2例犬脾臟淋巴組織結(jié)節(jié)性增生組織病理學(xué)診斷

陳舒懷，吳曉星，吳 波，孟 雪，康 樺*

（ 1.浙江省食品藥品檢驗(yàn)研究院藥品安全評(píng)價(jià)研究中心，浙江 杭州 310052 ； 2.浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院 臨床研究中心，浙江 杭州 310009 ）

犬的脾臟腫大病理性變化主要為血腫、血管瘤、血管肉瘤和脾臟淋巴組織結(jié)節(jié)性增生（FHN）[1]。FHN臨床表現(xiàn)為腹部出血、腹脹、嗜睡和厭食[2]。臨床中直接診斷FHN較困難，通常肉眼可見脾臟呈結(jié)節(jié)性腫大，診斷時(shí)應(yīng)優(yōu)先考慮腫瘤和血腫兩種情況，再區(qū)分良性疾病（血腫、結(jié)節(jié)性增生或良性纖維組織細(xì)胞結(jié)節(jié)、血管瘤）和惡性腫瘤（血管肉瘤、惡性纖維組織細(xì)胞結(jié)節(jié)、其他肉瘤）。有研究表明，小型犬（體重小于15 kg）中，雪納瑞犬、達(dá)克斯犬和比格犬更易出現(xiàn)惡性腫瘤；大型犬中，金毛獵犬、德國牧羊犬、拉布拉多獵犬、拳擊手和標(biāo)準(zhǔn)貴賓犬易出現(xiàn)惡性腫瘤[1]。

FHN的組織病理學(xué)變化較復(fù)雜，只有對(duì)適當(dāng)取樣的標(biāo)本進(jìn)行仔細(xì)的組織病理學(xué)檢查后才能夠做出準(zhǔn)確診斷[3]。FHN是由淋巴組織和纖維組織、細(xì)胞組織共同增生而成的結(jié)節(jié)，增生中的梭形細(xì)胞和組織細(xì)胞有時(shí)會(huì)取代結(jié)節(jié)中的濾泡結(jié)構(gòu)，最終形成真正的纖維組織細(xì)胞腫瘤[4]。FHN分為Ⅰ級(jí)FHN（淋巴結(jié)增生）、Ⅱ級(jí)FHN（增生性淋巴結(jié)，含有相似數(shù)量的纖維組織細(xì)胞和淋巴組織或良性纖維組織細(xì)胞瘤）和Ⅲ級(jí)FHN（惡性纖維組織細(xì)胞瘤或伴有少量淋巴細(xì)胞的多形性肉瘤）[5]，根據(jù)其增生的細(xì)胞類型、形態(tài)學(xué)等類型可進(jìn)行更細(xì)致的分類。為闡明細(xì)胞和基質(zhì)增生的性質(zhì)，對(duì)FHN進(jìn)行準(zhǔn)確分級(jí)還需要進(jìn)行IHC染色加以鑒別。本文對(duì)2例犬脾臟淋巴組織結(jié)節(jié)性增生病例采用H.E.和IHC染色，進(jìn)行較為系統(tǒng)的鑒別診斷，以期為臨床、實(shí)驗(yàn)室診斷提供更為全面的參考。

1 病例資料

1.1 病例1

老年田園犬，雄性，年齡不詳，因食欲差就診，超聲發(fā)現(xiàn)脾臟腫大，臨床肉眼觀察可見脾臟結(jié)節(jié)性腫大。脾臟切除后，取腫大處脾臟約3 cm×2 cm×2 cm，腫塊表面呈葡萄狀結(jié)節(jié)，部分結(jié)節(jié)與正常脾臟顏色接近，部分結(jié)節(jié)呈灰白色，老年田園犬腫瘤外觀見圖1。

