血清sLOX-1、VILIP-1和腦紅蛋白在新生兒缺氧缺血性腦病病情和預后判斷中的價值

宋 奕,肖蕾萍,張嘉玲

復旦大學附屬婦產科醫院新生兒重癥監護室，上海 200090

新生兒缺氧缺血性腦病是由于缺血缺氧導致的新生兒腦損傷，其發生率為3%～6%，臨床上主要表現為意識障礙和昏迷等，甚至出現中樞性呼吸衰竭、腦癱，該病是導致新生兒死亡的重要原因之一[1]。目前，在該病患兒的病情和預后判斷方面，臨床上常用的腦電圖和神經功能評估均存在一定的局限性，尚缺乏有效的生物學標志物。可溶性血凝素樣氧化低密度脂蛋白受體-1(sLOX-1)是反映機體炎性反應狀態和內皮損傷程度的指標，主要由血管內皮細胞和自然殺傷細胞分泌，是腦缺氧性疾病診斷和嚴重程度判斷的重要指標[2]；視錐蛋白樣蛋白-1(VILIP-1)為鈣離子結合蛋白，在神經系統中呈高表達，在腦部損傷時由神經元分泌到細胞外，與腦損傷嚴重程度有關[3]；在缺氧性腦損傷動物模型和離體實驗中腦紅蛋白被發現，其在腦缺氧適應性調節中具有重要作用[4]。本研究觀察了血清sLOX-1、VILIP-1和腦紅蛋白在新生兒缺氧缺血性腦病病情和預后判斷中的價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2019年1月至2021年12月本院收治的135例新生兒缺氧缺血性腦病患兒納入觀察組，其中男78例、女57例，母體孕周35～42周、平均(38.78±1.34)周，出生日齡2～5 d、平均(3.53±0.56)d，胎齡37～42周、平均(39.16±1.16)周。納入標準：所有患兒均符合新生兒缺氧缺血性腦病的診斷標準[5]；經頭顱CT或MRI檢查確定有腦損傷的存在；均為足月新生兒；未輸血或者輸注血液制品。排除標準：腦膜炎；外傷引起的顱內血腫；神經系統發育畸形；先天性心臟病；合并呼吸系統疾病；急慢性感染性疾病。選擇同期在本院體檢的75例健康足月新生兒納入對照組，其中男47例、女28例，母體孕周36～42周、平均(38.89±1.50)周，出生日齡2～4 d、平均(3.41±0.52)d，胎齡37～42周、平均(39.11±1.19)周。兩組患兒性別、胎齡和日齡等一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。所有患兒家屬均簽署知情同意書，本研究經醫院倫理委員會審核通過。

1.2方法

1.2.1治療方法 予觀察組新生兒缺氧缺血性腦病患兒常規清除呼吸道分泌物，控制驚厥，氧療和降低顱內壓等治療，并根據血糖、血壓和電解質檢測結果等采取對癥治療。根據患兒的具體情況予胞二磷酸注射液125 mg靜脈滴注，每天1次；重組人促紅素注射液30 U/kg，每天1次。患兒均持續治療28 d。

1.2.2分組及預后判斷 根據新生兒缺氧缺血性腦病嚴重程度的判定標準將患兒分為輕度組、中度組和重度組。病灶部位局限在1～2個腦葉為輕度；病灶部位在3～5個腦葉或者雖然病灶<3個腦葉，但伴有腦出血為中度；病灶累及6～7個腦葉或者病灶部位<6個腦葉，合并2個以上病灶腦出血為重度。

參照新生兒缺氧缺血性腦病預后不良評價標準[6]，評估患兒的預后。具體根據以下項目評定：(1)生命體征平穩，瞳孔、呼吸和脈搏均正常；(2)肌張力正常；(3)肌張力減弱等體征和驚厥等神經癥狀均消失；(4)可正常母乳進食；(5)原始反射正常。上述5條均滿足為痊愈。滿足(1)條和其余4條中的任意一條為好轉。未滿足痊愈和好轉標準的患兒納入預后不良組；好轉和痊愈患兒納入預后良好組。

1.2.3血液標本保留和指標檢測 于患兒入院時和對照兒童體檢時留取空腹肘靜脈血液標本3 mL，3 000 r/min離心10 min，將上清液放置在-70 ℃的冰箱中。采用酶聯免疫吸附試驗測定血清sLOX-1、VILIP-1和腦紅蛋白水平，試劑盒購自上海酶聯生物科技有限公司。

1.3觀察指標 觀察兩組血清sLOX-1、VILIP-1和腦紅蛋白水平變化，分析血清sLOX-1、VILIP-1和腦紅蛋白水平與新生兒缺氧缺血性腦病嚴重程度的關系，對臨床指標與患兒預后的關系進行單因素和多因素分析，探討血清sLOX-1、VILIP-1和腦紅蛋白檢測預測患兒預后不良的價值。

