肝細(xì)胞癌患者血漿BIRC5、ANXA-1抗體水平及在預(yù)后判斷中的意義*

齊 銳，王何斌，李 勁，楊茂輝，馮 燕，徐 杰

攀枝花學(xué)院附屬醫(yī)院肝膽科，四川攀枝花 617000

肝細(xì)胞癌作為我國(guó)最常見(jiàn)的原發(fā)性肝癌組織學(xué)類型，約占原發(fā)性肝癌的85%～90%，同時(shí)也是造成癌癥相關(guān)死亡的第三大原因[1]。因此，為了降低病死率，早期診斷、早期預(yù)防至關(guān)重要。隨著生命醫(yī)學(xué)的發(fā)展和進(jìn)步，外周血腫瘤相關(guān)抗原自身抗體與腫瘤發(fā)病的關(guān)系逐漸受到重視。凋亡抑制因子(BIRC5)作為凋亡抑制因子基因家族成員，具有促進(jìn)癌細(xì)胞生長(zhǎng)及抑制細(xì)胞凋亡等作用[2]；膜聯(lián)蛋白A1(ANXA-1)是一種在細(xì)胞增殖和分化、凋亡細(xì)胞吞噬清除等過(guò)程中發(fā)揮重要作用的因子[3]。相關(guān)研究顯示，BIRC5、ANXA-1在癌組織中異常表達(dá)可導(dǎo)致自身抗體產(chǎn)生[4-5]，而血液中自身抗體的檢測(cè)能夠?yàn)槟[瘤早期診斷提供依據(jù)。有研究表明，肺癌患者的血液中能檢測(cè)出BIRC5、ANXA-1抗體[6-7]，但這兩種抗體表達(dá)與肝細(xì)胞癌預(yù)后的關(guān)系尚不清楚。因此，本研究主要探討肝細(xì)胞癌患者血漿BIRC5、ANXA-1抗體水平及在臨床預(yù)后判斷中的意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年5月至2019年5月在本院進(jìn)行治療的121例肝細(xì)胞癌患者作為患者組，男72例、女49例，年齡35～73歲、平均(56.69±6.45)歲，分期：Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期分別31例、40例、30例、20例。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范》中關(guān)于肝細(xì)胞癌診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]，并經(jīng)病理學(xué)檢查確診；(2)簽署知情同意書；(3)意識(shí)清楚。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)伴重要臟器功能障礙者；(2)伴其他惡性腫瘤者；(3)既往進(jìn)行放化療或手術(shù)治療者；(4)臨床資料不完整或中途退出者。另外，選取同期健康體檢者97例為對(duì)照組，男60例、女37例；年齡36～74歲，平均(56.88±6.74)歲。所有患者出院后通過(guò)電話、上門等方式進(jìn)行3年隨訪，截止時(shí)間為2022年5月31日。本研究已獲本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2血漿BIRC5、ANXA-1抗體檢測(cè) 入院后采用枸櫞酸鈉抗凝管抽取納入研究者清晨空腹外周靜脈血5 mL，3 000 r/min離心10 min后取上層血漿，置于-60 ℃冰箱內(nèi)保存。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)進(jìn)行BIRC5、ANXA-1 IgG抗體檢測(cè)[試劑盒購(gòu)自吉爾生化(上海)有限公司]。采用0.1% PBST溶液洗滌微孔板2次，將血漿標(biāo)本用0.5%小牛血清清蛋白稀釋100倍后每孔加樣50 μL，室溫孵育1.5 h，按1∶50 000稀釋的過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗人IgG抗體50 μL(艾柏森生物科技有限公司)，室溫下孵育1 h，洗板3次后顯色，并在室溫下避光顯色25 min，再加入25 μL終止液，15 min內(nèi)采用自動(dòng)酶標(biāo)儀檢測(cè)450 nm標(biāo)準(zhǔn)波長(zhǎng)和620 nm參考波長(zhǎng)處吸光度(A)。每板同時(shí)設(shè)陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照，各標(biāo)本均設(shè)復(fù)孔，測(cè)定2次。以特異性結(jié)合指數(shù)(SBR)表示血漿BIRC5、ANXA-1抗體水平,SBR=(A樣品-A陰性對(duì)照)/(A陽(yáng)性對(duì)照-A陰性對(duì)照)。

2 結(jié) 果

2.1患者組、對(duì)照組血漿BIRC5、ANXA-1抗體水平比較 患者組血漿BIRC5a、ANXA-1抗體水平均明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，兩組血漿BIRC5b抗體水平比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表1。

