暗褐彩蝠在西藏和湖北的新發現及彩蝠屬物種在我國分類與分布的探討

周 全，謝慧嫻，梁曉玲，羅金紅，吳 華，吳 毅 ，余文華

（1.廣州大學生命科學學院，廣州，510006；2.華中師范大學生命科學學院，武漢，430079）

暗褐彩蝠（Kerivoula furva）隸屬于翼手目（Chiroptera）蝙蝠科（Vespertilionidae）彩蝠亞科（Kerivoulinae），目前國內分布于云南、廣西、江西、福建、廣東和臺灣，國外分布于越南、緬甸、柬埔寨、泰國和老撾等東南亞國家［1-2］。追蹤彩蝠屬蝙蝠在中國的分布歷史發現，長期以來中國分布記錄僅有彩蝠（K.picta）和哈氏彩蝠（K.hardwickii）2 種［3-4］。Wu 等［5］發現了采集于海南和臺灣的泰坦尼亞彩蝠（K.titania）為中國分布新紀錄，李鋒等［6-7］相繼報道了該種在江西和廣東的新紀錄。隨后，Kuo等［8］將臺灣產彩蝠屬標本命名為暗褐彩蝠，提出東南亞地區原有的哈氏彩蝠應是一個復合群，并推測原中國分布的哈氏彩蝠應是暗褐彩蝠。Yu等［9］采用系統發育學與形態學方法，分析了海南、江西、廣東三地的中國大陸彩蝠屬標本，結果顯示上述標本與臺灣的標本聚為一支，形態特征亦與之相似，提示其實為暗褐彩蝠。那么，哈氏彩蝠和泰坦尼亞彩蝠到底在中國是否存在分布？中國幾種彩蝠的分類與分布狀況如何？探討和核實上述問題，十分必要。

本課題組近年來在中國中部和西南部區域開展多次蝙蝠多樣性資源調查，其中于2017 年7 月在湖北省通山縣（6 只）和2021 年7 月在西藏林芝市墨脫縣（2 只）捕獲到一批彩蝠屬標本，根據其外形、毛色和頭骨特征，并結合分子系統學證據，將該8 只彩蝠屬標本鑒定為暗褐彩蝠，為該種在湖北和西藏分布的新紀錄。這一新發現，進一步擴大了暗褐彩蝠在中國的分布范圍，豐富了湖北和西藏翼手類物種多樣性。同時，結合國內外最新的研究結果，對中國現有彩蝠屬蝙蝠的分類與分布進行了探討，現將結果報道如下。

1 標本采集

2017 年7 月27—29 日，于湖北省通山縣金家田金雞谷林道（29°22'18″ N，114°34'35″ E；海拔463 m）使用蝙蝠豎琴網采集6 只彩蝠屬標本（5 ♀：GZHU 17141、17158、17161、17163、17165；1：17169）。2021 年7 月27—28 日，于西藏林芝市墨脫縣采集2只彩蝠屬標本（1 性別不詳：GZHU 21205；1：21207），其中21205 號標本（干尸）拾于該縣一地下停車場地面（29°18'50″ N，95°19'9″ E；海拔1 263 m），21207 號標本為該縣白瑪崗東417 m 林道（29°19'8″ N，95°17'58″ E；海拔785 m）使用豎琴網捕獲。以上標本現保存于廣州大學生命科學學院。同時，參考Wu 等［5］和李鋒等［6-7］使用的分子標記方法，本研究使用部分館藏標本（海南標本編號IBHG 08279、08280；江西標本編號GZHU 13239、13240、13241 以及廣東標本編號GZHU 14131、14132）進行后續分析（表1）。

2 研究方法

2.1 標本測量

根據哺乳動物測量標準［10-11］，使用數顯游標卡尺（MNT-150，上海美耐特實業有限公司，精確到0.01 mm）對標本外形和頭骨進行測量，使用微型電子天平（JY-200，廣州艾瑞貿易有限公司，精確到0.01 g）進行稱量。測量指標及標準與Yu 等［9］一致，合計7 項外部形態測量指標及13 項頭骨測量指標。

