一例肉雞安卡拉病的診斷與防治

摘要：雞的安卡拉病是由I群腺病毒引起的急性高度致死性傳染病，死亡迅速，流行面廣，給養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重影響?zhàn)B禽業(yè)的健康發(fā)展。本病例從流行情況、病理變化、實驗室檢測確診為肉雞安卡拉病，通過增強機體免疫力治療方案，最終治愈，降低了養(yǎng)殖戶的經(jīng)濟(jì)損失。

關(guān)鍵詞：肉雞；安卡拉；腺病毒；PCR診斷；防治

安卡拉病因1987年3月在巴基斯坦卡拉奇附近的安卡拉地區(qū)一個肉雞場發(fā)生暴發(fā)流行而得名[1-3]。安卡拉病也叫“雞心包積液綜合征、心包積液一肝炎癥”，是一種禽腺病毒血清4型感染引起的疾病，在肉雞上發(fā)病較多，而近兩年產(chǎn)蛋雞和青年蛋雞也時常感染并造成一定死亡，造成巨大經(jīng)濟(jì)損失，早發(fā)現(xiàn)早治療可降低經(jīng)濟(jì)損失[4-6]。

石家莊某縣一肉雞養(yǎng)殖戶送來病雞就診，經(jīng)過解剖、病理變化觀察及實驗室診斷，最終確診為肉雞安卡拉病。

1 主訴及基本情況

該養(yǎng)殖戶共飼養(yǎng)雙A+/羅絲308肉雞18，200只，36日齡，至就診時已發(fā)病5d，共死亡250余只，曾按大腸桿菌病使用抗生素治療未見效果，甚至死亡加重，遂求診。

2 臨床癥狀

病雞精神萎靡，臥地不起，羽毛蓬松，排白色或者綠色稀便。死亡雞只均體格較大、健碩，死亡快，在網(wǎng)上分布比較集中。

3 病理變化

剖檢可見死亡雞只肌肉豐滿，胸肌呈現(xiàn)白色棕紅色條紋狀，氣管白色無異常。腹腔內(nèi)肝臟腫大，充血，質(zhì)地變脆；肝顏色淺黃，表面有小米粒大至綠豆大的出血斑壞死灶（圖1）。心包內(nèi)有黃色積液或呈膠凍樣，心肌柔軟無力，心尖鈍圓（圖2、圖3）。肺臟瘀血嚴(yán)重，腺胃肌胃交界處有條紋狀出血。腎臟腫大瘀血有出血斑，花斑腎較輕（圖4）。泄殖腔黏膜出血發(fā)紅，內(nèi)有白色綠色稀糞。

4 實驗室診斷

無菌采集心包積液、肝臟、脾臟、腎臟，分別獨立包裝，送河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院進(jìn)行PCR檢測。該病例確診為腺病毒血清4型感染。

4.1 引物設(shè)計

根據(jù)GenBank登錄的FAdV-4 （GenBank：GU188428.1） Hexon基因核苷酸序列，設(shè)計用于擴(kuò)增FAdV-4的PCR引物。引物由生工生物工程（上海）有限公司合成，具體見表1。

4.2 病毒核酸提取

根據(jù)病毒核酸提取試劑盒說明書操作，簡述如下：加入20μLProteinase K于1.5mL離心管中；在離心管中加入200μL樣品，加入200μL BB5，渦旋混合15s，56。C孵育15min;加入250μL無水乙醇，渦旋混合15s，室溫放置5min；將溶液和沉淀一起加入離心柱中，12，OOOxg離心1min，棄掉流出液。加入500μL WB5，12，000×g離心1min，棄掉流出液，重復(fù)一次。室溫12，000×g離心1min，徹底去除殘留的乙醇，在室溫靜置數(shù)分鐘徹底晾干離心柱；將離心柱轉(zhuǎn)入1. 5mL離心管中，并向離心柱中央加20pL RNase-free Water，室溫靜置1min。室溫12，000×g離心1min，洗脫DNA，-20℃貯存?zhèn)溆谩?/p>

4.3 PCR擴(kuò)增

取提取的DNA，進(jìn)行PCR鑒定（圖5）。在25μL體系里，按照比例加入2×TaqPCR Mix，DNA模板，2條引物（10μL）和dd H20。94℃預(yù)變性3min；94℃預(yù)變性10s，56℃退火30s，72℃延伸57s，共30個循環(huán)；72℃延伸5min。同時設(shè)立以水為模板的陰性對照。PCR結(jié)束后，取5μL PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳。

5 治療措施

目前，沒有專門針對該病毒病的治療藥物和抗體。遂采用提高免疫力、保肝、通腎方案進(jìn)行治療，連用5d，死亡明顯減少，回訪基本痊愈。

治療方案為：黃芪多糖口服液Q，000只雞／瓶），清瘟解毒口服液（150kg水／瓶），兩者混合后按全天飲水量分兩次飲水；以VA、VE、vc為主要成分的預(yù)混料（500kg飼料／袋），以枯草芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌、酵母菌、益生元為主要成分的微生態(tài)制劑（1，000kg/袋），集中拌料；連用5d。

