一例集約化豬場偽狂犬的診斷及防控

關(guān)金連 ，趙志偉 ，韋錦福 ，賀東生

（1.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院 廣東省動物源性人獸共患病預(yù)防與控制重點實驗室，廣東 廣州 510640；2.廣西賀州市八步區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心，廣西 賀州 542800）

筆者團隊開展了一個豬場暴發(fā)偽狂犬病（Pseudorabies，PR）后的確診和防控實踐。通過發(fā)病情況調(diào)查、觀察臨床癥狀和剖解組織病變，初步判斷某集約化豬場暴發(fā)了偽狂犬病。采集2頭典型病豬的病料經(jīng)PCR鑒定為偽狂犬病毒（PRV）陽性，采集10頭病豬的血清經(jīng)PRV gE-ELISA檢測為陽性（9/10），確診該豬場流行和暴發(fā)的為豬偽狂犬病。確診后對該場豬群采取了隔離、消毒和緊急接種等綜合防控措施，快速制止了該豬場PR的流行，取得顯著的防控效果。

1 發(fā)病情況調(diào)查

某集約化養(yǎng)豬場于2021年7月出現(xiàn)定位欄懷孕母豬流產(chǎn)、產(chǎn)房母豬出現(xiàn)早產(chǎn)、產(chǎn)死胎及產(chǎn)木乃伊胎的數(shù)量增加，死胎率達(dá)30%，并且母豬產(chǎn)后出現(xiàn)高燒不食，產(chǎn)后乳房炎、子宮炎增多現(xiàn)象；產(chǎn)房內(nèi)10日齡仔豬出現(xiàn)高燒扎堆、口吐白沫大量流涎、間歇式發(fā)抖抽搐、運動不協(xié)調(diào)、頸部肌肉僵硬、四肢劃水游泳樣等神經(jīng)癥狀，最后昏迷死亡，部分仔豬還出現(xiàn)腹瀉，發(fā)病率高達(dá)100%，死亡率達(dá) 95%，腹瀉仔豬按大腸桿菌使用常用抗生素治療無效。

回顧該豬場最近引種情況，發(fā)現(xiàn)豬場同年4月份從某種豬場引進(jìn)了70頭后備母豬和2頭后備公豬，在豬場發(fā)病時，這批后備豬已投入使用。經(jīng)統(tǒng)計，后備母豬配種后返情率高占35%，此批后備豬流產(chǎn)率也占流產(chǎn)豬總數(shù)的50%。通過臨床癥狀和引種史分析，懷疑是新引進(jìn)的這批種豬帶有PRV野毒，因為引種前后和混群前都沒有進(jìn)行PRV野毒抗體和病原檢測，可能攜帶PRV野毒。

2 臨床癥狀

產(chǎn)房15日齡內(nèi)仔豬癥狀表現(xiàn)最為明顯，表現(xiàn)在體溫升高到41℃左右、食欲廢絕；出現(xiàn)耳部皮下、腹下潮紅；出現(xiàn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，開始為運動不協(xié)調(diào)、身體震顫、唾液分泌增多、頸部肌肉僵硬、四肢劃水樣運動、眼球震顫，發(fā)展至角弓反張，最后昏迷死亡，病程不超過72 h，病死率高達(dá)100%。部分48 h內(nèi)新生仔豬發(fā)病，會出現(xiàn)嘔吐、甚至腹瀉，并在24～36 h內(nèi)死亡。15日齡以上仔豬表現(xiàn)略為輕點，癥狀沒那么明顯，病死率約70%。

保育舍仔豬體溫升高；出現(xiàn)噴嚏、流涕及劇烈咳嗽等呼吸系統(tǒng)癥狀，仔豬表現(xiàn)為腹式呼吸，呼吸困難，部分7 d后自行恢復(fù)，部分發(fā)生死亡；部分豬還出現(xiàn)肌肉震顫、劇烈抽搐、驚厥，部分豬后軀麻痹，運動失衡；保育舍發(fā)病率約為50%，死淘率約為30%。

懷孕舍的妊娠母豬返情率達(dá)到了30%，比往年同期返情率顯著升高。妊娠35日以上的母豬發(fā)生部分流產(chǎn)。產(chǎn)房母豬出現(xiàn)產(chǎn)死胎和木乃伊胎，產(chǎn)弱仔和死胎等現(xiàn)象增多。

3 病理變化

剖檢病死仔豬的大體病變有：扁桃體出現(xiàn)充血、出血點、部分扁桃體及咽喉頭出現(xiàn)明顯壞死；出現(xiàn)神經(jīng)癥狀的仔豬的腦膜表面出血或充血，腦脊液增多；肝臟和脾臟表面出現(xiàn)灰白色壞死病灶；腎臟布滿針尖樣大小出血點；肺表現(xiàn)充血、出血、水腫；卡他性胃炎和腸炎；淋巴結(jié)出血等病變。流產(chǎn)母豬的胎衣可見白色壞死灶。

4 病料采集與處理

無菌采集3頭發(fā)病典型的病死仔豬的腦、扁桃體、肝、腎、脾等組織病料，加冰保存送檢。將采集的病料剪碎、同時添加無菌PBS，用組織搗碎機搗碎研磨制成懸液；組織懸液于-80℃與4℃反復(fù)凍融3次；低速離心后小心吸取上清液。上清液置-80℃冰箱凍存?zhèn)溆谩?/p>

