包被胍基乙酸體外釋放評價

蔣青榮，劉 璇，劉偉國，楊立彬*

1.固安君德同創生物工程有限公司，河北廊坊 065500；

2.北京君德同創生物技術股份有限公司，北京 100085

胍基乙酸（GAA）屬于氨基酸及其衍生物，是肌酸的唯一前提物質，可以通過代謝途徑提高動物體內肌酸水平以調節能量代謝，提高動物生長速度；通過調節氨基酸代謝，提高蛋白質沉積，改善肉品質，增強機體對外界的抗逆性，具有其他氨基酸無法替代的作用[1-7]。

GAA 在瘤胃中易被微生物降解，最終到達小腸被吸收利用的量較少。Hannah 等[8]以荷斯坦公牛為研究對象，在其瘤胃或真胃中注射GAA，通過血漿肌酸和尿肌酸濃度估算GAA 的吸收利用率發現，瘤胃注入GAA 的效果約為真胃注入GAA 的50%。在實際生產中，常采用纖維素包被、聚合物膠囊包被、酵母富集等方法，降低氨基酸類物質在反芻動物瘤胃中的降解率，提高小腸吸收利用率，進而減少在反芻動物飼料中的使用量，節約飼料成本。本試驗以一種新研發的包被胍基乙酸（CGAA）為研究對象，采用體外法測定CGAA 產品在不同緩沖液中的釋放率，衡量GAA 的包被效果，旨在為后續制劑的開發和在生產中的使用提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

GAA 樣品(有效含量≥96%）和CGAA 樣品（有效含量≥70%）均由固安君德同創生物工程有限公司提供。甲醇、乙腈，色譜純，購自賽默飛世爾科技有限公司。檸檬酸、磷酸氫二鈉、碳酸氫鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、氯化鎂等均為國產分析純試劑。

1.2 主要儀器

高效液相色譜儀（安捷倫1260 InfintyⅡ）、恒溫水浴鍋（HWS-28）、超聲水浴鍋（KQ5200DE）。

1.3 溶液的制備

人工唾液模擬反芻動物口腔，按文獻[9]配制，具體配方見表1。

表1 人工唾液配方 g

pH 6.6、pH 5.4、pH 2.4 緩沖液分別模擬反芻動物瘤胃、真胃、十二指腸，按文獻[10]配制，具體配方見表2。

表2 不同pH 值緩沖液配方 g

1.4 試驗方法

準確稱取5.0 g（精確至0.001 g）GAA（GAA組）和CGAA（CGAA 組）樣品放入50 mL 具塞試管底部，加入20 mL 人工唾液、pH 6.6、pH 5.4 和pH 2.4 緩沖液中，蓋緊試管在39 ℃恒溫水浴鍋內消化4、8、12、24 h，沖洗、過濾，濾液定容至50 mL 容量瓶中，充分混合均勻后，收集濾液。采用高效液相色譜法測定濾液中的GAA 含量（具體測定色譜條件見本文“1.5”），計算樣品在人工消化液中的釋放率。

釋放率=濾液中GAA 含量/樣品中GAA 含量×100%。

1.5 含量測定色譜條件

使用Kromasil NH2 色譜柱對樣品進行色譜分析。流動相為配比為40∶60 的磷酸氫二鈉水溶液與乙腈，磷酸氫二鈉水溶液pH 值為8，流速為1 mL/min，檢測波長為200 nm，柱溫為35 ℃，進樣量為20 μL。

1.6 數據分析

數據經Excel 處理后，采用SPSS 23.0 軟件中的獨立樣本t檢驗進行方差分析。

2 結果與分析

由表3 可知，GAA 組和CGAA 組在人工唾液、人工瘤胃液、人工真胃液、人工腸液中的釋放率均隨著時間的延長而提高。與GAA 組相比，CGAA 組在人工唾液、人工瘤胃液、人工真胃液中各時間點的釋放率均極顯著較低，在人工腸液中各時間點的釋放率無顯著差異。CGAA 在人工瘤胃液中24 h 釋放率不超過8.51%，在人工腸液中8 h 釋放率可達99.76%。結果表明，CGAA 組樣品在人工唾液、人工瘤胃液中具有良好的穩定性，在人工真胃液中逐漸釋放，在人工小腸液中快速釋放，不存在過保護現象。

表3 CGAA 在人工消化液中的釋放率 %

3 結 論

CGAA 在人工唾液、人工瘤胃液中具有良好的穩定性，且在人工腸液中與GAA 具有同等良好的釋放率。