屏南縣放牧山羊綿羊肺炎支原體流行病學(xué)調(diào)查

摘要：綿羊肺炎支原體（M．ovipneumomae，M.O）感染山羊引起的羊支原體肺炎是福建省放牧山羊的主要疫病之一，給養(yǎng)羊業(yè)造成了巨大損失。為了摸清屏南縣放牧山羊中MO的感染情況，本調(diào)查采用抗體酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）檢測(cè)試劑盒檢測(cè)了全縣10個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)（戶(hù)）共287份血清樣品的M.O抗體水平。結(jié)果檢出M.O抗體陽(yáng)性95份，陽(yáng)性率33.1%，不同養(yǎng)殖場(chǎng)（戶(hù)）的陽(yáng)性率為7.7%- 60.0%。

關(guān)鍵詞：綿羊肺炎支原體：傳染性胸膜肺炎：酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定

山羊傳染性胸膜肺炎（Contagi ous capri ne pleruopneumo-nia，CCPP）是由山羊支原體山羊亞種（Mycop lasma caprj columsubsp．capri pneumoni a，Mccp）引起的山羊獨(dú)有的一種急性或慢性呼吸道傳染病，以纖維素性胸膜肺炎為主要特征[1]。國(guó)內(nèi)在分離到Mccp以前，長(zhǎng)期認(rèn)為絲狀支原體山羊亞種（M．mycoi des sub-sp．Capri，Mmc）才是該病的病原[2]，除此之外，綿羊肺炎支原體（M．OVi pneumoni ae，M．O）感染山羊后也能引起類(lèi)似山羊傳染性胸膜肺炎的臨床癥狀，經(jīng)常被誤認(rèn)為是CCPP的病原之一[3]。造成這種病原認(rèn)識(shí)不清情況的主要原因是由于支原體分離培養(yǎng)非常困難，且臨床上又常可能被其它呼吸道疾病干擾而最終不能確診[4]，各地病原分離試驗(yàn)也證實(shí)了各地引起該病的病原差異性和復(fù)雜性[5]。長(zhǎng)期以來(lái)，臨床上類(lèi)傳染性胸膜肺炎在福建省多個(gè)縣市均有發(fā)生，是制約養(yǎng)羊業(yè)健康發(fā)展的主要疫病之一，2017年江錦秀等[6]基于檢測(cè)臨床傳染性胸膜肺炎病例的病原技術(shù)較系統(tǒng)地開(kāi)展了該病的分子流行病學(xué)調(diào)查，首次明確福建省發(fā)生的羊傳染性胸膜肺炎主要是由M．0感染引起的羊支原體性肺炎，且普遍存在，而由Mccp引起的山羊傳染性胸膜肺炎病例很少或沒(méi)有。

由于引起山羊發(fā)生類(lèi)傳染性胸膜肺炎的病原較復(fù)雜，而明確病原是科學(xué)防治該病的主要依據(jù)，因此建立高效、準(zhǔn)確的病原診斷技術(shù)是研究該疫病的重要方向之一。目前M．0的檢測(cè)方法主要有3種：第一種是通過(guò)病原的分離進(jìn)行鑒定，但分離率較低，不適用臨床診斷[7]；第二種是基于病原基因組特征的分子生物學(xué)檢測(cè)方法，主要包括直接PCR方法[8]、降落PCR-側(cè)向?qū)游隹焖贆z測(cè)方法[9]、環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)（Loop-medi ated i sothermal

ampl if icati on，LAMP）方法[10]、TaqMan熒光定量[11]和SYBR Green熒光定量[12]等檢測(cè)方法。第三種是免疫學(xué)檢測(cè)方法，主要包括間接血凝方法[13]、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzyme I inked immunosorbent assay，ELISA）方法[14]、免疫組織化學(xué)及間接免疫熒光[15]等。在所有的檢測(cè)方法中，ELISA方法僅需要采集血液樣本，收集血清后直接利用商品化試劑盒即可實(shí)現(xiàn)一次96個(gè)樣品的檢測(cè)，更加適合基層的血清學(xué)調(diào)查，被廣泛應(yīng)用于一定區(qū)域內(nèi)的M．0的血清學(xué)流行病學(xué)調(diào)查[7]。 屏南縣位于福建省東北部，天然草場(chǎng)資源豐富，為放牧山羊提供了優(yōu)越的條件，山羊的規(guī)模養(yǎng)殖已經(jīng)初見(jiàn)成效，存欄量百頭以上的養(yǎng)殖場(chǎng)（戶(hù)）約占全縣年末存欄總數(shù)的80%[16]，而類(lèi)傳染性胸膜肺炎在養(yǎng)殖過(guò)程中經(jīng)常發(fā)生，是造成羊只損失的主要疫病之一。本研究擬采用間接ELI SA方法，在全縣范圍內(nèi)開(kāi)展M．0的血清學(xué)流行病學(xué)調(diào)查，為該病的防治提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

