7 種蔬菜中12 種農(nóng)藥殘留的加標(biāo)與基質(zhì)效應(yīng)討論

鶴壁市農(nóng)產(chǎn)品檢驗(yàn)檢測(cè)中心 劉小麗

氣相色譜法檢測(cè)水果與蔬菜中的農(nóng)藥殘留具有快速、準(zhǔn)確、靈敏度高、重現(xiàn)性好的優(yōu)勢(shì)，是農(nóng)藥殘留分析應(yīng)用中最普遍的技術(shù)。試驗(yàn)通過比較7 種瓜類蔬菜中12 種農(nóng)藥在氣相色譜上的基質(zhì)效應(yīng)，發(fā)現(xiàn)其均存在不同程度的基質(zhì)增強(qiáng)或減弱效應(yīng)，基質(zhì)效應(yīng)的強(qiáng)弱和農(nóng)藥濃度之間沒有很強(qiáng)的關(guān)聯(lián)，卻與蔬菜的種類和農(nóng)藥的結(jié)構(gòu)、極性的強(qiáng)弱有關(guān)。

一、材料與方法

（一）試驗(yàn)儀器及試劑

試驗(yàn)儀器為Agilent GC 7890B 氣相色譜儀（配有FPD 檢測(cè)器、自動(dòng)進(jìn)樣器、分流/不分流進(jìn)樣口），高速分散均質(zhì)機(jī)、氮吹儀、快速混勻器、電子天平、均漿機(jī)、氮吹儀。試劑有乙腈（色譜純）、丙酮（色譜純）和氯化鈉（分析純）。

（二）實(shí)驗(yàn)方法

根據(jù)《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留檢測(cè)方法》（NY/T 761—2008）進(jìn)行檢測(cè)。

（三）試驗(yàn)材料

試驗(yàn)材料有黃瓜、南瓜、絲瓜、苦瓜、冬瓜、西葫蘆、佛手瓜共7 種。

（四）標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置

標(biāo)準(zhǔn)溶液由農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所提供，溶液質(zhì)量濃度均為100μg·mL-1。有機(jī)磷標(biāo)液用丙酮稀釋至10μg·mL-1；有機(jī)氯標(biāo)液用正己烷稀釋至10μg·mL-1。

二、試驗(yàn)條件和過程

（一）試驗(yàn)條件

1.有機(jī)磷檢測(cè)條件。色譜柱F-5 ms（30 m×0.25 mm×0.25μm），溫度80℃，保持1 min，以每分鐘20℃的速度上升到130℃，再以每分鐘5℃的速度上升到200℃，最后以每分鐘15℃的速度上升到250℃，保持11 min。進(jìn)樣體積為1μL，進(jìn)樣模式為不分流進(jìn)樣，檢測(cè)器溫度300℃，進(jìn)樣口溫度250℃，氮?dú)饬魉倜糠昼?0 mL，柱流速每分鐘2 mL，空氣流速每分鐘17 mL，氫氣流速每分鐘14 mL。

2.有機(jī)氯檢測(cè)條件。色譜柱VF-1 ms（30 m×0.32 mm×0.25μm），溫度80℃，保持1 min，以每分鐘15℃的速度上升到280℃,保持10 min。進(jìn)樣體積為1μL，進(jìn)樣模式為不分流進(jìn)樣，檢測(cè)器溫度300℃，進(jìn)樣口溫度250℃，氮?dú)饬魉倜糠昼?0 mL，柱流速每分鐘2 mL。

（二）凈化提取過程

試驗(yàn)樣品破碎混勻后裝入塑料盒內(nèi)（樣品中不含有加標(biāo)農(nóng)藥）。準(zhǔn)確稱取25 g 試樣,加入50 mL 乙腈,在勻漿機(jī)中高速勻漿2 min 后用濾紙過濾。過濾前用純水濕潤(rùn)濾紙，過濾結(jié)束時(shí)用玻璃棒壓濾紙擠凈濾液。濾液收集到裝有5～7 g 氯化鈉的100 mL 具塞量筒中，蓋上蓋子，劇烈震蕩1 min，在室溫下靜置30 min,使乙腈相和水相分層。用大肚管從100 mL 具塞量筒中分別吸取10 mL 乙腈溶液于2 個(gè)小燒杯中,將燒杯放在80℃水浴鍋上加熱,氮吹近干。

