六項聯合指標在陰道微生態評價中的應用價值

周小微

福建醫科大學附屬南平第一醫院檢驗科，福建南平 353000

正常情況下陰道微生態環境是由正常陰道解剖結構、內分泌周期的變化、陰道局部免疫系統、陰道各種菌群四大部分組成[1-2]。正常情況下，陰道內有大量乳酸桿菌，同時也含有少量機會致病菌如棒狀菌、非溶血性鏈球菌、腸球菌、表皮葡萄球菌、大腸埃希菌、加德納菌、類桿菌和假絲酵母菌等。當機體抵抗力低下、內分泌水平變化、病原微生物感染等原因破壞這種平衡后，雜菌或機會致病菌可增多，同時白細胞及膿細胞大量出現，此時陰道清潔度下降，可繼發陰道感染[3-4]。通過對陰道分泌物涂片進行革蘭氏染色，檢查其優勢菌、菌群多樣性、菌群密集度及白細胞數，對陰道微生態進行評估，這是目前臨床上常用的方法[5-6]。國內沈莉等[7]研究報道應用功能檢測可以替代革蘭氏染色涂片檢查，但本研究通過收集2960例患者的陰道分泌物進行細菌性陰道炎（bacterial vaginosis，BV）、需氧菌性陰道炎（aerobic vaginitis，AV）六項聯合檢測，發現六項聯合檢測判定AV尚不能替代革蘭氏染色鏡檢，現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取福建醫科大學附屬南平第一醫院（我院）2021年1—5月婦科門診2960例患者的陰道分泌物檢查。本研究對所有納入患者的陰道微生態情況評估檢測方法均采用陰道炎六項聯合檢測和革蘭氏染色涂片。本研究均經患者知情同意，同時取得我院醫學倫理委員會委員批準同意。入選患者年齡19～60歲，平均（35.69±3.62）歲；病程1～5個月，平均（2.48±0.37）個月。

納入標準：①我院婦科門診陰道分泌物檢測患者，均有過性生活；②標本采集前禁性生活3 d；③標本采集前1周未行陰道灌洗、2周未使用干擾檢測結果相關藥物；④月經干凈≥3 d；⑤無泌尿系統疾病。排除標準：①患有嚴重器質性或代謝性疾病者；②3 d內進行陰道灌洗；③血性標本。本研究尊重每位患者的隱私權并進行資料保密。

1.2 檢查方法

1.2.1 樣本采集 采用無菌拭子或無菌棉簽采集陰道分泌物，拭子或棉簽于陰道深部、穹窿后部或宮頸口進行采集，置于無菌試管中迅速送檢，標本60 min內檢測完成。

1.2.2 主要儀器及試劑 陰道微生態檢測試劑盒（山東仕達思生物產業有限公司，生產批號：21021101）；革蘭氏染色試劑包括龍膽紫、碘溶液、脫色液和沙黃溶液（珠海貝索生物技術有限公司，生產批號：C200402）；生物顯微鏡（仕達思公司，型號：UNIT-700）。

1.2.3 操作方法 （1）檢測方法。①濕片顯微鏡鏡檢：對清潔度、真菌、陰道滴蟲、線索細胞進行檢查，操作方法參照《全國臨床檢驗操作規范》[8]；②革蘭氏染色涂片鏡檢：對優勢菌、菌群多樣性、菌群密集度及炎癥反應進行檢查[9]；③陰道炎六項聯合檢測：包括陰道分泌物的pH酸堿度、β-葡萄糖醛酸苷酶、凝固酶、唾液酸苷酶、過氧化氫濃度、白細胞脂酶六項指標。（2）陰道微生態評價標準。菌群正常：菌群的多樣性、密集度為Ⅱ～Ⅲ級；革蘭陽性大桿菌為優勢菌；炎性反應為白細胞0～5個/HP；清潔度為Ⅰ～Ⅱ度。菌群失調：革蘭陽性大桿菌減少或缺失，或被革蘭陽性小桿菌、革蘭陽性球菌、革蘭陰性桿菌所代替。菌群抑制：優勢菌缺失、菌群多樣性≤Ⅰ級或完全沒有細菌。菌群過度增殖：革蘭陽性大桿菌為優勢菌，菌群密集度增高，在Ⅲ～Ⅳ級之間，革蘭陽性大桿菌過度增殖[10]。

1.3 觀察指標及評價標準

①分析BV、AV兩種檢查方法的最終結果；②分析陰道炎六項聯合檢測最終結果；③分析菌群正常、異常預成酶陽性率。符合率=（真陽性+真陰性）例數/總例數×100%。特異度=真陰性/（假陽性+真陰性）×100%。敏感度=真陽性/（真陽性+假陰性）×100%。

1.4 統計學分析

應用SPSS 20.0統計學軟件對數據進行分析。計量資料以均數±標準差（x±s）表示，應用t檢驗；計數資料以[n（%）]表示，應用χ2檢驗。檢驗水準α=0.05。P＜ 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 陰道炎六項聯合檢測結果分析

菌群正常1200例（40.54%），菌群抑制239例（8.07%），菌群失調1112例（37.57%）；菌群過度增殖59例（1.99%），病原體被檢出350例（11.83%），詳見表1。

表1 陰道微生態六項指標聯合檢測結果分析[n（%）]