于2021年4月—9月間，在屏南縣縣域內(nèi)選擇10個(gè)存欄量50只以上的養(yǎng)殖場(chǎng)（戶(hù)）開(kāi)展M．0血清學(xué)流行病學(xué)調(diào)查。每個(gè)場(chǎng)按照實(shí)際存欄量和羊個(gè)體大小隨機(jī)采集18～45份血液樣，累計(jì)采集血液樣287頭份。每只羊采用一次性真空采血管（無(wú)抗凝劑）采集頸靜脈血5mL，置于4。C冰箱5～8h，待血清析出后每份吸取血清樣品500UL，一20℃冷凍備用。

1.2 血清M．0抗體檢測(cè)方法

M．0抗體ELISA檢測(cè)試劑盒購(gòu)自上海赫果生物有限公司。按照試劑盒說(shuō)明書(shū)和試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)樣品，利用全自動(dòng)酶標(biāo)儀（賽默飛世爾（上海）儀器有限公司）測(cè)定各標(biāo)樣在450nm波長(zhǎng)下吸光度（0D值），并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。按照試劑盒步驟分別測(cè)定各血清樣本0D值，每板設(shè)置6個(gè)陽(yáng)性對(duì)照孔和6個(gè)陰性對(duì)照孔。樣品0D值小于陰性對(duì)照平均值評(píng)定為M．0抗體陰性，樣品0D值大于或等于陰性對(duì)照平均值則評(píng)定為M．0抗體陽(yáng)性。

2 結(jié)果與分析

2.1 調(diào)查對(duì)象類(lèi)傳染性胸膜肺炎的感染與治療情況

通過(guò)對(duì)10個(gè)場(chǎng)（戶(hù)）業(yè)主的詢(xún)問(wèn)調(diào)查，60%的場(chǎng)（戶(hù)）有類(lèi)傳染性胸膜肺炎發(fā)生史（表1），各生長(zhǎng)階段的羊均可發(fā)病，且無(wú)明顯的季節(jié)性。發(fā)病羊群的臨床癥狀以咳嗽氣喘和漿液性鼻涕為主，部分個(gè)體采食量下降，被毛粗亂無(wú)光，出現(xiàn)漸進(jìn)性消瘦和衰竭。剖檢主要表現(xiàn)為肺部出現(xiàn)肉樣病變，部分病例肺臟與肋骨粘連，胸腔積液、肺腫大和上呼吸道黏膜出血等癥狀也有發(fā)現(xiàn)。畜主多采用氟苯尼考、青霉素和鏈霉素等抗生素藥物或者雙黃連、魚(yú)腥草等中成藥進(jìn)行3～10d的連續(xù)治療，但治療效果均不理想。

2.2 M．O抗體檢測(cè)結(jié)果

由于養(yǎng)殖場(chǎng)（戶(hù)）對(duì)類(lèi)傳染性胸膜肺炎的病原認(rèn)識(shí)不足和對(duì)市面相關(guān)疫苗信息缺乏了解，所有調(diào)查對(duì)象均未接種過(guò)M．0株疫苗，40%養(yǎng)殖場(chǎng)（戶(hù)）曾經(jīng)接種過(guò)山羊傳染性胸膜肺炎Mccp的滅活疫苗，對(duì)該病的保護(hù)效果參差不齊，且認(rèn)為疫苗免疫效果并不理想。不同養(yǎng)殖場(chǎng)（戶(hù)）M．0感染的血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1，被檢的10個(gè)規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)（戶(hù)）均存在不同程度的M．0感染。287份樣品中共檢出M．0抗體陽(yáng)性95份，陽(yáng)性率33.1%，不同養(yǎng)殖場(chǎng)（戶(hù)）的陽(yáng)性率為7.7%～60.0%，且存欄量越大，M．0抗體陽(yáng)性率也出現(xiàn)升高的趨勢(shì)。