全場使用一次性采血管采用前腔靜脈采血法采集乳豬發(fā)病對應(yīng)的母豬和發(fā)病保育豬群的血液各5份，每頭豬至少采集2 mL。所采集的血液在常溫下靜置30 min后，血清析出來后，置于4℃運輸送檢。

5 PRV gE-ELISA檢測

將采集的血清樣品使用離心機低速離心，將析出血清轉(zhuǎn)移至潔凈EP管并保存于4℃冰箱。采用IDEXX的PRV gE ELISA試劑盒按說明書進(jìn)行偽狂犬野毒抗體檢測。

6 PRV的PCR鑒定結(jié)果

瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果出現(xiàn)了與PRV陽性結(jié)果預(yù)期大小（805 bp）相同的DNA條帶（圖1）。

圖1 PRV gE的PCR擴增結(jié)果

7 PRV gE-ELISA檢測

10份樣品的PRV gE-ELISA檢測結(jié)果為：母豬偽狂犬野毒抗體陽性率為5/5，保育豬的為4/5。提示豬群為偽狂犬感染。

綜合上述的豬場發(fā)病情況、引種史、臨床發(fā)病癥狀，剖檢病豬組織病變、病料PRV的PCR鑒定和gE ELISA檢測，確診該豬場豬群為偽狂犬的急性爆發(fā)。

8 防控措施

（1）病死豬處理。按臨床表現(xiàn)區(qū)分發(fā)病豬和健康豬群，將發(fā)病豬集中隔離飼養(yǎng)。對病死豬、流產(chǎn)胎兒、死胎、胎衣無害化處理。用碘酸、醛類、酚類等消毒劑對全場進(jìn)行嚴(yán)格消毒，尤其是發(fā)病豬舍及周圍環(huán)境，保證每24 h消毒1次，連續(xù)消毒7 d。

（2）野毒抗體檢測和緊急免疫。對全場所有母豬抽血進(jìn)行實驗室PRV gE-ELISA檢測，將所有g(shù)E抗體陽性豬群集中隔離至一棟豬舍中單獨飼養(yǎng)，不可繼續(xù)混養(yǎng)，由專人專用工具飼養(yǎng)。全場母豬緊急肌肉注射接種優(yōu)質(zhì)的PRV基因缺失活疫苗，按照正常量的2倍劑量進(jìn)行肌肉免疫，3周后再加強免疫1次。母豬免疫注射執(zhí)行1頭豬使用1個針頭。淘汰2頭PRV gE-ELISA檢測結(jié)果為陽性的公豬，其它幾頭公豬緊急接種PRV活疫苗，按照正常量的2倍劑量進(jìn)免疫。3周后再加強免疫1次。對剛出生10日以內(nèi)的仔豬滴鼻免疫1頭份，對10日齡以內(nèi)發(fā)病豬直接淘汰無害化處理。對10日以上的發(fā)病仔豬進(jìn)行緊急肌肉免疫1頭份，3周后再加強免疫1次。對保育舍仔豬緊急免疫2頭份，3周后再加強免疫1次。

（3）治療和保健。所有豬群飼料添加替米考星、卡巴匹林鈣及電解多維，連用7 d。發(fā)病的乳豬和保育豬都統(tǒng)一肌注長效頭孢、控制細(xì)菌的繼發(fā)感染。

（4）加強豬群的科學(xué)飼養(yǎng)管理。做好各項環(huán)控指標(biāo)的控制，創(chuàng)造優(yōu)良飼養(yǎng)環(huán)境，執(zhí)行全進(jìn)全出的飼養(yǎng)方法，減少不同豬群疾病的交叉感染，提高營養(yǎng)水平，提高豬群的自身免疫力。采取嚴(yán)格的生物安全措施，重點加強滅蚊蠅及滅鼠的相關(guān)工作；各棟豬舍工作人員相對固定，盡量避免流動，若非生產(chǎn)工作需要，減少串舍，禁止發(fā)病豬舍與健康豬舍之間的人流與物流；嚴(yán)格執(zhí)行生產(chǎn)線衛(wèi)生防疫制度與消毒規(guī)范；嚴(yán)禁貓、狗在豬場內(nèi)隨意活動，加強滅鼠、滅蚊、滅蠅工作。若發(fā)生母豬流產(chǎn)或產(chǎn)死胎，必須要用不滲漏的膠桶收集，收集完后密封，并盡快做無害化處理，對于污染過地面要進(jìn)行徹底消毒；及時淘汰各階段低價值的病殘豬，減少傳染源，降低環(huán)境的病毒裁量。

9 防控結(jié)果

通過采取上述防控措施，7日后豬群新發(fā)病率開始減少，新發(fā)病的癥狀開始逐漸減輕、總的死亡率也開始逐漸下降。1個月后，發(fā)病率降低約為30%、死亡率顯著下降。三周后，對豬群再次加強免疫偽狂犬活苗一次，之后一個月的生產(chǎn)成績基本恢復(fù)正常水平，產(chǎn)房成活率從55%恢復(fù)到了90%；保育成活率從78%恢復(fù)到了95%；育肥成活率從90%恢復(fù)到了95%。

豬群穩(wěn)定后，重新調(diào)整整個豬場執(zhí)行的免疫程序，公豬、母豬按1頭份/頭每3個月免疫1次；后備種豬按1頭份/頭配種前6周和3周各免疫1次；產(chǎn)房仔豬按1頭份/頭1天齡之內(nèi)滴鼻免疫1次；商品豬按1頭份/頭8周齡1免，3周后加免1次。使用該防控措施后，3至6個月期間多次回訪該豬場，期間無再次爆發(fā)，則防控效果良好。