高效液相色譜法分析15%甲氰菊酯·噻螨酮水乳劑的有效成分

王 進(jìn)，張青華，劉雪芬，潘光飛，廖文斌

(浙江禾本科技股份有限公司，浙江 溫州 325008)

甲氰菊酯是一種擬除蟲菊酯類殺蟲、殺螨劑，具有觸殺、胃毒和驅(qū)避作用，無內(nèi)吸、熏蒸作用，作用于昆蟲神經(jīng)系統(tǒng)，與鈉離子通道相互作用，破壞神經(jīng)元功能，用于防治多種螨蟲(銹螨除外)和害蟲；噻螨酮是一種新的噻唑烷酮類殺螨劑，對螨類具有良好的防效，具有觸殺和胃毒作用，有很好的穿透活性，具有殺卵、殺幼蟲、殺蛹活性，對果樹(包括柑橘、蔬菜、葡萄和棉花)的多種植食性螨的幼蟲和卵有效[1-2]。

甲氰菊酯和噻螨酮的復(fù)配制劑目前國內(nèi)比較少，這兩者的復(fù)配對柑橘全爪螨的田間藥效效果更佳[3]。甲氰菊酯和噻螨酮兩者的復(fù)配制劑產(chǎn)品的分析方法也有相關(guān)報道[4]。液相色譜法是一種比較快捷、穩(wěn)定性好、分離效果好的廣譜分析方法，C18填料色譜柱，通用廣譜。本文采用通用的反相液相色譜法，使用分析快速的 150 mm ODS反相柱和普通紫外檢測器，對試樣中甲氰菊酯和噻螨酮的含量進(jìn)行了同時快速地分析。該方法同時應(yīng)用于甲氰菊酯原藥、噻螨酮原藥，以及其單獨(dú)或復(fù)配相關(guān)制劑產(chǎn)品的分析，且簡便、快速、準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

Agilent1260 Infinity II 高效液相色譜儀(美國Agilent公司); DAD 檢測器(G7115A，美國Agilent公司); 色譜柱： VP-ODS不銹鋼柱 4.6 mm×150 mm×5 μm(日本島津)；分析天平：賽多利斯CPA225D型(德國Sartorius)，精度為 0.00001 g；超聲波清洗器(PMI-300TD，PRIMA technology Group)；有機(jī)微孔濾膜：孔徑 0.45 μm(MILEDT Technology Co.Ltd)。

甲醇(色譜純，樂清億邦儀器設(shè)備有限公司)、乙腈(色譜純，樂清億邦儀器設(shè)備有限公司)、新制超純水、甲氰菊酯標(biāo)樣(w=98.6%，白色固體，上海市農(nóng)藥研究所)、噻螨酮標(biāo)樣(w=98.2%，白色固體，上海市農(nóng)藥研究所有限公司)、15%甲氰菊酯·噻螨酮水乳劑(浙江禾本科技股份有限公司)。

1.2 色譜工作條件

流動相條件：等度洗脫V(甲醇)∶V(乙腈)∶V(水)=68∶10∶22；流動相流速：1.0 mL/min；柱溫：室溫(溫差不大于 2 ℃)；測定波長：235 nm；進(jìn)樣量：5 μL；保留時間：甲氰菊酯約 22.0 min，噻螨酮約 16.0 min。

上述為該制劑產(chǎn)品液相色譜操作條件的典型操作參數(shù)，不同實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)自身儀器特點(diǎn)，對上述參數(shù)作適當(dāng)調(diào)整。甲氰菊酯、噻螨酮的標(biāo)樣液相色譜圖見圖1，復(fù)配制劑試樣液相色譜圖見圖2。

1.噻螨酮；2.甲氰菊酯。圖1 甲氰菊酯·噻螨酮混合標(biāo)樣液相色譜圖

1.噻螨酮；2.甲氰菊酯。圖2 15%甲氰菊酯·噻螨酮水乳劑試樣液相色譜圖

1.3 測定步驟

1) 標(biāo)樣溶液的配制:準(zhǔn)確稱取 0.03 g 甲氰菊酯(精確至 0.00001 g)和 0.015 g(精確至 0.00001 g)噻螨酮標(biāo)樣于同一 50 mL 容量瓶中，加入約 40 mL 甲醇溶解，放入超聲波振蕩 3 min，然后用甲醇稀釋至刻度，定容，搖勻。

2)試樣溶液的配制:稱取15%甲氰菊酯·噻螨酮水乳劑試樣 0.30 g(精確至 0.00001 g)于 50 mL 容量瓶中，加入約 40 mL 甲醇溶解，放入超聲波振蕩 3 min，然后用甲醇稀釋至刻度，定容，搖勻，使用前用 0.45 μm 有機(jī)膜過濾。

3)測定：在上述操作條件下，待儀器穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣直至相鄰兩針峰面積相對變化小于1.2%，再按照標(biāo)樣、試樣、試樣、標(biāo)樣的順序進(jìn)行上機(jī)測定。

