潰瘍性結(jié)腸炎患者血清炎癥因子、免疫球蛋白水平與腸道菌群的關(guān)系分析

李 燕

（包頭市中心醫(yī)院檢驗科，內(nèi)蒙古 包頭 014040）

潰瘍性結(jié)腸炎是非特異性慢性腸道炎癥性疾病，病理表現(xiàn)為腸道黏膜損傷、潰瘍、糜爛，臨床表現(xiàn)為腹痛、腹瀉、里急后重等癥狀，長期的腸道炎癥反應(yīng)給患者身體造成沉重負(fù)擔(dān)，影響患者生活質(zhì)量。潰瘍性結(jié)腸炎影響因素眾多，其中遺傳因素、環(huán)境、免疫異常、腸道微生態(tài)與潰瘍性結(jié)腸炎關(guān)系密切[1]。正常情況下人體腸道內(nèi)存在種類多樣的細(xì)菌群體，共同參與腸道內(nèi)物質(zhì)的代謝、分解，維持腸道內(nèi)免疫系統(tǒng)的穩(wěn)定，腸道菌群一旦失衡會破壞腸黏膜保護(hù)屏障，造成機(jī)體免疫力低下，引發(fā)全身性的炎癥反應(yīng)，加重病情[2]。有研究顯示，機(jī)體免疫系統(tǒng)失衡、細(xì)胞炎癥反應(yīng)及腸道菌群紊亂是誘發(fā)潰瘍性結(jié)腸炎的關(guān)鍵病理過程，也是潰瘍性結(jié)腸炎反復(fù)發(fā)作的重要原因，甚至是癌癥轉(zhuǎn)化的重要機(jī)制[3]。因此，本研究旨在分析潰瘍性結(jié)腸炎患者血清炎癥因子、免疫球蛋白水平變化，并分析上述指標(biāo)與腸道菌群的相關(guān)性，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料回顧性分析包頭市中心醫(yī)院2020年1月至2021年12月收治的52例潰瘍性結(jié)腸炎患者的臨床資料，按照疾病嚴(yán)重程度分為緩解期組（32例）、活動期組（20例），另選取同期于院內(nèi)進(jìn)行體檢的62例健康人群的體檢資料作為健康組。緩解期組中男、女患者分別為17、15例；年齡28～60歲，平均（48.28±6.45）歲；病程1～3年，平均（2.12±0.36）年。活動期組中男、女患者各10例；年齡28～61歲，平均（48.26±6.43）歲；病程1～4年，平均（2.14±0.35）年。健康組中男性、女性分別為32、30例；年齡28～61歲，平均（48.25±6.41）歲。比較3組研究對象的年齡、性別一般資料，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），組間可進(jìn)行比較。診斷標(biāo)準(zhǔn)：將《炎癥性腸病診斷與治療的共識意見（2018年·北京）》[4]中的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)作為潰瘍性結(jié)腸炎的診斷依據(jù)，且經(jīng)結(jié)腸鏡檢查確診。納入標(biāo)準(zhǔn)：與上述診斷標(biāo)準(zhǔn)一致者；言語組織能力正常者；近期未服用益生菌制劑、抗生素者等。排除標(biāo)準(zhǔn)：嚴(yán)重免疫系統(tǒng)疾病者；腎臟、心臟、肝臟功能不全者；精神狀態(tài)異常者等。本研究方案已通過包頭市中心醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 檢測方法①血清炎癥因子、免疫球蛋白檢測：在所有研究對象空腹時進(jìn)行采血操作，取5 mL靜脈血，以3 000 r/min的轉(zhuǎn)速，離心10 min獲得血清，血清白細(xì)胞介素-33（IL-33）、單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）、高遷移率族蛋白 B1（HMGB1）、腫瘤壞死因子 -α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）水平檢測方法均為酶聯(lián)免疫吸附實驗法，血清免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白A（IgA）水平檢測方法均為免疫比濁法。②腸道菌群檢測：取所有研究對象新鮮糞便標(biāo)本1 g放入?yún)捬蹙♂屢褐校ㄟ^振蕩器（山東博科再生醫(yī)學(xué)有限公司，型號：OLB-100C）震蕩搖勻后，采用0.9%氯化鈉溶液按照10倍連續(xù)法稀釋，依次在不同稀釋度下取標(biāo)本液50 μL，在對應(yīng)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，37 ℃厭氧培養(yǎng)箱培養(yǎng)厭氧菌48 h，37 ℃普通溫箱培養(yǎng)需氧菌24 h，使用菌落計數(shù)器（杭州澤析生物科技有限公司，型號：ZX-100）統(tǒng)計乳酸桿菌、雙歧桿菌、腸球菌、大腸埃希桿菌數(shù)量。