2 結 果

2.1兩組血清sLOX-1、VILIP-1和腦紅蛋白水平比較 觀察組的血清sLOX-1、VILIP-1和腦紅蛋白水平明顯高于對照組，差異均有統計學意義(P<0.01)。見表1。

表1 兩組血清sLOX-1、VILIP-1和腦紅蛋白水平比較

2.2血清sLOX-1、VILIP-1和腦紅蛋白水平與新生兒缺氧缺血性腦病嚴重程度的關系 根據新生兒缺氧缺血性腦病嚴重程度將患兒分為輕度組53例，中度組47例和重度組35例。重度組血清sLOX-1、VILIP-1和腦紅蛋白水平明顯高于中度組和輕度組(P<0.01)，而中度組血清sLOX-1、VILIP-1和腦紅蛋白水平明顯高于輕度組(P<0.01)。見表2。

表2 血清sLOX-1、VILIP-1和腦紅蛋白水平與新生兒缺氧缺血性腦病嚴重程度的關系

2.3新生兒缺氧缺血性腦病預后不良影響因素的單因素分析 所有患兒治療后隨訪28 d，根據預后情況分為預后不良組32例，預后良好組103例。新生兒缺氧缺血性腦病患兒預后不良與Apgar評分、開始治療日齡、sLOX-1、VILIP-1和腦紅蛋白水平有關(P<0.01)，而與性別、孕周、日齡、胎齡、生產方式、出生時體質量、體溫、心率、臍帶異常，以及母體貧血、妊娠期糖尿病和妊娠期高血壓無關(P>0.05)。見表3。

表3新生兒缺氧缺血性腦病預后不良影響因素的單因素 分析[n/n或或n(%)]

2.4血清sLOX-1、VILIP-1和腦紅蛋白預測新生兒缺氧缺血性腦病患兒預后不良的效能 血清sLOX-1、VILIP-1和腦紅蛋白預測新生兒缺氧缺血性腦病患兒預后不良的效能明顯高于Apgar評分和開始治療日齡(P<0.05)。根據新生兒缺氧缺血性腦病患兒是否發生預后不良進行二元Logistic回歸分析，方程為Y=0.01×XsLOX-1+12.53×XVILIP-1+0.25×X腦紅蛋白-28.33。3項指標聯合檢測的靈敏度為96.9%，特異度為86.4%，曲線下面積(AUC)為0.971，AUC明顯高于sLOX-1(Z=2.289，P=0.022)、VILIP-1(Z=2.635，P=0.008)和腦紅蛋白(Z=3.263，P=0.001)單項指標檢測，而這3項指標之間AUC的差異無統計學意義(P>0.05)。見表4、圖1。

表4 血清sLOX-1、VILIP-1和腦紅蛋白預測新生兒缺氧缺血性腦病患兒預后不良的效能

圖1 血清sLOX-1、VILIP-1和腦紅蛋白預測新生兒缺氧性腦病患兒預后不良的ROC曲線

2.5新生兒缺氧缺血性腦病預后不良影響因素的多因素分析 根據ROC曲線分析中的截斷值，對單因素分析中差異有統計學意義的指標進行賦值：Apgar評分>6分賦值2，≤6分賦值1；開始治療日齡≤2 d為2，>2 d為1；sLOX-1>888.02 ng/L為2，≤888.02 ng/L為1；VILIP-1>0.83 μg/L為2，≤0.83 μg/L為1；腦紅蛋白>24.22 pg/mL為2，≤24.22 pg/mL為1。根據是否發生預后不良進行二元Logistic回歸分析，發現血清sLOX-1>888.02 ng/L、VILIP-1>0.83 μg/L和腦紅蛋白>24.22 pg/mL是新生兒缺氧缺血性腦病患兒預后不良的獨立危險因素(P<0.01)。見表5。

表5 新生兒缺氧缺血性腦病預后不良影響因素的多因素分析

3 討 論

新生兒缺氧缺血性腦病是導致新生兒致殘和致死的重要因素，早期診斷和早治療是改善新生兒預后的關鍵。目前臨床上診斷新生兒缺氧缺血性腦病主要依靠頭顱CT或者MRI，但以上項目往往需要多次檢查、存在假陰性等弊端，甚至在病情十分嚴重時，頭顱影像學檢查結果仍無異常的情況時有發生[7]。如何早期對新生兒缺氧缺血性腦病的嚴重程度進行判斷，提高治療效果，改善預后是目前研究的熱點。

