短時間內完成對全腦血管、灌注情況的評價[19]。本研究結果顯示：缺血性腦卒中患者CBV、CBF減少，MTT、TTP增加，隨著病情嚴重程度的增加，CBV、CBF減少，MTT、TTP增加，表明缺血性腦卒中患者CTP參數存在異常，而且與病情嚴重程度相關，提示CBV、CBF、MTT、TTP可作為缺血性腦卒中診斷的有效參數。

THBS-1作為一種多功能細胞外基質蛋白，廣泛表達于人體組織細胞。THBS-1能夠與特定結構域的多個不同蛋白多糖、細胞表面受體相互作用，從而發揮出不同的生物學效應。THBS-1作為一種有效的血管生成調節因子，能夠抑制內皮細胞的遷移及細胞外基質中血管內皮生長因子的釋放。有研究發現，THBS-1參與了血小板的聚集以及受限血管處血栓生成[20]。趙新玲等[10]報道，急性缺血性腦卒中患者THBS-1表達異常升高，對THBS-1進行檢測有助于對急性缺血性腦卒中進行診斷及預后評估，本研究的結果與該報道一致。

PPBP屬于CXC趨化因子家族的血小板衍生生長因子，能夠調節N-甲基-D-天冬氨酸受體的功能，從而減輕大腦中動脈梗死后的腦損傷。PPBP還與多種疾病的病理生理機制相關，如誘導炎癥應答、促進動脈粥樣硬化斑塊的形成[21-22]。本研究結果中，缺血性腦卒中患者PPBP表達異常升高，與缺血性腦卒中的嚴重程度密切相關，對其進行檢測有助于對缺血性腦卒中進行準確診斷。

雖然本研究結果表明THBS-1、PPBP蛋白表達水平與CTP參數相關，可用于缺血性腦卒中的診斷，但本研究納入研究的樣本量較少，有一定的局限性，在數據統計時可能存在一定的偏倚，因此本研究的結果還需后續研究進一步證實。

綜上所述，CTP、THBS-1、PPBP有助于缺血性腦卒中的診斷，CTP參數與THBS-1、PPBP蛋白表達水平相關，可用于患者疾病情況的評估，值得臨床推廣。