高遷移率族蛋白B1在糖尿病周圍神經(jīng)病變患者血清中的表達及臨床意義

馬永賓

常州市金壇第一人民醫(yī)院，江蘇常州 213200

糖尿病周圍神經(jīng)病變（diabetic peripheral neuropathy, DPN）是糖尿病最為嚴重的并發(fā)癥之一，影響高達60%的糖尿病患者，且經(jīng)常會發(fā)生難以愈合的足部潰瘍，最終導致壞疽，甚至截肢[1]。由于DPN早期發(fā)病隱匿，當出現(xiàn)臨床癥狀時，周圍神經(jīng)病變多已經(jīng)進展至晚期。因此，早期診斷對于延緩DPN的進展，進而改善其不良結局具有重要意義。目前，神經(jīng)肌電圖神經(jīng)傳導速度檢查和震動感覺閾值分別被認為是臨床診斷DPN的重要評估手段，但這兩者不僅需要專門的醫(yī)師進行繁瑣的操作，且不能實現(xiàn)大規(guī)模的臨床篩查，限制了其臨床的應用[2-3]。探尋新型、高效且無創(chuàng)的DPN診斷生物標志物顯得尤為重要。DPN被認為是一種炎癥性疾病[4]。研究表明，高遷移率族蛋白B1（high mobility group box 1 protein, HMGB1）是一種促炎細胞因子，其不僅可以以被動形式從壞死細胞中釋放，也可作為主動形式響應炎癥信號。Thakur V等[5]研究表明，在糖尿病神經(jīng)疼痛性大鼠和小鼠模型中，脊髓背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元中HMGB1的表達顯著升高，且在體外高糖誘導的神經(jīng)元中HMEG1表達亦顯著升高。這提示，HMGB1可能是DPN潛在的生物預測指標。然而，目前關于HMGB1在DPN患者血清中的水平以及對DPN臨床診斷價值尚不清楚。因此，本研究擬通過檢測2021年1—12月常州市金壇第一人民醫(yī)院收治的50例DPN患者血清中HMGB1的含量，進而評估其對DPN臨床應用的診斷價值，從而為DPN的早期診斷提供一種潛在生物預測指標，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院內(nèi)分泌科收治和確診的DPN患者50例作為DPN組和同期本院健康體檢者20名為對照組。對照組男14名，女6名；平均年齡（56.75±15.31）歲。DPN組患者男31例，女19例；平均年齡（60.90±10.48）歲。兩組一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究已通過常州市金壇第一人民醫(yī)院倫理委員會的批準。

1.2 納入與排除標準

納入標準：①符合糖尿病診斷標準；②符合DPN診斷標準[8]，且無糖尿病足、視網(wǎng)膜病變及嚴重肝、腎、心主要臟器病變癥狀。

排除標準：①妊娠期糖尿病等特殊類型的糖尿病者；②腰椎性病變、格林巴利綜合征等原因誘發(fā)的非糖尿病性周圍神經(jīng)病變者；③目前正在使用的非甾體性藥物者；④伴發(fā)其他疾病者，如腫瘤、嚴重的肝臟疾病、自身免疫疾病以及其他類型的感染性疾病者。

1.3 方法

①血清標本采集與處理：DPN患者和健康體檢正常者空腹采集靜脈血標本，其中采集的靜脈全血分別放入乙二胺四乙酸鹽(ethylenediamine tetraacetic acid, EDTA)抗凝紫色頭真空管（2 mL）中用于分析糖化血紅和含有分離膠的黃色頭真空管中（5 mL）。隨后將黃色頭的真空管置于離心機中，3 000 rpm，離心5 min分離血清用于生化和酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)檢測。

②血清生化項目檢測：將上述離心獲得的血清置于AU5800全自動生化分析儀（Becman Coulter）檢測血糖相關生化指標。使用H9糖化血紅蛋白檢測分析儀（普門）檢測。

③血清HMGB1含量檢測：人HMGB1試劑盒、ELISA試劑盒購自武漢華聯(lián)科生物技術有限公司（貨號：HM10235），具體操作步驟參加試劑盒說明書。使用AMR-100酶標儀（杭州奧盛儀器有限公司）檢測450 nm處光密度值并繪制標準曲線后計算樣本中HMGB1的濃度。

1.4 觀察指標

①兩組空腹血糖、餐后2 h血糖水平；②兩組血清中HMGB1的濃度。

1.5 統(tǒng)計方法

采用SPSS 22.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，符合正態(tài)分布的計量資料以(±s)表示，組間差異比較采用t檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組血糖指標比較