sLOX-1是一種能夠與低密度脂蛋白結合的細胞因子，能夠使機體的低密度脂蛋白大量降解，從而引起新生兒的脂質代謝紊亂[8]。sLOX-1能夠與氧化型低密度脂蛋白結合并將其降解，減少后者對心腦血管的損傷，水平異常升高的sLOX-1能夠促進低密度脂蛋白的異常降解，導致新生兒機體脂質代謝紊亂，促使病情加重[9]。本研究顯示，觀察組血清sLOX-1水平明顯高于對照組，并且血清sLOX-1水平隨著新生兒缺氧缺血性腦病嚴重程度升高而升高，說明血清sLOX-1是反映新生兒缺氧缺血性腦病嚴重程度的指標，與文獻[10]報道結果一致。本研究發現血清sLOX-1>888.02 ng/L是新生兒缺氧缺血性腦病預后不良的獨立危險因素，預后不良組血清sLOX-1水平明顯高于預后良好組，說明血清sLOX-1是反映新生兒缺氧缺血性腦病預后的指標。現有研究顯示，血清sLOX-1水平與新生兒缺氧缺血性腦病患兒的神經功能損傷有關，sLOX-1水平的升高與機體的氧化應激反應密切相關，氧化應激產生大量氧自由基會導致機體細胞膜發生氧化損傷，從而加重神經元損傷，抑制神經元增殖，導致神經功能受損[11]。本研究顯示，血清sLOX-1為888.02 ng/L時，其預測新生兒缺氧缺血性腦病預后不良的靈敏度為78.1%，特異度為90.3%，AUC為0.883，說明血清sLOX-1水平對新生兒缺氧缺血性腦病的預后具有良好的預測價值。

VILIP-1是視錐蛋白家族成員之一，由神經元產生，并通過與鈣離子結合參與神經細胞的信息傳導和細胞凋亡的病理生理過程[12]。VILIP-1與神經功能損傷具有一定的關系，主要參與了taud蛋白的磷酸化過程，導致出現VILIP-1表達的神經元發生損傷。另一方面，VILIP-1還通過對乙酰膽堿受體的調節，進而導致神經功能缺損[13]。本研究顯示，觀察組血清VILIP-1水平明顯高于對照組，并且隨著新生兒缺氧缺血性腦病嚴重程度的升高而升高，說明血清VILIP-1是反映新生兒缺氧缺血性腦病嚴重程度的指標。VILIP-1是神經元損傷的潛在生物標志物，主要存在于神經元細胞中，當腦組織發生損傷時，表達VILIP-1的細胞將釋放大量的VILIP-1到外周血中，VILIP-1被認為是反映腦損傷嚴重程度的重要指標[14]。本研究還顯示，血清VILIP-1>0.83 μg/L是新生兒缺氧缺血性腦病患兒預后不良的獨立危險因素，預后不良的新生兒血清VILIP-1水平明顯高于預后良好者，說明血清VILIP-1是反映新生兒缺氧缺血性腦病預后的指標。本研究還發現，血清VILIP-1為0.83 μg/L時，預測新生兒缺氧缺血性腦病患兒預后不良的靈敏度為87.5%，特異度為72.8%，AUC為0.875，說明VILIP-1對預測預后不良有較高的效能。

腦紅蛋白是一種攜氧蛋白，主要在神經組織廣泛表達，參與了神經元的儲氧和氧運輸的過程，可提高神經元內的氧分壓，與神經元的存活具有密切的關系[15]。在腦缺氧狀態下，血清腦紅蛋白水平代償性增加，對神經元具有保護作用(代償越嚴重，說明疾病越重)，能夠改善神經組織的缺氧，促進氧氣向神經元線粒體內的傳遞，清除氧化應激產生的大量自由基，從而減輕神經元細胞的損傷[16]。在動物實驗中同樣證實，轉染腦紅蛋白基因的心肌和腦組織對缺氧的耐受程度進一步提高[17]。有研究者發現多種因素影響了腦紅蛋白的表達，從而發揮對腦的保護作用，其表達水平與腦損傷的嚴重程度有關，是反映腦損傷嚴重程度的指標[18]。本研究顯示，觀察組血清腦紅蛋白水平明顯高于對照組，并且發現血清腦紅蛋白水平隨著新生兒缺氧缺血性腦病嚴重程度升高而升高，說明血清腦紅蛋白為代償性增加，水平越高，病情越重，其也是評價缺氧缺血性腦病嚴重程度的指標，與文獻[18]報道的結果一致。本研究結果還顯示，血清腦紅蛋白>24.22 pg/mL是新生兒缺氧缺血性腦病預后不良的獨立危險因素，預后不良組血清腦紅蛋白水平明顯高于預后良好組。血清腦紅蛋白為24.22 pg/mL時，其預測新生兒缺氧缺血性腦病預后不良的靈敏度為65.6%，特異度為87.4%。同時，本研究顯示血清sLOX-1、VILIP-1和腦紅蛋白聯合檢測在預測新生兒缺氧缺血性腦病患兒發生預后不良方面具有更高的效能，明顯高于單項指標檢測，其靈敏為96.9%，特異度為86.4%，說明3項指標之間具有某種互補性，其內在聯系需要進一步研究。

綜上所述，血清sLOX-1、VILIP-1和腦紅蛋白與新生兒缺氧缺血性腦病的嚴重程度具有密切聯系，3項指標是預后不良的獨立危險因素，在預測預后不良方面具有較高的價值。