檢測(cè)有機(jī)磷時(shí)，用丙酮定容至5 mL,在旋渦混合器上混勻,用一次性針管吸液，過濾后上機(jī)測(cè)定。

檢測(cè)有機(jī)氯時(shí)，先將弗羅里夕柱預(yù)淋洗，依次用5 mL 丙酮和正己烷混合溶液（10+90）、5 mL 正己烷預(yù)淋洗。預(yù)淋洗結(jié)束后將樣品液倒入小柱內(nèi)，用刻度離心管承接，用5 mL 丙酮和正己烷混合溶液（10+90）沖洗燒杯后淋洗小柱，并重復(fù)1 次。溫度調(diào)至50℃氮吹至2 mL 左右，用正己烷定容至5 mL，在混勻器上混勻，用一次性吸管移入2 mL 進(jìn)樣瓶?jī)?nèi)，上機(jī)測(cè)定。

（三）加標(biāo)過程

計(jì)算公式：標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度×吸出量=所配標(biāo)液濃度×容量瓶容量。

1.有機(jī)磷加標(biāo)。一是有機(jī)磷樣品加標(biāo)：乙酰甲胺磷、甲胺磷、對(duì)硫磷、二嗪磷、樂果、馬拉硫磷標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度均為10μg·mL-1。按公式計(jì)算得出，吸500μL到25 g 樣品中，配制濃度為0.2μg·mL-1。配制完成后上機(jī)測(cè)定峰面積和保留時(shí)間。二是有機(jī)磷基質(zhì)加標(biāo)：乙酰甲胺磷、甲胺磷、對(duì)硫磷、二嗪磷、樂果、馬拉硫磷標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度均為10μg·mL-1。將空白樣品前處理后定容的5mL，2 mL 作空白，其余3 mL 配制混標(biāo)。按公式計(jì)算需吸40μl 到2 mL 容量瓶中，配制濃度為0.2μg·mL-1。配制完成后上機(jī)測(cè)定峰面積和保留時(shí)間。

某校高一年級(jí)共有20個(gè)班，每班有50名學(xué)生．為了了解高一學(xué)生的視力狀況，從這1?000人中抽取一個(gè)容量為100的樣本進(jìn)行檢查，該怎樣檢查？

2 .有機(jī)氯加標(biāo)。一是有機(jī)氯樣品加標(biāo)：三唑酮、異菌脲、甲氰菊酯、聯(lián)苯菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度均為10μg·mL-1。按公式計(jì)算得出，吸500μl 到25 g 樣品中，加標(biāo)量為0.2μg·g-1，配制完成后上機(jī)測(cè)試峰面積和保留時(shí)間。二是有機(jī)氯基質(zhì)加標(biāo)：三唑酮、異菌脲、甲氰菊酯、聯(lián)苯菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度均為10μg·mL-1。將空白樣品前處理后定容的5mL，2 mL 作空白，其余3 mL 配制混標(biāo)。按公式計(jì)算需吸40μL 到2 mL 基質(zhì)溶液中，配制濃度為0.2μg·mL-1，配制完成后上機(jī)測(cè)試峰面積和保留時(shí)間。

（四）配制校準(zhǔn)曲線

1.溶劑配制校準(zhǔn)曲線。有機(jī)磷用丙酮做溶劑，有機(jī)氯用正己烷做溶劑，分別配制0.05μg·mL-1、0.10μg·mL-1、0.20μg·mL-1、0.50μg·mL-1、1.0μg·mL-1濃度水平的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，配制完成后上機(jī)測(cè)定峰面積和保留時(shí)間。以峰面積為縱坐標(biāo)，以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到直線方程。

2.基質(zhì)配制校準(zhǔn)曲線。用所選的干凈樣品基質(zhì)做溶液，分別配制0.05μg·mL-1、0.10μg·mL-1、0.20μg·mL-1、0.50μg·mL-1、1.0μg·mL-1濃度水平的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，配制完成后上機(jī)測(cè)定峰面積和保留時(shí)間。以峰面積為縱坐標(biāo)，以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到直線方程。

三、結(jié)果分析

（一）標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)性

有機(jī)磷、有機(jī)氯農(nóng)藥溶劑標(biāo)準(zhǔn)工作曲線和不同基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的相關(guān)系數(shù)可以達(dá)到0.995，線性關(guān)系非常好，符合《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測(cè)》（GB/T 27404—2008）標(biāo)準(zhǔn)要求。這就為從基質(zhì)加標(biāo)色譜圖中和樣品加標(biāo)色譜中比較農(nóng)藥殘留量提供了較好的依據(jù)。

(二)基質(zhì)效應(yīng)

