某規模化豬場外環境中非洲豬瘟監測及防控建議

郭 銳，周丹娜，劉澤文，楊克禮，高 婷，袁芳艷，劉 威，李 暢，夏三林，邱振乾，田永祥*

1.農業農村部畜禽細菌病防治制劑創制重點實驗室/ 湖北省農業科學院畜牧獸醫研究所，武漢 430064；2.畜禽病原微生物學湖北省重點實驗室，武漢 430064；3.宜城市農業技術推廣中心，湖北宜城 441400

非洲豬瘟（African swine fever，ASF）可引起不同年齡、不同品種的豬只出現烈性、高度出血性癥狀，病死率極高，最高可達100%，被我國列為一類動物疫病，也是世界動物衛生組織（OIE）要求必須報告的動物疫病之一。截至目前，全世界仍無有效的藥物及疫苗對非洲豬瘟進行控制，防控只能依靠高度的生物安全措施、監測及撲殺。非洲豬瘟在2018 年進入中國以來，給養豬業造成了巨大的損失。目前，非洲豬瘟病毒毒株的多樣性加劇，疫情的復雜性也在加重：流行毒株仍以基因Ⅱ型野毒株為主，存在自然變異毒株、基因缺失毒株、低毒力毒株等變異毒株以及基因Ⅰ毒株。非瘟豬瘟病毒基因Ⅱ型毒株感染仍呈現高發病率和高病死率，但易早發現早確診；非洲豬瘟病毒基因Ⅰ型毒株感染嚴重影響母豬繁殖性能，引起繁殖障礙等；臨床上還存在野毒株和變異株混合感染現象。

根據臨床癥狀，非洲豬瘟一般可分為特急性、急性、亞急性和慢性。非洲豬瘟的癥狀如下：①特急性非洲豬瘟：突然死亡而無明顯癥狀。②急性非洲豬瘟：患病豬嗜睡喜臥，呼吸急促，食欲不振，伴有40～42 ℃高溫，通常在1～2 周內死亡。臨床癥狀主要表現為胸部、腹部、尾巴、會陰和腿部皮膚發紅，眼睛和鼻子流出分泌物，腹瀉或便秘并伴有嘔吐，延長病程時出現神經癥狀。懷孕的母豬可以在懷孕的任何階段流產。③亞急性非洲豬瘟：癥狀較輕，主要病變為出血和血腫。豬只會有不同程度的發燒，表現為精神抑郁、食欲不振、肺炎或呼吸道癥狀，關節通常腫脹。病程持續數周至數月，病豬通常在7～20 d 內死亡，死亡率為30%～70%。④慢性非洲豬瘟：臨床癥狀為輕度發熱，伴有中度或重度關節腫脹，呼吸道癥狀輕微，通常出現皮膚紅斑、壞死、突起。非洲豬瘟病毒通常可以存活幾個月，但很難恢復。剖析顯示肺部呈干酪狀壞死的肺炎、纖維性心包炎、病豬淋巴結腫大、局部出血癥狀。為此，國家農業農村部發布了《非洲豬瘟常態化防控技術指南》，中國動物疫病預防控制中心發布了《養殖場非洲豬瘟病毒變異株防控技術指南》，對于每個規模化豬場而言，做好生物安全，堅持ASFV 監測依然是目前有效防控非洲豬瘟的唯一方法[1]。

1 材料與方法

1.1 試驗時間及地點

2021 年1-12 月，貴州省某集團種豬場。

1.2 采樣方法及樣品數量

按照筆者所在實驗室擬訂的“規模化豬場非洲豬瘟監測技術規程”，對貴州某規模化豬場進行持續12 個月的監測，累計采樣檢測樣品共計4 421份，其中人員（1 347 份）、物資（572 份）、車輛（2 502 份）。

1.3 檢測試劑

非洲豬瘟熒光定量PCR 試劑盒購自北京億森寶公司，DNA 核酸提取試劑盒購自廈門騰基生物公司。

1.4 儀器設備

實時熒光定量PCR 儀FQD-48A 購自博日公司，移液器購自ependof 公司。

1.5 檢測方法

樣品采集后用樣品液倒入無菌的樣品保存管中，2 000 r/min 離心1 min，取上清500 μL 待檢，樣品能在24 h 內檢測可置于4 ℃保存，如24 h 內無法檢測的樣品則置于-20 ℃保存。DNA 核酸提取和熒光定量PCR 檢測均按照說明書操作及標準判定。

2 結果與分析

2021 年全年對4 421 份環境樣品進行非洲豬瘟病原檢測。由表1 可知，人員樣品2、3、6、7、8 月份查出陽性，陽性率分別為7.69%、9.57%、1.91%、5.18%、8.96%；車輛樣品1、2、3、4、6、7、8、9、12 月份查出陽性，陽性率分別為0.53%、5.97%、8.36%、0.5%、4.83%、4.85%、8.05%、0.92%、1.02%；物資樣品8 月份查出陽性，陽性率為2.38%。

表1 場外環境樣品1-12 月核酸監測陽性率 %

由表2 可知，不同用途車輛樣品中，外部運豬車檢出陽性率最高，為10.69%，其次為客戶車輛5.71%、人員物資運輸車1.88%、飼料公司料車1.02%、內部轉豬車1.07%。

表2 不同用途車輛樣品1-12 月核酸監測結果

對該場1 年的跟蹤監測結果顯示，2-3 月和6-8 月ASFV 檢出率較高，從ASFV 帶毒率來看：車輛＞人員＞物資，其中，外來運豬車輛和客戶車輛風險系數較高。筆者在進行風險追溯后發現車輛帶毒的主要原因：運輸過帶毒豬只后未徹底消毒、在公共洗消點被二次污染、運輸路途中被污染；人員帶毒主要原因：去過農貿市場和餐館被污染、被同行人員二次污染、被乘坐車輛二次污染、被家中肉制品污染[2-3]。因此，要高度重視車輛、人員的傳播風險，堅持監測工作，嚴格執行洗消流程，有條件的企業力爭創建非洲豬瘟無疫小區，構建閉環生產鏈，大環境無疫則將大大減輕養殖企業的非洲豬瘟防控壓力。