4)計(jì)算：測量結(jié)束后，將測得的兩針同一試樣溶液的峰面積以及試樣溶液前后兩針標(biāo)樣溶液中甲氰菊酯(或噻螨酮)峰面積分別進(jìn)行平均。試樣中甲氰菊酯(或噻螨酮)質(zhì)量分?jǐn)?shù)w(%)按式(1)計(jì)算：

式中：A1為標(biāo)樣溶液中甲氰菊酯(或噻螨酮)峰面積的平均值；A2為試樣溶液中甲氰菊酯(或噻螨酮)峰面積的平均值；m1為甲氰菊酯(或噻螨酮)標(biāo)樣質(zhì)量(g)；m2為試樣質(zhì)量(g)；w1為標(biāo)樣中甲氰菊酯(或噻螨酮)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(%)。

2 結(jié)果與分析

2.1 液相色譜條件的選擇

甲氰菊酯和噻螨酮的紫外光譜圖如圖3、圖4。

圖3 甲氰菊酯的紫外吸收

圖4 噻螨酮的紫外吸收

由圖3、圖4中可知，甲氰菊酯和噻螨酮在 235 nm 附近均有較強(qiáng)的吸收，在該波長附近避免了助劑的干擾，也避免了低波長下的溶劑峰干擾，能夠滿足分析的要求，故將檢測波長確定為 235 nm。

色譜柱選擇為常用的VP-ODS反相柱及C18柱。并且用 4.6 mm×150 mm×5 μm 柱，分離效果好，分析時間短，同時考慮到甲氰菊酯和噻螨酮物化性質(zhì)和溶劑的紫外吸收波長的干擾等問題。用甲醇作為溶劑，成本低，該波長干擾少，并以甲醇、乙腈和水作為流動相，將其按不同比例進(jìn)行測試試驗(yàn)。結(jié)果顯示，當(dāng)V(甲醇)∶V(乙腈)∶V(水)=68∶10∶22時，在流速 1.0 mL/min 條件下，與助劑能有良好的分離效果，并且峰型好，峰純度測試符合要求。

2.2 分析方法的線性關(guān)系測定試驗(yàn)

按照1.3的試樣溶液的制備方法，分別稱取6個不同質(zhì)量的甲氰菊酯和噻螨酮標(biāo)樣，配制成不同質(zhì)量濃度的甲氰菊酯和噻螨酮系列標(biāo)樣溶液。以甲氰菊酯(或噻螨酮)對應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后得到兩者的線性相關(guān)曲線。其中，甲氰菊酯的線性方程為y=5515977.8934x-50403.7770，相關(guān)系數(shù)r=0.9999，r>0.99；噻螨酮線性相關(guān)方程為y=9752577.1468x-13389.0777，相關(guān)系數(shù)r=0.9999，r>0.99，因此均在線性范圍內(nèi)。見圖5和圖6。

圖5 甲氰菊酯的線性關(guān)系圖

圖6 噻螨酮的線性關(guān)系圖

2.3 分析方法的精密度測定試驗(yàn)

按照1.2的色譜條件，對同一批次水乳劑試樣做6次重復(fù)測定試驗(yàn)，結(jié)果表明，甲氰菊酯測定結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.030%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為0.29%，重復(fù)性測定結(jié)果小于0.67×2(1-0.5×lgC)(1.88)(修訂后Horwits公式)；噻螨酮測定結(jié)果的的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.019%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為0.40%，重復(fù)性測定結(jié)果小于0.67×2(1-0.5×lgC)(2.12)(修訂后Horwits公式)；結(jié)果表明(表1)，同一批次產(chǎn)品的檢測結(jié)果重復(fù)性良好，能夠滿足日常檢測工作的需要。

表1 分析方法的精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.4 分析方法的準(zhǔn)確度測定試驗(yàn)

分別稱取5個水乳劑的制劑空白 0.25 g(精確至 0.00001 g)，置于 50 mL 容量瓶，然后分別加入 0.03 g(精確至 0.0001 g)的甲氰菊酯標(biāo)樣和 0.015 g(精確至 0.00001 g)的噻螨酮的標(biāo)樣，加入約 40 mL 甲醇溶解，放入超聲波振蕩 3 min，然后用甲醇稀釋至刻度，定容，搖勻，使用前用 0.45 μm 有機(jī)膜過濾。在上述色譜條件下進(jìn)行分析，分別測定甲氰菊酯和噻螨酮的質(zhì)量，根據(jù)添加標(biāo)樣量計(jì)算其回收率。結(jié)果顯示(表2)，甲氰菊酯的平均回收率為99.5%和噻螨酮的平均回收率為99.6%，均符合回收率標(biāo)準(zhǔn)范圍98%～102%。

表2 分析方法準(zhǔn)確度測定試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)論

本方法特異性好，線性關(guān)系良好，實(shí)驗(yàn)方法精密度較高，準(zhǔn)確度及回收率符合要求。采用本方法測定15%甲氰菊酯·噻螨酮水乳劑中有效成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)結(jié)果可靠，并且干擾少，準(zhǔn)確度高，便于生產(chǎn)中大批量試樣的測定，是一種可行的分析方法。