圖1 老年田園犬腫瘤外觀Fig.1 Appearance of tumor in elderly pastoral dogs

1.2 病例2

拳師犬，10歲，雌性，超聲檢查發(fā)現(xiàn)脾臟巨大。臨床肉眼觀察可見脾臟頭部腫大，邊緣頓圓，脾尾處巨大纖維樣腫物，拳師犬脾臟腫物見圖2。

圖2 拳師犬脾臟腫物外觀Fig.2 Appearance of spleen tumor in boxer dogs

取脾尾處腫塊約3 cm×1.5 cm×1.5 cm，切面呈乳白色，質(zhì)地較硬，拳師犬腫瘤切面見圖3。

圖3 拳師犬腫瘤切面Fig.3 Tumor appearance in Boxer canine

2 檢查結(jié)果

腫瘤使用10%中性福爾馬林固定，經(jīng)常規(guī)脫水、透明后包埋，切片后進(jìn)行H.E.和IHC染色。使用Leica Aperio GT450數(shù)位載玻片掃描儀掃描切片，觀察數(shù)字切片。

2.1 老年田園犬組織病理學(xué)檢查結(jié)果（見圖4~圖7）

圖4 淋巴組織結(jié)節(jié)性增生Fig.4 Nodular hyperplasia of lymphoid tissue

圖5 淋巴組織結(jié)節(jié)性增生導(dǎo)致血腫Fig.5 Nodular hyperplasia of lymphoid tissue causing hematoma

圖6 CD3 IHC染色Fig.6 CD3 IHC staining

圖7 CD19 IHC染色Fig.7 CD19 IHC staining

由圖4可知，老年田園犬脾臟形成淋巴小結(jié)樣的結(jié)構(gòu)，中心部淡染，有外套層結(jié)構(gòu)。

由圖5可知，紅髓結(jié)構(gòu)中含有大量的紅細(xì)胞、含鐵血黃素沉著；髓竇擴(kuò)張、被膜下血腫，可見形成高內(nèi)皮微靜脈，淋巴組織結(jié)節(jié)性增生導(dǎo)致血腫。

由圖6、圖7可知，IHC染色CD3為部分陽性，CD19為部分陽性。綜上所述，SMA為陰性，診斷為Ⅰ級(jí)FHN。

2.2 拳師犬脾臟組織病理學(xué)檢查結(jié)果（見圖8~圖11）

圖8 Ⅱ級(jí)FHN脾臟形態(tài)Fig.8 Spleen morphology of grade Ⅱ FHN

圖9 腫瘤細(xì)胞多樣Fig.9 Composed variety type of tumor cell

圖10 CD3 IHC染色Fig.10 CD IHC staining

圖11 Vimentin IHC染色Fig.11 Vimentin IHC staining

由圖8可知，拳師犬脾可見臟紅髓、白髓結(jié)構(gòu)消失，未形成淋巴小結(jié)樣的結(jié)構(gòu)，可見多個(gè)壞死區(qū)，壞死區(qū)可見血管。

由圖9可知，大量細(xì)胞核深染的淋巴細(xì)胞樣腫瘤細(xì)胞、細(xì)胞核淡染的纖維樣腫瘤細(xì)胞增生，可見核分裂象。

由圖10、圖11可知，IHC染色CD3部分為陽性，Vimentin部分為陽性。綜上，診斷為Ⅱ級(jí)FHN。

3 討論

脾臟的組織學(xué)結(jié)構(gòu)在不同物種間存在差異。犬脾臟的包膜和小梁含有更多的平滑肌，能夠進(jìn)行擴(kuò)張以儲(chǔ)存大量的紅細(xì)胞[6]。在診斷犬脾臟病理變化時(shí)，應(yīng)注意與人、大鼠、小鼠脾臟的區(qū)別。