3 討論

鑒于引起類(lèi)傳染性胸膜肺炎病原的復(fù)雜性，僅通過(guò)臨床癥狀和解剖病理觀察難以確認(rèn)病原，雖然3種常見(jiàn)病原的血清學(xué)特征存在明顯的交叉反應(yīng)，然而三者的抗原特性、藥敏性等方面均存在較大差別[11]。長(zhǎng)期以來(lái)，類(lèi)傳染性胸膜肺炎是屏南縣放牧山羊中的主要疫病之一，但對(duì)其病原仍然未知。自江錦秀等[7]2017年明確福建省發(fā)生的類(lèi)傳染性胸膜肺炎主要是由M．0感染引起的羊支原體性肺炎后，郭慧瑜等[17]發(fā)現(xiàn)福建省福清市的M．0抗體陽(yáng)性率高達(dá)88.3%，進(jìn)一步證實(shí)了M．0在福建省山羊中的感染率較高。本研究結(jié)果表明屏南縣不同山羊養(yǎng)殖場(chǎng)（戶(hù)）中也廣泛存在M．0感染，但感染率低于福建省其他地區(qū)，這可能是由于屏南縣山羊養(yǎng)殖群體規(guī)模較小，且以自繁自養(yǎng)為主，較少到外地引種，減少了疾病傳播的風(fēng)險(xiǎn)。同時(shí)，結(jié)合各場(chǎng)的歷史發(fā)病和疫苗接種情況，可以初步確認(rèn)屏南縣發(fā)生的類(lèi)傳染性胸膜肺炎為M．0感染的綿羊肺炎支原體，而是否存在其他病原的交叉感染還需要開(kāi)展基于多病原檢測(cè)的分子流行病學(xué)調(diào)查。

大量研究表明M．0仍然是目前我國(guó)山羊支原體性肺炎的重要病原之一，在國(guó)內(nèi)多雀份均存在一定比例的感染，但不同群體間的感染率存在較大差異[18]。吳錦艷等[19]研究表明內(nèi)蒙古自治區(qū)M．0抗體陽(yáng)性率高達(dá)76.8%，河北省為50%，吉林省為21. 99%。其他研究表明新疆伊犁地區(qū)部分牧場(chǎng)M．0抗體陽(yáng)性率為21%[20]，河南省清風(fēng)縣山羊M．0抗體陽(yáng)性率8. 68%[21]，青海省貴南縣貴德黑裘皮羊M．0抗體陽(yáng)性率26. 5%[22]，四川省攀枝花地區(qū)山羊M．0感染陽(yáng)性率46. 0%[23]，2016年和2017年廣西6個(gè)地區(qū)山羊M．0個(gè)體陽(yáng)性率分別為32.2%和49. 2%[24]。通過(guò)比較發(fā)現(xiàn)，屏南縣M．0感染率處于中等水平，應(yīng)該在全縣范圍內(nèi)加強(qiáng)該病的監(jiān)測(cè)，進(jìn)一步控制和減少M(fèi)．0的感染率。

M．0是一種接觸性傳染病，主要經(jīng)空氣傳播．非感染病原病株的免疫接種和藥物治療無(wú)法徹底清除感染羊群的病原體[7]。屏南縣M．O的控制應(yīng)該以預(yù)防為主，加大針對(duì)免疫造成該疫病病原的疫苗宣傳推廣力度，在全群內(nèi)免疫接種能有效防控M．0株的疫苗，加強(qiáng)對(duì)群體的檢疫，及時(shí)隔離淘汰發(fā)病羊只，定期消毒以保持羊舍衛(wèi)生，凈化羊場(chǎng)，為該病的防治提供保障。另外，在引種過(guò)程中也要加強(qiáng)防范，做好生物安全防護(hù)措施，對(duì)引進(jìn)的種羊全面開(kāi)展病原或抗體檢測(cè)，杜絕疫病由種羊帶入，種羊引進(jìn)后要進(jìn)行2周以上的隔離觀察，隔離觀察后期再次開(kāi)展病原或抗體檢測(cè)，確認(rèn)引入羊只健康后進(jìn)行疫苗接種。

參考文獻(xiàn)：

[1]

Hutcheon D Contagious pleuropneumonia in Angora goats[J]VeterinaryJoumal. 1881（13）：171-180

[2]王棟，張瑞亭，我國(guó)山羊傳染性胸膜肺炎病原的研究[J]中國(guó)獸醫(yī)科技，1988（9）：3-5

[3]鄧光明，趙煊，梁桂香，類(lèi)山羊傳染性胸膜肺炎診斷和防治的研究[J]中國(guó)獸醫(yī)科技，1991，21（6）：3-6

[4]