2.2 DNA提取與擴增

取約20 mg肝臟或肌肉樣品，使用通用型基因組提取試劑盒（AG21009，艾科瑞生物）提取總DNA。根據彩蝠亞科種類在NCBI-nt數據庫基因物種覆蓋度，篩選線粒體細胞色素氧化酶亞基Ⅰ基因（COI）片段、線粒體細胞色素b基因（Cyt b）片段和核基因重組激活基因2（Rag2）片段為分子標記。PCR引物、反應體系和反應程序參照Stadelmann等［12］和Yu等［9］設置。

2.3 系統發育學分析

使用Geneious 9.1.8 軟件［13］對測序文件人工拼接與校對，從NCBI-nt數據庫中下載中國現有分布的彩蝠屬蝙蝠的序列［5-9，14］（表1），同時下載哈氏彩蝠的序列［8］，采用MUSCLE［15］對序列矩陣排序比對，根據ModelFinder［16］確定3種分子標記的最佳核苷酸替換模型分別為：TPM2+F+G4（COI）、TIM2+F+I+G4（Cyt b）和K3Pu+F+R2（Rag2）。IQ-TREE v2.0.3［17］構建最大似然樹，自展1 000次估算節點支持度。基于不同分子標記構建的系統發育樹均選用毛翼蝠（Harpiocephalus harpia）作為外群。

3 結果

3.1 暗褐彩蝠在西藏和湖北的新發現

3.1.1 外形及頭骨特征

體型較小，湖北雌性標本（n=4）前臂長（34.49±0.62）mm，雄性標本（n=2）前臂長分別為30.28、31.97 mm，西藏標本前臂長為33.86 mm（表2）。耳廓卵圓形，基部呈管狀，形似漏斗，耳屏細長。體毛較長、整體顯示為暗褐色，頭頂毛基為灰色，毛尖棕色；背毛毛基深褐色，毛尖淺灰色，腹毛基部暗褐色，毛尖黃灰色（圖1）。

圖1 暗褐彩蝠外形及頭骨特征Fig.1 External and skull characteristics of Kerivoula furva

頭骨較小，湖北雌性標本顱全長（14.79± 0.50）mm，雄性2 號標本顱全長分別為14.39、14.49 mm，西藏標本顱全長為14.14 mm（表2）。鼻吻部稍稍凹陷，腦顱部微微隆起、寬而低扁。上頜前2枚前臼齒略為退化，第一、第二上臼齒的前附尖、中附尖和后附尖正常，第三上臼齒后附尖缺失。下頜第一、第二下門齒為三尖型，第三下門齒較小；3枚下前臼齒著生于齒槽中，從前向后依次減小；第一下臼齒齒冠稍大于第二、第三下臼齒，也呈現依次減小趨勢（圖1）。齒式：2.1.3.3/3.1.3.3=38。上述標本與早期采集的海南和臺灣標本比較，其外形和頭骨特征基本一致。

表2 暗褐彩蝠的外形和頭骨測量數據對比Tab.2 Comparison of morphology and skull measurements of Kerivoula furva

3.1.2 系統發育關系分析

將擴增的線粒體基因COI（含GZHU 21205 標本）、Cyt b和核基因Rag2片段序列基于最大似然法所構建的系統發育樹顯示，本研究所有標本序列（包括原以泰坦尼亞彩蝠種名發表的海南、廣東和江西新紀錄標本序列）均與采集于中國臺灣用于暗褐彩蝠新種發表的標本序列聚為一支，自展值分別為82（COI）、100（Cyt b）和80（Rag2）（圖2）。同時，基于COI和Cyt b基因構建的系統發育樹也顯示，采于西藏墨脫的標本與湖北標本存在遺傳分化。COI基因結果提示GZHU 21207 標本與緬甸標本序列（KY086026）親緣關系較近（圖2A），Cyt b基因樹中提示與尼泊爾標本（MH137391）較近（圖2B）。

圖2 基于COI、Cyt b 和Rag2 基因片段構建的彩蝠屬最大似然樹Fig.2 Maximum likelihood phylogenetic trees of Kerivoula based on partial gene segments of COI、Cyt b and Rag2

3.1.3 暗褐彩蝠為西藏和湖北蝙蝠分布新發現

根據外形、毛色和頭骨特征比較，結合COI、Cyt b和Rag2基因構建的系統發育分析，證實上述8只彩蝠屬標本應為暗褐彩蝠，為該種在湖北和西藏分布的新紀錄。這一新發現，擴大了該種在中國的分布范圍，豐富了湖北和西藏翼手類物種多樣性。