2021年的一項(xiàng)回顧性研究發(fā)現(xiàn)，脾臟淋巴增生是犬脾切除術(shù)中最常見的疾病（15/44，34%）；血管肉瘤是犬脾切除術(shù)中最常見的惡性腫瘤（5/44，11%）；而淋巴瘤在犬脾切除術(shù)的發(fā)病率較低（1/44，2.3%）[7]。通過對(duì)165例被診斷為犬FHN的病例進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，該病平均發(fā)病年齡為10.1歲（老年犬）[8]。犬脾臟結(jié)節(jié)性腫大通常為腫瘤性，原發(fā)性脾臟結(jié)節(jié)性腫大可由多種組織產(chǎn)生，血管、纖維、平滑肌和淋巴組織[4]。本研究中，2例FHN的臨床表現(xiàn)為脾臟結(jié)節(jié)樣腫大，切面均可見灰白色區(qū)域，表面極可能是纖維組織增生，與組織病理學(xué)檢查結(jié)果一致。

據(jù)統(tǒng)計(jì)，犬最常見的脾臟腫大為淋巴和纖維組織細(xì)胞聯(lián)合增生結(jié)節(jié)[4,9]，其中結(jié)節(jié)性淋巴增生是犬中最常見的良性病變，也有報(bào)道于人、牛、羊中的情況[7,9]。結(jié)節(jié)性淋巴增生有多種分類方法，Bettini等[4]根據(jù)結(jié)節(jié)中的細(xì)胞類型，將其分為淋巴型、漿細(xì)胞型、混合型等；Valli等[10-11]根據(jù)B淋巴細(xì)胞的特點(diǎn)，將其分為邊緣區(qū)淋巴瘤（MZL）和套細(xì)胞淋巴瘤（MCL）；Moore等[12]根據(jù)腫瘤細(xì)胞的特征將其分為淋巴結(jié)增生（LNH）和復(fù)雜結(jié)節(jié)增生（CNH）。也有研究提出，參考原有分類特征，應(yīng)將該疾病分類為淋巴增生、復(fù)合增生、間質(zhì)肉瘤和組織細(xì)胞肉瘤[13]，并且不同的結(jié)節(jié)分類與犬的年齡、品種、性別和存活時(shí)間有關(guān)，8~10歲的犬多診斷為組織細(xì)胞肉瘤或間質(zhì)肉瘤[8]。

綜上所述，本研究中病例均為IHC染色CD3（T細(xì)胞）陽性，老年田園犬病例的分類為淋巴增生，良性；拳師犬病例的分類為復(fù)合增生，具有向腫瘤性疾病發(fā)展的趨勢，應(yīng)結(jié)合更多臨床信息進(jìn)行綜合診斷。老年田園犬H.E.染色切片可見被膜下血腫。犬脾臟中常與血腫有關(guān)的病理性組織改變即鐵質(zhì)結(jié)節(jié)（siderotic nodules）和淋巴增生（lymphoid hyperplasia）[14]。病例中的血腫可能是由淋巴細(xì)胞組成的“白髓”體積增大和數(shù)量增加，又因淋巴組織的變化導(dǎo)致了血液流動(dòng)改變，出現(xiàn)了血腫[15]。

無論處于何種時(shí)期，手術(shù)切除均是犬脾臟結(jié)節(jié)性腫大的最佳治療方案[16]。對(duì)于FHN的診斷，通過中低倍鏡觀察H.E.染色切片的形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)最重要，但對(duì)于判斷FHN處于哪種病變時(shí)期，則需要對(duì)免疫表型進(jìn)行檢測，可采用IHC染色或通過PCR技術(shù)進(jìn)行抗原受體基因重排（PARR）[17-19]。但目前國內(nèi)尚無較為準(zhǔn)確的免疫組化染色的標(biāo)準(zhǔn)。本文采用H.E.和IHC染色方法診斷兩例處于不同時(shí)期的FHN，以期為制定規(guī)范的犬FHN免疫學(xué)診斷方法提供參考。

4 結(jié)論

與人脾臟功能相比，犬脾臟參與更少的免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)過程，更多是具有儲(chǔ)血的功能。因此，臨床中對(duì)犬采用脾臟切除的治療方法具有非常好的療效。本文采用H.E.染色和IHC染色方法鑒別診斷兩例分級(jí)不同的FHN病例，對(duì)臨床診斷犬脾臟FHN具有一定參考價(jià)值。