基質(zhì)效應(yīng)計(jì)算公式：基質(zhì)效應(yīng)=B/A，A 為基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率，B 為試劑標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率。

從表1 中可以看出12 種農(nóng)藥在7 種瓜類蔬菜中均有不同程度的基質(zhì)效應(yīng)，同一種農(nóng)藥在不同瓜類蔬菜中的基質(zhì)效應(yīng)也不相同，樂果在苦瓜的基質(zhì)效應(yīng)最強(qiáng)，溴氰菊酯在南瓜的基質(zhì)效應(yīng)最弱。

表1 12 種有機(jī)磷農(nóng)藥在7 種瓜類蔬菜中基質(zhì)效應(yīng)的差異性分析

（三）回收試驗(yàn)的準(zhǔn)確度與精密度

用溶劑標(biāo)液計(jì)算時(shí)，回收率為76%～139%。其中乙酰甲胺磷樣品平行測(cè)定結(jié)果的重復(fù)性差。有機(jī)氯前處理過程比有機(jī)磷多了過弗羅里夕柱和第2 次氮吹2 個(gè)步驟，樣品平行測(cè)定重復(fù)性好。用基質(zhì)標(biāo)液計(jì)算時(shí)，回收率為88%～115%，回收率比用溶劑標(biāo)液計(jì)算時(shí)好。其中，乙酰甲胺磷樣品平行測(cè)定結(jié)果的重復(fù)性依然不好，把平行測(cè)定次數(shù)增加至6，峰面積隨著測(cè)定次數(shù)的增加而增加，6 次測(cè)定值的RSD 達(dá)到14%。更換進(jìn)樣墊、襯管、老化色譜柱后再次測(cè)定，6 次測(cè)定值的RSD 為5%。有機(jī)氯回收率變化不大。由此可以認(rèn)為基質(zhì)效應(yīng)、襯管與色譜柱污染是造成回收率過高或過低的主要原因。

四、影響準(zhǔn)確度與精密度的原因及解決方法

（一）襯管與色譜柱

當(dāng)襯管與色譜柱污染后，峰面積會(huì)隨著測(cè)定次數(shù)的增加而增加，影響測(cè)定結(jié)果的RSD 值。操作人員應(yīng)經(jīng)常更換進(jìn)樣墊與襯管，防止進(jìn)樣墊屑與襯管里的臟東西進(jìn)入色譜柱，還要對(duì)色譜柱進(jìn)行定期老化處理，清除色譜柱里的殘留，色譜柱老化后要將柱頭切去5～10 cm，確保色譜柱的干凈程度。特別在進(jìn)行比對(duì)時(shí)，要用新的進(jìn)樣墊與干凈的色譜柱。

（二）基質(zhì)效應(yīng)

不同種農(nóng)藥在不同蔬菜中均有不同程度的基質(zhì)效應(yīng)，同一種農(nóng)藥在不同蔬菜中的基質(zhì)效應(yīng)也不相同，為了準(zhǔn)確定量，理論上每種基質(zhì)都需要制作對(duì)應(yīng)的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線。為減少工作量，在不影響結(jié)果準(zhǔn)確性的前提下，可以選擇1 種有代表性的基質(zhì)作為通用基質(zhì)。在此方法中用黃瓜基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算，12 種農(nóng)藥在7 種蔬菜中的回收率范圍為90%～110%，其定量結(jié)果與采用對(duì)應(yīng)基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算接近，工作中黃瓜可作為瓜類蔬菜的通用基質(zhì)。

（三）注意事項(xiàng)

為保證試驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，在操作過程中要注意以下幾方面。

1.用10 mL 大肚管吸取乙腈溶液前，要用乙腈溶液潤(rùn)洗大肚管3 次，吸取時(shí)刻度要準(zhǔn)確。

2.氮吹時(shí)，氣流大了容易把液體吹出造成損失，氣流太小使氮吹時(shí)間延長(zhǎng)，都會(huì)影響回收率。氮吹近干要求小燒杯內(nèi)壁有潮潮的一層，吹干后回收率小。氮吹過程中要用干凈濾紙擦去針頭上的水珠，防止水珠落入瓶中影響結(jié)果。

3.有機(jī)磷樣品氮吹結(jié)束加入5 mL 丙酮，馬上加蓋鋁箔，防止揮發(fā)，影響結(jié)果。

4.凈化淋洗弗羅里夕柱時(shí)小柱不能干，當(dāng)溶劑液面到達(dá)柱吸附層表面時(shí)，立即倒入凈化溶液。小柱干了不容易洗脫，影響回收率。