1.3 觀察指標(biāo)①比較健康組、緩解期組、活動期組研究對象血清 IL-33、MCP-1、HMGB1、TNF-α、IL-6、IgG、IgM、IgA水平。②比較健康組、緩解期組、活動期組研究對象腸道菌群數(shù)量，包括乳酸桿菌、雙歧桿菌、腸球菌、大腸埃希桿菌。③分析血清IL-33、MCP-1、HMGB1、TNF-α、IL-6、IgG、IgM、IgA 水平與乳酸桿菌、雙歧桿菌、腸球菌、大腸埃希桿菌的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法使用SPSS 21.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，使用S-W法檢驗計量資料數(shù)據(jù)是否服從正態(tài)分布，對于符合正態(tài)分布的計量資料以()表示，3組間比較采用F檢驗，以Pearson相關(guān)性分析法分析血清IL-33、MCP-1、HMGB1、TNF-α、IL-6、IgG、IgM、IgA 水平與腸道菌群數(shù)量的相關(guān)性。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組研究對象血清炎癥因子、免疫球蛋白水平比較與健康組比，緩解期組、活動期組患者血清IL-33、MCP-1、HMGB1、TNF-α、IL-6 水平均呈逐漸升高趨勢，IgG、IgM、IgA水平均呈逐漸降低趨勢，組間兩兩比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05），見表1。

表1 3組研究對象血清炎癥因子、免疫球蛋白水平比較( )

表1 3組研究對象血清炎癥因子、免疫球蛋白水平比較( )

注：與健康組比，*P＜0.05，與緩解期組比，#P＜0.05。IL-33：白細(xì)胞介素-33；MCP-1：單核細(xì)胞趨化蛋白-1；HMGB1：高遷移率族蛋白B1；TNF-α：腫瘤壞死因子-α；IL-6：白細(xì)胞介素-6；IgG：免疫球蛋白G；IgM：免疫球蛋白M；IgA：免疫球蛋白A。

組別 例數(shù) IL-33(ng/L) MCP-1(μg/L) HMGB1(μg/L) TNF-α(μg/L)健康組 62 215.95±61.29 103.52±12.26 2.51±0.35 6.97±1.16緩解期組 32 253.64±58.63* 145.82±16.57* 8.96±1.84* 9.65±2.32*活動期組 20 341.88±103.17*# 181.42±25.62*# 17.85±4.22*# 16.54±4.21*#F值 24.857 191.915 458.898 131.497 P值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05組別 例數(shù) IL-6(μg/L) IgG(g/L) IgM(g/L) IgA(g/L)健康組 62 135.05±7.45 11.95±1.28 1.39±0.42 1.75±0.36緩解期組 32 163.25±8.76* 10.12±1.36* 1.21±0.31* 1.58±0.30*活動期組 20 193.11±10.42*# 8.37±1.45*# 1.03±0.28*# 1.34±0.29*#F值 393.604 60.468 7.855 11.985 P值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

2.2 3組研究對象腸道菌群數(shù)量比較與健康組比，緩解期組、活動期組患者腸道乳酸桿菌、雙歧桿菌數(shù)量均呈逐漸降低趨勢；腸球菌、大腸埃希桿菌數(shù)量均呈逐漸升高趨勢，組間兩兩比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05），見表2。

表2 3組研究對象腸道菌群數(shù)量比較(CFU/g， )

表2 3組研究對象腸道菌群數(shù)量比較(CFU/g， )

注：與健康組比，*P＜0.05，與緩解期組比，#P＜0.05。

組別 例數(shù) 乳酸桿菌 雙歧桿菌 腸球菌 大腸埃希桿菌健康組 62 9.32±0.75 8.93±0.66 4.64±0.58 7.42±1.13緩解期組 32 8.21±0.25* 7.46±0.68* 6.86±0.53* 8.95±1.08*活動期組 20 6.18±0.89*# 6.35±0.73*# 7.56±0.47*# 10.65±1.06*#F值 164.253 127.167 300.976 69.866 P值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

2.3 血清炎癥因子水平、免疫球蛋白與腸道菌群的相關(guān)性經(jīng)Pearson相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，血清IL-33、MCP-1、HMGB1、TNF-α、IL-6與腸道乳酸桿菌、雙歧桿菌數(shù)量均呈負(fù)相關(guān)，與腸球菌、大腸埃希桿菌數(shù)量均呈正相關(guān)；血清IgG、IgM、IgA與腸道乳酸桿菌、雙歧桿菌數(shù)量均呈正相關(guān)，與腸球菌、大腸埃希桿菌數(shù)量均呈負(fù)相關(guān)，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05），見表3。

表3 血清炎癥因子、免疫球蛋白水平與腸道菌群的相關(guān)性

3 討論

潰瘍性結(jié)腸炎是一種自身免疫性疾病，通過長期的用藥、飲食調(diào)節(jié)可以控制病情，但其發(fā)病率在近年來呈不斷上升的趨勢，若不積極治療可誘發(fā)腸梗阻、結(jié)腸癌等疾病，危害患者生命健康[5]。