World OrgaIUzation for Animal Health. Contagious caprine Pleuropneumo-nia.ln：Manual of Diagnostic tests and Vaccines for Terrestrial Animals（mammals， birdsand bees） [Ml. Sth ed vol II .Paris： office Intemational DesEpizooties. 2004： 623-634

[5]農(nóng)業(yè)部畜牧獸醫(yī)司，中國(guó)動(dòng)物疫病志fM]科學(xué)出版社，1993

[6]江錦秀，林裕勝，游偉，等福建省羊支原體性肺炎分子流行病學(xué)研究[J]福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào).2017.32（1）：12-16

[7]江錦秀，林裕勝，張靖鵬，等綿羊肺炎支原體感染的診斷和防治技術(shù)研究進(jìn)展[J]福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2019，34（12）：1463-1470

[8]儲(chǔ)岳峰，趙萍，高鵬程，等從山羊中檢測(cè)山羊支原體山羊肺炎亞種[J]江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2009，25（6）：1442-1444

[9]杜鮮，喬軍，陳誠(chéng)，等綿羊肺炎支原體降落PCR-側(cè)向?qū)游隹焖贆z測(cè)方法的建立[J]中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2017，39（6）：466-470

[10]張潔，曹軍軍，祝明松，等綿羊肺炎支原體環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增聯(lián)合橫向流動(dòng)試紙條可視化檢測(cè)方法的建立[J]動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2019，40（3）：1-8

[11]林裕勝，江錦秀，張靖鵬，等綿羊肺炎支原體TaqMan熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立[J]中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2018，40（4）：316-320

[12]張雙翔，程振濤，周碧君，等．應(yīng)用熒光定量PCR篩選綿羊肺炎支原體最適生長(zhǎng)培養(yǎng)基[J]畜牧與獸醫(yī)2013.45（1）：9-14

[13]趙萍，逯忠新，儲(chǔ)岳峰，等綿羊肺炎支原體間接血凝診斷方法的建立[J]甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào).2008，43（1）：29-32

[14]候相山，王建昌，張永寧，等羊群綿羊肺炎支原體抗體間接ELISA檢測(cè)方法的建立[J]中國(guó)畜牧獸醫(yī)2006.33（6）：76-78

[15]黃海碧，鄭佳琪，王仁超，等綿羊肺炎支原體P71蛋白分段表達(dá)及其間接ELISA方法的建立[J]中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2015，37（8）：623-627

[16]陸李枝，屏南縣羊口瘡病的診斷和PCR流行病學(xué)調(diào)查[J]福建農(nóng)業(yè)科技，2020（1）：46-49

[17]郭慧瑜，林裕勝，毛坤明，等福清市福清山羊綿羊肺炎支原體血清學(xué)調(diào)查[J]福建畜牧獸醫(yī)，2019，41（6）：10-11

[18]楊發(fā)龍，王華，岳華，等山羊中綿羊肺炎支原體的分離及鑒定[J]中國(guó)畜牧獸醫(yī)2010，37（8）：177-180

[19]吳錦艷，尚佑軍，陳妍，等國(guó)內(nèi)部分地區(qū)羊支原體肺炎血清學(xué)調(diào)查及分析[J]中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2017，39（2）：156-158

[20]崔慶賢，張鵬博，喬彥杰，等新疆伊犁地區(qū)哈薩克羊與薩福克羊感染支原體肺炎血清學(xué)調(diào)查與分析[J]當(dāng)代畜牧，2022（1）：25-27

[21]馮業(yè)攀，河南省清豐縣綿羊肺炎支原體血清學(xué)調(diào)查與分析[J]中國(guó)草食動(dòng)物科學(xué).2020，40（3）：89-91

[22]張琳，貴南縣貴德黑裘皮羊傳染性胸膜肺炎的血清學(xué)診斷[J]青海畜牧獸醫(yī)雜志.2007（4）：17-18

[23]黃秀君，童俊青，萬(wàn)潔，等攀枝花山羊的綿羊肺炎支原體感染血清學(xué)調(diào)查[J]畜牧與獸醫(yī)，2015.47（8）：154

[24]韓林梅，吳翠蘭，李軍，等廣西牛羊主要呼吸道疫病的血清學(xué)調(diào)查[J]今日畜牧獸醫(yī)，2018，34（10）：17-19