3 防控經驗分享

3.1 了解當前非洲豬瘟流行特點

當前非洲豬瘟變異毒株表現為潛伏期長、豬只帶毒時間長、傳播速度變慢、死亡率降低的慢性非洲豬瘟、溫和性非洲豬瘟，導致臨床早期發現難度增加，精準剔除操作困難，一旦發現時，往往全群已經大面積感染，損失慘重。弱毒株、疫苗毒開始檢測陰性，后期轉陽性，與豬群應激關系極大；慢性非洲豬瘟、溫和性非洲豬瘟、疫苗毒往往在其他疾病發生后或應激后又被檢測出來。野毒發現即清除，而弱毒株、疫苗毒因傳播慢、范圍小、檢測結果反復、死亡率低等原因，可采取疑似隔離、觀察、檢測確認再剔除方式進行；根據豬的種類（如母豬、育肥等）不同、疑似病例復盤可能路徑不同、發病點分布不同，采樣方式、檢測范圍、檢測頻次、剔除范圍相應不同，剔除操作則要注意隔離、消毒，不擴散；對疫苗毒，血液檢測相對更可靠，檢出率更高，而口、鼻、肛采樣在癥狀明顯或死亡之后往往才能檢測出來，檢出率相對較低。對慢性疑似病例，只有多次反復抗原檢測或結合抗體檢測才能確認，可能還要用到不同廠家試劑盒加以驗證；有專家建議把qPCR 檢測Ct 值40 作為診斷參考。平時抗原、抗體定期監測與緊急狀態擴大監測結合，既考慮可靠性又強調經濟性。慢性非洲豬瘟、溫和性非洲豬瘟的出現，無疑增加了對非洲豬瘟檢測確診的難度，檢測成本急劇升高[4]。

3.2 提高豬群健康度

哈爾濱獸醫研究所仇華吉研究員指出提升豬群“酒量”（感染閾值）的觀點，也是指要提高健康度，那么如何評價豬群健康度？可以根據以下指標進行大致評估：豬群的精神狀態、采食量；皮膚、黏膜的完整性；紅細胞和血紅蛋白水平；出現便秘、淚斑、鐵銹線、難產母豬的比例；老弱病殘和亞健康豬的比例；發情率、受胎率、健仔率、仔豬成活率和育成率的比例等。只有提高豬群整體健康度，才能有效抵御病毒的侵襲，主要措施有：①保證優良豬舍環境，針對自身豬舍情況進行改造，做到環境干燥、溫度適宜、良好通風、降低豬群密度等方面；②提供含有豐富營養的飼料，蛋白質、氨基酸、脂肪、維生素和微量元素等都是能增強免疫力的營養元素，提供符合飲用標準的飲水也是保證健康的重要措施；③抗應激管理，提升非特異性免疫力。從事生產流程入手減少豬群的應激，當各階段豬群處于應激期時全群投放中藥、益生菌、抗菌肽、多維等功能性添加劑。

3.3 有效降低豬場環境病毒的載量

國外學者研究數據顯示，豬只感染非瘟病毒需要一定的病毒量，不同的感染途徑所需最低感染的病毒量不同，如非洲豬瘟的感染劑量通過口和鼻分別為105 HAD50/mL 和102.9 HAD50/mL。因此，在防控非洲豬瘟時的一個重要工作就是盡量減少豬只所處環境中的病毒載量，具體措施如下：①控制好五流（水料流、車輛流、人員流、動物流和物品流）、知己彼、拔病牙。通過“控五流”盡量堵住病毒不進入豬場。②有效消毒，正確規范的洗消殺工作對于消滅場內殘留的病原和防止病原的傳播至關重要，建議進行“立體式”洗消殺操作，包括場地洗消、飲水消毒和空氣消毒。通過“有效消毒”的方式，殺滅可能進入豬場的病原。③重視消滅“蚊蠅老鼠”，蚊蠅雖小，但卻是最極具危險且難以防范的非瘟傳播媒介。吸血昆蟲如果吸食了病豬的血液，可以保留24 h 的傳播能力，在其活動采食范圍內將成為非洲豬瘟病毒傳播的機械載體，更有報告說蒼蠅可以飛到2.3 km 外的地方傳播流感病毒，由此可推理蒼蠅傳播非瘟病毒的距離之遠。

3.4 重視硬件生物安全改造

目前，大部分豬場基本的防非硬件設施已經完善，但在生產操作過程中會出現不適用、閑置等問題，當出現這種現象時一定要立即改造，遵循“制度管人+硬件管人”的原則，在生物安全防控中不能完全依靠人性的自覺，更要設施管控，實現“不該去的區域去不了，洗消流程時間未到人離不開”。

4 結 語

目前，由于非洲豬瘟病毒的變異流行特點發生變化，很多養殖戶認為非洲豬瘟病毒難防，但是只要在場內外環境和生產管理過程中構建好豬場的生物安全體系，提高豬群健康度，綜合防控重要傳染病，做好豬場內外環境監測，守好外圍防線，便可以有效阻斷非洲豬瘟病毒傳播途徑。因此，外環境監測在防控非洲豬瘟等動物疫病以及制定防控措施中起到了關鍵的作用，一方面能夠早發現環境病毒并溯源，另一方面洗消措施更有針對性，抓住防控關鍵點將生物安全措施落到實處。