潰瘍性結(jié)腸炎患者腸道菌群失衡，腸道細(xì)菌進(jìn)入人體微循環(huán)，引起自身免疫異常和全身炎癥反應(yīng)，造成免疫級聯(lián)反應(yīng)，致使炎癥持續(xù)反復(fù)發(fā)作。本研究結(jié)果顯示，健康組、緩解期組、活動期組研究對象血清IL-33、MCP-1、HMGB1、TNF-α、IL-6水平依次升高，分析其原因可能為IL-33、IL-6是重要的促炎因子，具有多種生物活性，對急相反應(yīng)蛋白的合成有誘導(dǎo)作用，通過破壞腸上皮細(xì)胞屏障功能，損傷黏膜，引發(fā)炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致潰瘍性結(jié)腸炎拖延不愈；TNF-α是炎癥啟動因子，參與細(xì)胞免疫炎癥反應(yīng)，在受損腸黏膜中呈高水平表達(dá)，其水平越高代表潰瘍性結(jié)腸炎病變越嚴(yán)重；MCP-1屬于趨化因子，對炎癥介質(zhì)的表達(dá)起到促進(jìn)作用；另外，HMGB1能夠激活巨噬細(xì)胞釋放炎癥因子，促進(jìn)TNF-α、IL-33、IL-6的分泌，在潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病中發(fā)揮重要作用，能夠和下游受體相互作用，形成炎癥反應(yīng)及免疫應(yīng)答，造成腸道黏膜炎癥反應(yīng)[6-7]。本研究結(jié)果顯示，健康組、緩解期組、活動期組研究對象乳酸桿菌、雙歧桿菌數(shù)量依次降低，腸球菌、大腸埃希桿菌數(shù)量依次升高，分析其原因可能為，結(jié)腸是消化系統(tǒng)中細(xì)菌存在非常密集的地方，正常情況下腸道黏膜是機(jī)體的保護(hù)屏障，腸道菌群處在一個動態(tài)平衡的狀態(tài)，但腸道內(nèi)同時存在著多種致病菌，當(dāng)免疫力下降時，可導(dǎo)致致病菌繁殖，并引起機(jī)體感染，出現(xiàn)乳酸桿菌、雙歧桿菌等有益菌數(shù)量減少，有害菌增多，造成局部炎癥反應(yīng)，故腸道菌群紊亂與潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病密切相關(guān)[8]。本研究結(jié)果還顯示，健康組、緩解期組、活動期組研究對象IgG、IgM、IgA水平依次降低，分析其原因可能是，潰瘍性結(jié)腸炎患者腸道菌群失衡，腸道黏膜屏障保護(hù)功能減退，造成細(xì)菌無序繁殖，損傷腸道內(nèi)皮細(xì)胞，形成炎癥因子釋放 - 腸道菌群失調(diào) - 免疫功能異常的惡性循環(huán)，加重患者病情[9-10]。

潰瘍性結(jié)腸炎患者血清IL-33、TNF-α等炎癥因子的過量分泌，破壞腸黏膜屏障，乳酸桿菌、雙歧桿菌等益生菌數(shù)量減少，腸球菌、大腸埃希桿菌數(shù)量增加，腸道菌群平衡被破壞，導(dǎo)致腸道功能障礙，加重病情[11-12]。本研究結(jié)果顯示，血清IL-33、MCP-1、HMGB1、TNF-α、IL-6與腸道乳酸桿菌、雙歧桿菌數(shù)量均呈負(fù)相關(guān)，與腸球菌、大腸埃希桿菌數(shù)量均呈正相關(guān)；血清IgG、IgM、IgA與乳酸桿菌、雙歧桿菌數(shù)量均呈正相關(guān)，與腸球菌、大腸埃希桿菌數(shù)量均呈負(fù)相關(guān)，原因在于，潰瘍性結(jié)腸炎患者腸內(nèi)細(xì)菌可激活淋巴細(xì)胞，引發(fā)不同的免疫病理損傷，致使免疫球蛋白出現(xiàn)異常表達(dá)，使機(jī)體的免疫功能受到影響，IgG、IgM、IgA水平隨之發(fā)生變化，表明潰瘍性結(jié)腸炎患者機(jī)體血清炎癥因子、免疫球蛋白表達(dá)水平均與腸道菌群失衡密切相關(guān)，且隨著潰瘍性結(jié)腸炎患者嚴(yán)重程度的改變，血清IL-33、MCP-1、HMGB1、TNF-α、IL-6水平也會明顯升高，造成腸道菌群紊亂[13]。

綜上，潰瘍性結(jié)腸炎患者出現(xiàn)明顯的血清炎癥因子水平升高，免疫球蛋白水平降低，以及腸道菌群失衡現(xiàn)象，且和病情嚴(yán)重程度相關(guān)；血清炎癥因子、免疫球蛋白水平與腸道菌群均存在一定相關(guān)性，臨床上可通過對潰瘍性結(jié)腸炎患者血清炎癥因子、免疫蛋球蛋白水平、腸道菌群進(jìn)行檢測以評估患者病情，并制定針對性干預(yù)方案，值得臨床推廣應(yīng)用。