2.2 陰道菌群正常、異常預成酶陽性率分析

菌群正常預成酶陽性率低于菌群異常預成酶陽性率，差異有統計學意義（P＜ 0.05）；但菌群正常、異常凝固酶陽性率比較，差異無統計學意義（P＞ 0.05）。見表2。

表2 正常、異常菌群預成酶陽性率分析

2.3 兩種方法檢測BV的結果分析

兩種方法檢測BV結果的符合率為94.76%，陰道炎六項聯合檢測的陽性率為13.21%，與革蘭氏染色涂片鏡檢的13.55%比較，差異無統計學意義（χ2=2.532，P=0.126）。陰道炎六項聯合檢測的符合率為98.91%，特異度為99.57%，敏感度為94.76%。見表3。

表3 兩種方法檢測厭氧性陰道炎的結果分析

2.4 兩種方法檢測AV的結果分析

兩種方法檢測AV結果的總符合率為95.90%。陰道炎六項聯合檢測法陽性率為7.60%，與革蘭氏染色涂片鏡檢的8.61%相比較，差異有統計學意義（χ2=7.500，P=0.006）。見表4。

表4 兩種方法檢測AV的結果分析

3 討論

女性陰道微生態是由陰道解剖結構、陰道微生物群、內分泌系統以及陰道局部免疫系統共同組成的一個復雜的微生態系統。女性陰道是一個處于相對開放狀態的生態環境，健康女性陰道內有乳酸桿菌等數種微生物存在，這些微生物與宿主之間相互協調、相互制約、相互作用，從而維持陰道微生態的動態平衡[11-12]。健康女性陰道內以乳酸桿菌為優勢菌，該菌可將陰道鱗狀上皮細胞內的糖原分解為乳酸，使陰道維持在酸性環境，即pH＜4.5，可抑制機會致病菌繁殖[13]。機體內外因素改變（如不潔性生活、惡性腫瘤疾病等）容易影響陰道微生態的平衡，一旦陰道內微生物在種類、數量、比例上發生改變，就會導致陰道菌群失調。菌群失調可抑制作為優勢菌的乳酸桿菌生長或導致乳酸桿菌缺失，必然造成大量機會致病菌繁殖，致使女性生殖道感染。準確的陰道微生態檢測能為臨床診療提供依據，如何有效地進行陰道微生態檢測，是醫務工作者共同關注的問題。

陰道微生態檢測包括功能學檢測和形態學檢測，臨床上評價方法以形態學檢測為主[14]。形態學檢測是通過革蘭氏染色后顯微鏡鏡檢，檢查內容包括白細胞、膿細胞、病原菌、優勢菌、菌群密集度、菌群多樣性等，檢測結果是進行陰道微生態情況判斷的主要依據[15]。陰道內乳酸桿菌減少，優勢菌為加德納菌、動彎桿菌、擬桿菌等厭氧菌時，臨床上稱為BV；優勢菌為大腸埃希菌、鏈球菌、腸球菌等需氧菌時，臨床上稱為AV[16]。

陰道炎六項聯合檢測內容包括pH、β-葡萄糖醛酸苷酶、凝固酶、唾液酸苷酶、過氧化氫濃度、白細胞脂酶。其中pH反映陰道內環境的酸堿度，健康女性陰道內環境偏酸性；β-葡萄糖醛酸苷酶是一種酸性溶酶體酶，可水解內膜基底膜主要的成分蛋白多糖，對陰道內膜的損害起到提示作用[5]；唾液酸苷酶反映厭氧菌代謝產物的情況，輔助診斷細菌性陰道炎；過氧化氫可檢測乳酸桿菌的代謝產物；白細胞酯酶結果反映陰道黏膜炎癥的情況。

本研究應用陰道炎六項聯合檢測的檢測結果顯示，菌群正常1200例（40.54%），菌群抑制239例（8.07%），菌群失調1112例（37.57%），菌群過度增殖59例（1.99%），病原體被檢出350例（11.83%）。提示檢測人群中59.46%出現陰道微生態失衡，甚至有11.83%的人檢測出致病菌，如滴蟲、真菌等。因此，女性陰道微生態的檢測應做普查。

本研究結果顯示，革蘭氏染色涂片鏡檢和陰道炎六項聯合檢測法檢測BV結果的總符合率94.76%，其中陰道炎六項聯合檢測法符合率為98.91%，特異度為99.57%，敏感度為94.76%，兩種方法的陽性率比較，差異無統計學意義（P＞ 0.05）。提示陰道炎六項聯合檢測對診斷BV具有較高的可靠性。另外，該檢測方法操作簡便，符合臨床需求。

本研究結果顯示，革蘭氏染色涂片鏡檢和陰道炎六項聯合檢測法檢測AV結果的總符合率為95.9%，革蘭氏染色涂片鏡檢和陰道炎六項聯合檢測的AV陽性率分別為8.61%、7.60%，差異有統計學意義（P＜ 0.05），提示感染AV的人群比例相對較少，結果與王辰等[17]觀點一致，說明僅通過β-葡萄糖醛酸苷酶、凝固酶等代謝酶類診斷AV的方法尚存在一定缺陷。其缺陷原因可能為一種代謝產物可由不同的微生物產生，或者一種微生物可產生不同的代謝產物，也可能存在不同代謝產物之間的交叉反應，從而影響檢測結果的準確性。目前陰道炎六項聯合檢測單獨應用于AV感染的判定存在一定缺陷，更具特異性的代謝產物作為檢測指標有待開發。本研究存在病例數不足及缺少多中心聯合檢測的局限性。

綜上所述，以形態學檢測為主，結合功能學檢測作為評價女性陰道微生態環境的依據可能是更好的選擇。