此治療方案作用與用途如下：①刺激免疫系統(tǒng)，增強基礎(chǔ)免疫；②修復(fù)受損黏膜、強化屏障作用與器官機能；③解毒排毒，養(yǎng)肺保肝護(hù)腎；④調(diào)節(jié)腸道機能；⑤強抗應(yīng)激。

6 預(yù)防措施

加強飼養(yǎng)管理，給予充足的全價平衡飼料是防控安卡拉病的關(guān)鍵，注意減少應(yīng)激，降低飼養(yǎng)密度，保持通風(fēng)，杜絕霉菌毒素的侵害，不使用影響肝臟、加重肝臟負(fù)擔(dān)的藥物。提高機體免疫力是預(yù)防本病的關(guān)鍵。

7 免疫程序

肉雞在7日齡接種0. 4mL雞新城疫、禽流感（H9亞型）、禽腺病毒病（1群4型）三聯(lián)滅活疫苗（La Sota株+YBF13株+YBAV-4株），可有效降低發(fā)病率。由于腺病毒疫苗免疫一次抗體產(chǎn)生低，效果較差，間隔21d或28d免疫兩次效果較好。但是考慮到疫苗對胴體的影響，不建議肉雞進(jìn)行第二次免疫接種腺病毒疫苗。

蛋雞在20日齡免疫接種0. 5mL雞新城疫、禽流感（H9亞型）、禽腺病毒病（1群4型）三聯(lián)滅活疫苗（La Sota株+YBFB株+YBAV-4株）一次，50～60日齡再免疫接種0.5mL -次，可有效預(yù)防安卡拉病的發(fā)生流行。

8 鑒別診斷

禽腺病毒引起的常見疾病有包涵體肝炎（I BH）、心包積液一肝炎綜合征（HHS，也稱為安卡拉病）、肌胃糜爛（AGE）。

患包涵體肝炎的雞只突然發(fā)病死亡，感染后3～5d是死亡高峰，以后逐漸減少，發(fā)病10～15d后基本痊愈；臨床癥狀表現(xiàn)為精神萎靡、炸毛呆立、生長受阻；典型病變在肝臟，腫大易碎，斑駁狀出血，同時肝臟發(fā)黃，無菌采取肝臟涂片染色鏡檢可見許多肝細(xì)胞中有大而圓的核內(nèi)包涵體；脾臟出現(xiàn)白色壞死點；胰腺壞死；腎臟腫脹呈灰白色且有出血點。

9 討論和小結(jié)

禽類感染腺病毒后，心包積液和肺水腫的形成涉及多方面的機制。

9.1 組織液生成有效濾過壓的增加是主要原因之一

腺病毒對肝臟組織的損傷導(dǎo)致肝細(xì)胞合成的血漿蛋白減少，尤其是血漿白蛋白水平降低，由此引起血漿膠體滲透壓下降。由以下公式可以看出：組織液生成的有效濾過壓=（毛細(xì)血管血壓+組織液膠體滲透壓）一（組織液靜水壓+血漿膠體滲透壓），血漿膠體滲透壓下降必然導(dǎo)致心臟、心包和肺臟毛細(xì)血管組織液的滲出增多，形成心包積液和肺臟水腫。

9.2 血管的通透性增大更有利于組織液生成，導(dǎo)致肺水腫和心包積液

肝臟是機體清除腸源性細(xì)菌和細(xì)菌內(nèi)毒素的主要器官，同時肝臟分泌的膽汁具有穩(wěn)定腸道菌群、腸道黏膜上皮結(jié)構(gòu)屏障的作用。肝臟功能的損傷和衰竭，一方面使得腸道黏膜屏障功能下降，腸源性細(xì)菌和毒素內(nèi)移風(fēng)險大大增加；同時肝臟對于細(xì)菌和細(xì)菌內(nèi)毒素的清除能力又下降，這就使得機體更容易出現(xiàn)菌血癥和毒血癥風(fēng)險。內(nèi)毒素進(jìn)入血液循環(huán)后除了誘發(fā)血管內(nèi)彌漫性的凝血現(xiàn)象，導(dǎo)致器官循環(huán)障礙和組織細(xì)胞物質(zhì)代謝障礙外，還可以誘發(fā)血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡脫落，使血管通透性增加。加之肺臟由于滲出液增多，肺臟氣液交換屏障增厚，氣體交換困難，肺循環(huán)血液血氧濃度下降，很容易誘發(fā)肺動脈高壓，故此進(jìn)一步加重心包積液的形成和肺水腫的出現(xiàn)[1，7]。

9.3 腺病毒感染導(dǎo)致腺胃出血、胰腺壞死，嚴(yán)重影響蛋白質(zhì)在胃和小腸的消化吸收，這也是導(dǎo)致肝臟血漿蛋白合成不足的重要原因

不能被消化吸收的蛋白質(zhì)，會在后端消化道被微生物發(fā)酵產(chǎn)生大量的氨類。氨類由腸道黏膜吸收后經(jīng)過腸靜脈匯集，經(jīng)門靜脈進(jìn)入肝臟，轉(zhuǎn)化為大量的尿酸鹽，沉積于雞的腎臟，致使腎臟腫脹花斑。甚至又容易引起腎小球供血障礙，誘發(fā)腎性高血壓，這也會促使組織液生成的增加。

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