表1 兩組血漿BIRC5、ANXA-1抗體水平比較

2.2血漿BIRC5、ANXA-1抗體水平與肝細(xì)胞癌臨床病理特征的關(guān)系 肝細(xì)胞癌患者血漿BIRC5a、ANXA-1抗體水平與年齡、性別、腫瘤最大徑均無(wú)明顯關(guān)系(P>0.05)，但與臨床分期、遠(yuǎn)處淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、門靜脈侵犯有關(guān)(P<0.05)，而肝細(xì)胞癌患者血漿BIRC5b抗體水平與年齡、性別、腫瘤最大徑、臨床分期、遠(yuǎn)處淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、門靜脈侵犯均無(wú)明顯關(guān)系(P>0.05)，見(jiàn)表2。

表2 血漿BIRC5、ANXA-1抗體與肝細(xì)胞癌臨床病理特征的關(guān)系

2.3按截?cái)嘀捣纸M 經(jīng)ROC曲線分析，確定用于診斷肝細(xì)胞癌患者的血漿BIRC5、ANXA-1抗體水平截?cái)嘀捣謩e為1.23、1.01。分為BIRC5抗體高表達(dá)組(BIRC5抗體水平>1.23，42例)和BIRC5抗體低表達(dá)組(BIRC5抗體水平≤1.23，79例)與ANXA-1抗體高表達(dá)組(ANXA-1抗體>1.01，43例)、ANXA-1抗體低表達(dá)組(ANXA-1抗體水平≤1.01，78例)，見(jiàn)圖1。

圖1 血漿BIRC5、ANXA-1抗體水平診斷肝細(xì)胞癌患者的ROC曲線

2.4肝細(xì)胞癌患者總體生存情況 肝細(xì)胞癌患者3年總生存率為42.98%(52/121)，其中BIRC5抗體高表達(dá)組、抗體低表達(dá)組3年生存率分別為69.05%(29/42)、29.11%(23/79)，ANXA-1抗體高表達(dá)組、抗體低表達(dá)組3年生存率分別為62.12%(28/43)、30.77%(24/78)。BIRC5、ANXA-1抗體高表達(dá)組3年生存率均明顯高于BIRC5、ANXA-1抗體低表達(dá)組3年生存率(χ2=17.844、14.734，均P<0.001)。

2.5肝細(xì)胞癌患者預(yù)后的多因素Cox回歸分析 多因素Cox回歸分析結(jié)果顯示，臨床分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、門靜脈侵犯均能夠作為影響肝細(xì)胞癌患者TACE治療預(yù)后的危險(xiǎn)因素(P<0.05)，而BIRC5抗體(HR=0.35,95%CI:0.17～0.72)、ANXA-1抗體(HR=0.29,95%CI:0.16～0.53)可作為肝細(xì)胞癌患者預(yù)后的獨(dú)立保護(hù)因素(P<0.05)，見(jiàn)表3。

表3 肝細(xì)胞癌患者預(yù)后多因素Cox回歸分析

3 討 論

肝細(xì)胞癌是我國(guó)常見(jiàn)的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一，根據(jù)統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，我國(guó)肝細(xì)胞癌發(fā)病率位居癌癥的第4位，同時(shí)也是全世界第3大癌癥死亡原因[9]。該疾病起病隱匿，多數(shù)患者早期臨床癥狀不明顯，因此一旦確診多為疾病晚期，而晚期肝細(xì)胞癌術(shù)后5年內(nèi)的復(fù)發(fā)率高達(dá)70%[10]。肝細(xì)胞癌發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程。有研究發(fā)現(xiàn)，自身免疫功能在肝細(xì)胞癌發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用。腫瘤相關(guān)自身抗體(TAAb)是機(jī)體對(duì)腫瘤相關(guān)抗原進(jìn)行體液免疫應(yīng)答的產(chǎn)物，不僅具有腫瘤特異性，還與疾病的早期診斷及預(yù)后有關(guān)[11]。目前已有研究發(fā)現(xiàn)，癌組織中的外周血生物指標(biāo)的異常表達(dá)可導(dǎo)致血漿中出現(xiàn)相應(yīng)抗體，并且在無(wú)癥狀前即可被檢測(cè)，可能有助于腫瘤的早期診斷和腫瘤進(jìn)展的監(jiān)測(cè)[12]。BIRC5是一種相對(duì)分子質(zhì)量15×103、基因位于染色體17q25的Survivin蛋白，其表達(dá)與促進(jìn)細(xì)胞增殖和抑制細(xì)胞凋亡有關(guān)，并且在許多惡性腫瘤中過(guò)表達(dá)[13-14]。ANXA-1是鈣離子依賴性磷脂結(jié)合蛋白超家族成員中第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的成員，不僅具有抗炎活性，同時(shí)可通過(guò)抑制免疫細(xì)胞聚集、遷移及活性削弱機(jī)體免疫監(jiān)視功能[15]。既往研究顯示，ANXA-1在腫瘤中表達(dá)失調(diào)，并且與腫瘤的發(fā)生、轉(zhuǎn)移、多重耐藥密切相關(guān)[16]。