DPN組空腹血糖以及糖化血紅蛋白顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組血糖指標對比(±s)

表1 兩組血糖指標對比(±s)

血糖指標空腹血糖（mmol/L）糖化血紅蛋白（%）對照組（n=20）4.92±0.31 3.53±0.85 DPN組（n=50）9.41±3.40 9.05±2.66 t值5.880 9.030 P值＜0.05＜0.05

2.2 兩組血清中HMGB1含量分析

對照組和DPN組患者血清中HMGB1的含量分別為（28.70±7.46）ng/mL、（112.64±27.69）ng/mL，DPN組的HMGB1含量顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（t=13.311，P＜0.001）。見圖1。

圖1 兩組患者血清中HMGB1含量

3 討論

DPN是糖尿病最為常見和早期發(fā)展的并發(fā)癥，約占糖尿病患者的60%，其經(jīng)常會導致反復性的足部潰瘍，最終進展為足部壞疽而截肢，這也是全球截肢的第二大原因[6]。由于DPN早期發(fā)病隱匿，多數(shù)罹患DPN的患者臨床確診時神經(jīng)病變程度已進展至晚期，從而錯過最佳的治療時機，且預后較差。目前，對DPN早期診斷仍然缺乏有效的檢測手段。神經(jīng)肌電圖神經(jīng)傳導速度檢查等為DPN的診斷提供了有價值的參考，但其操作繁瑣，價格昂貴，且不利于臨床開展大規(guī)模的篩查應用。在本研究中，通過檢測DPN患者血清中的HMGB1含量，在一定程度上為早期篩查和診斷DPN提供了可參考的生物預測指標。

HMGB1是一種存在于哺乳動物細胞內(nèi)的高度保守的核蛋白。在病理條件下，HMGB1可以通過壞死或受損的體細胞被動釋放到細胞質(zhì)和細胞外環(huán)境，從而參與炎癥地發(fā)生和發(fā)展，且已被證實其是炎癥發(fā)生的“觸發(fā)因素”[7-9]。近年來，研究表明HMGB1在神經(jīng)炎癥和神經(jīng)病態(tài)地發(fā)展中起著至關重要的作用。Thakur V等[5]研究顯示，HMGB1在糖尿病疼痛性神經(jīng)病變大鼠和小鼠模型的脊髓背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元中的表達水平顯著升高，且在體外高糖誘導的神經(jīng)元中HMGB1表達也顯著升高。在尿鏈霉素誘導的糖尿病神經(jīng)病變性疼痛模型中，腰椎背角神經(jīng)元中HMGB1表達顯著上調(diào)[10]。這些研究主要在動物模型及細胞水平進行探究，而在人DPN血清中未見報道。基于臨床前轉(zhuǎn)化研究考慮，本研究探索人DPN患者血清中HMGB1的表達情況，結果顯示DPN患者血清中的HMGB1含量顯著高于健康體檢的對照組（P＜0.05）。這提示HMGB1可能在DPN的進展過程中發(fā)揮了一定的作用。Zhao H等[11]報道，靶向HMGB1地表達能抑制炎癥反應促進視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞存活，進而改善了糖尿病視網(wǎng)膜病變。本研究也進一步為DPN，尤其是下肢神經(jīng)病變提供了潛在的治療靶點。

最近報道顯示，膿毒血癥患者血清中HMGB1含量顯著升高，且認為測量膿毒血癥患者血清中的HMGB1對于臨床判斷膿毒血癥長期預后以及初始治療決策具有相當重要的價值[12-14]。這提示，HMGB1可能作為膿毒血癥患者的預后生物預測指標。在研究中，DPN患者血清中的HMGB1含量顯著高于健康體檢的對照組（P＜0.05）。提示HMGB1可能是潛在DPN生物預測指標[15-17]。然而，值得注意的是，本研究樣本量較小，接下來仍需要臨床多中心聯(lián)合研究以驗證其有效性。此外，本研究仍存在局限性，沒有評估初次發(fā)現(xiàn)的糖尿病患者血清中HMGB1的含量，在接下來的研究中也將對此進行進一步的對比研究，從而為HMGB1成為DPN診斷生物預測指標成為可能。

綜上所述，DPN患者血清中HMGB1顯著升高，檢測HMGB1對于臨床早期診斷和篩查DPN具有一定的參考價值，也為DPN的治療提供了潛在的靶點。