3.2 彩蝠屬物種在中國的分類與分布

3.2.1 中國彩蝠屬物種的分類變動

中國彩蝠亞科原記錄僅有彩蝠和哈氏彩蝠2種，前者在中國分布于貴州、福建、廣東、廣西和海南；后者分布于云南、四川、廣西和福建［3，18］。Bates等［10］將采集于柬埔寨的一種彩蝠類標本根據形態學特征發表新種，命名為泰坦尼亞彩蝠，隨后Wu 等［5］依據形態和分子證據，將采集于海南和臺灣的彩蝠類標本鑒定為泰坦尼亞彩蝠，并作為中國翼手目新紀錄予以報道，李鋒等［6-7］基于分子系統發育學及形態學數據發現該種在江西和廣東也有分布，使中國彩蝠亞科種類從原記錄的2 種增加到3 種。然而Kuo等［8］依據臺灣和緬甸的彩蝠標本命名了新種——暗褐彩蝠，并提出東南亞地區原有的哈氏彩蝠應是一個復合群，存在幾個隱種，引出上述“泰坦尼亞彩蝠”海南等3 省分布新紀錄是否可信，以及已被認可數十年中國分布的哈氏彩蝠是否有效的疑問。Yu等［9］對中國大陸南部的彩蝠類標本進行形態學、數值分類學和親緣地理學研究，其結果顯示：海南、江西、廣東等地的彩蝠類標本均與臺灣發表的暗褐彩蝠聚為一支，形態特征亦相符，均應屬于同一種彩 蝠——暗褐彩蝠，而在整理原有哈氏彩蝠在國內分布報道［3-4，8-9，14，19-21］，并結合本研究分子系統學結果顯示（圖2），中國區域實無真正的哈氏彩蝠K.hardwickiisensu stricto（sensu stricto 分類學含義為真正的、正宗的），早期在我國不同獸類名錄中廣泛使用的哈氏彩蝠K.hardwickii種名，均應修正為暗褐彩蝠K.furva［22］。在中國沒有哈氏彩蝠K.hardwickiisensu stricto分布，該種真實分布區應該僅在東南亞范圍［1］。

3.2.2 中國彩蝠屬物種分布的新發現

本研究報道暗褐彩蝠在湖北和西藏二省區新發現后，目前該種在中國分布省區為重慶、云南、西藏、湖北、湖南、江西、福建、廣東、廣西、海南和臺灣。最近，Yu 等［14］依據云南省西雙版納翼手目多樣性專項調查捕獲彩蝠屬標本，通過分類厘定確認其中克欽彩蝠K.kachinensis為中國蝙蝠分布新紀錄，同時亦發現真正的泰坦尼亞彩蝠K.titaniasensu stricto在云南西雙版納分布紀錄，重新確認泰坦尼亞彩蝠在我國的分布。自此，我國彩蝠屬應包括4 種，分別為彩蝠、暗褐彩蝠、克欽彩蝠和泰坦尼亞彩蝠。前2 種在我國東南部廣泛分布，后2 種目前僅在云南西雙版納地區發現。值得注意的是，我國相鄰的越南記錄彩蝠屬種類達8 種［1，23-24］，根據緬甸、越南等東南亞鄰國彩蝠類群物種多樣性分布情況，我國西南地區該類群動物物種資源狀況仍可能被低估，有進一步開展專項調查的必要。

3.2.3 中國彩蝠屬的分類特征及檢索表

中國的4 個彩蝠屬物種，彩蝠的翼膜和毛色為鮮艷靚麗的橘紅色，容易鑒定識別。其余3 種體色略顯灰暗，顏色較為近似，但克欽彩蝠體型明顯較大，前臂長常大于40.00 mm。而暗褐彩蝠與泰坦尼亞彩蝠的外形差異主要體現在：前者的脛骨較短（小于18.00 mm）且背毛呈暗褐色，為我國4種彩蝠物種中體色最深的種類；后者則脛骨較長（常大于18.00 mm）且背毛顏色稍淺，毛中淺灰色，毛基黑色［10，14］。具體鑒別特征和方法，參見以下檢索表。

中國彩蝠屬分種檢索表A key to the genus Kerivoula of China