本研究結(jié)果顯示，患者組血漿BIRC5a、ANXA-1抗體水平均明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，且與肝細(xì)胞癌患者臨床分期、遠(yuǎn)處淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、門靜脈侵犯有關(guān)(P<0.05)，而兩組血漿BIRC5b抗體水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，說(shuō)明血漿BIRC5、ANXA-1抗體在肝細(xì)胞癌患者血漿中升高，并且可能參與疾病發(fā)展。其中BIRC5a、BIRC5b是根據(jù)BIRC5蛋白結(jié)構(gòu)不同抗原表位設(shè)計(jì)并合成的抗原多肽，而本研究BIRC5a、BIRC5b抗體在患者血漿中水平的差異是由于不同抗原表位的免疫原性不同而激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生的免疫應(yīng)答的能力也不同。既往研究顯示，胃癌患者血清ANXA1水平升高，與患者TNM分期、腫瘤大小、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有一定聯(lián)系[17]。有研究顯示，BIRC5表達(dá)在腎透明細(xì)胞癌中呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，且可作為早期診斷及不良預(yù)后指標(biāo)[18]。進(jìn)一步經(jīng)ROC曲線確定了診斷肝細(xì)胞癌的血漿BIRC5、ANXA-1抗體水平截?cái)嘀担⒏鶕?jù)截?cái)嘀捣譃楦弑磉_(dá)組與低表達(dá)組。對(duì)不同組別患者的預(yù)后比較發(fā)現(xiàn)，BIRC5、ANXA-1抗體高表達(dá)組3年生存率分別高于BIRC5、ANXA-1抗體低表達(dá)組(P<0.05)，說(shuō)明血漿BIRC5、ANXA-1抗體水平與肝細(xì)胞癌患者預(yù)后存在密切關(guān)系，推測(cè)其抗體過(guò)度表達(dá)可能抑制腫瘤發(fā)生、發(fā)展。可能是由于肝細(xì)胞癌的發(fā)展過(guò)程中能夠?qū)е卵獫{BIRC5、ANXA-1表達(dá)上調(diào)，但隨著其水平逐漸增多可刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生相應(yīng)抗體。同時(shí)多因素Cox回歸分析結(jié)果顯示，BIRC5抗體、ANXA-1抗體均可作為肝細(xì)胞癌患者預(yù)后的獨(dú)立保護(hù)因素，由此推測(cè)BIRC5、ANXA-1抗體參與肝細(xì)胞癌發(fā)生、發(fā)展，可作為評(píng)估肝細(xì)胞癌預(yù)后的有效指標(biāo)。BIRC5、ANXA-1在腫瘤組織中過(guò)度表達(dá)可抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，促進(jìn)細(xì)胞增殖[19-20]，而BIRC5、ANXA-1抗體作為機(jī)體抗腫瘤體液免疫應(yīng)答的產(chǎn)物，其表達(dá)升高說(shuō)明是機(jī)體機(jī)體免疫系統(tǒng)對(duì)腫瘤的抵抗，因此BIRC5、ANXA-1抗體表達(dá)升高能夠達(dá)到清除肝細(xì)胞癌患者機(jī)體中的BIRC5、ANXA-1蛋白，進(jìn)而抑制BIRC5、ANXA-1蛋白促進(jìn)肝細(xì)胞癌患者進(jìn)展。

綜上所述，血漿BIRC5、ANXA-1抗體水平在肝細(xì)胞癌患者中均升高，且二者抗體高水平的患者3年生存率更高，可作為預(yù)測(cè)肝細(xì)胞癌患者預(yù)后的有效生物標(biāo)志物。但本研究仍需大規(guī)模前瞻性研究的進(jìn)一步驗(yàn)證。