三葉青不同部位顯微特征研究

李振斌，杜家會，沈 剛，鄧朝義

(1.黔西南民族職業技術學院，貴州 興義 562400；2.成都市中草藥研究所，四川 成都 610016；3.貴州黔西南喀斯特區域發展研究院，貴州 興義 562400)

三葉青為葡萄科崖爬藤屬植物三葉崖爬藤(TetrastigmahemsleyanumDiels et Gilg)的新鮮或干燥塊根，有清熱解毒、消腫止痛、化痰散結的功效，常用于小兒高熱驚風、百日咳、毒蛇咬傷等[1]；也可選用干燥全草，具有清熱解毒、消腫止痛、活血祛風等功效，用于流行性感冒、肝炎、泌尿系統結石、跌打損傷等[2]。

目前，三葉青(蛇附子)的本草考證[3-4]、生物學研究[5-7]、化學成分[8]、藥理作用[9-10]已有不少研究報道，但在顯微特征方面，僅見于對其塊根、須根進行的探究[11-12]，未見莖、葉的詳細報道。為準確應用三葉青，本研究從塊根、莖、葉進行顯微特征研究，以期為后期更深入的研究及制定質量標準提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 材料

本研究所用三葉青經貴州黔西南喀斯特區域發展研究院鄧朝義研究員鑒定為葡萄科崖爬藤屬植物三葉崖爬藤(TetrastigmahemsleyanumDiels et Gilg) 的全株。其樣品來源的詳細信息，見表1。

表1 樣品來源

1.2 儀器

DMEX20生物顯微鏡(帶有成像顯微系統)；HistoCore AUTOCUT全自動轉輪式切片機。

1.3 方法

1.3.1 石蠟切片顯微鑒別 取藥材塊根、中莖、葉制成適當規格，FAA液固定，沖洗，脫水，透明，浸蠟，包埋，切片，脫蠟，二重染色，封藏，貼標簽。顯微鏡下觀察，描述其植物組織特征[13]。

1.3.2 粉末顯微鑒別 取少量的藥材粉末于載玻片上，加2～3滴水合氯醛，在酒精燈上透化后，加稀甘油1～2滴，蓋上蓋玻片置于顯微鏡下觀察，描述其粉末顯微特征。

2 結果

2.1 橫切顯微鑒定

2.1.1 塊根橫切面 木栓層由 2～5列木栓細胞組成。皮層數列細胞，散有含草酸鈣針晶束的黏液細胞，部分薄壁細胞含棕色物；纖維束排列呈斷續環狀，位于維管束上方；韌皮部細胞較小，排列緊密；韌皮纖維呈條帶狀；形成層呈環狀；木質部導管稀少，徑向排列；導管周圍木纖維發達；射線多寬闊，散有含草酸鈣針晶束的黏液細胞；薄壁細胞含草酸鈣簇晶和淀粉粒。見圖1。

注：1.木栓層；2.皮層；3.纖維束；4.草酸鈣針晶束；5.韌皮部；6.韌皮纖維；7.木質部；8.射線；9.草酸鈣簇晶；10.導管；11.中央薄壁組織。

2.1.2 中莖橫切 表皮細胞一列，外被角質層。皮層由 6～8 列類圓形的薄壁細胞組成，有的含草酸鈣蔟晶，黏液細胞內含草酸鈣針晶束。中柱鞘纖維束環列，棱角處較大，壁厚。維管束環列，相對兩邊維管束較發達。木質部頂端木纖維束發達，一至多條帶狀排列，導管孔徑較大，徑向排列，周圍木纖維發達。髓部薄壁細胞類圓形，有的含草酸鈣簇晶。見圖 2、圖3。

注：1.表皮；2.皮層；3.纖維束；4.木質部；5.韌皮部；6.導管；7.髓部；8.中柱鞘纖維。

2.1.3 葉橫切面 表皮細胞一列，類圓形或扁方形，外被角質層。柵欄組織為1～2列細胞，緊密排列，海綿組織疏松，有空隙。主脈維管束外韌型，近環狀，周圍薄壁細胞含草酸鈣簇晶。見圖4。

注：1.表皮；2.柵欄組織；3.主脈維管束；4.草酸鈣簇晶；5.海綿組織。

2.2 三葉青粉末顯微

2.2.1 塊根粉末顯微 粉末淺紅棕色或淺棕色。淀粉粒類圓形、橢圓形、紡錘形等，直徑8～56 μm，多單粒，臍點點狀或裂縫狀，層紋不明顯。網紋細胞黃棕色，壁稍厚，具有類圓形網狀壁孔，直徑171～219 μm。草酸鈣簇晶單個散在，直徑12～60 μm。草酸鈣針晶較多，散在，長32～196 μm。見圖5。

注：1.淀粉粒；2.網紋細胞；3.草酸鈣針晶束；4.草酸鈣簇晶。

2.2.2 莖粉末顯微 淺黃褐色。表皮細胞方形，細胞壁較厚，胞腔常含黃棕色物，斷面觀外被較厚角質層。孔紋導管多破碎，直徑42～98 μm。草酸鈣簇晶較多，散在或排列成行直徑10～66 μm。草酸鈣針晶散在或成束存在于類方形黏液細胞內，長45～182 μm。纖維長，單個散在或成束，直徑6～18 μm壁木化，有紋孔。見圖6。

注：1.角質層；2.表皮細胞；3.孔紋導管；4.草酸鈣簇晶；5.草酸鈣針晶；6.纖維。

2.2.3 葉粉末顯微 綠色或黃綠色。草酸鈣簇晶散在，直徑22～58 μm。草酸鈣針晶散在或成束存在于紡錘形黏液細胞內，長65～195 μm。導管為螺紋導管，直徑15～35 μm。葉片下表皮細胞多角形，氣孔為平軸式或不定式。見圖7。

注：1.含草酸鈣針晶的黏液細胞；2.草酸鈣簇晶；3.螺紋導管；4.氣孔。

3 討論

通過對三葉青塊根、莖、葉橫切特征進行研究，發現塊根皮層結構明顯，纖維束較規律排列于維管束上方，呈斷續環狀；韌皮部韌皮纖維呈條帶狀，一至多條，或連續，或間斷；射線薄壁細胞常見草酸鈣簇晶；莖皮層中柱鞘纖維束環列，在5個棱角處較大，棱角間較小，壁厚；維管束排列成環狀，5邊中有兩邊相對，該兩邊維管束較發達。木質部頂端木纖維束一至多條帶狀排列，或呈“口”“日”等閉合形狀。此研究結果與《浙江省中藥材標準》《湖南省中藥材標準》記載的三葉青橫切特征相對比，發現《標準》中均未見描述，結合本研究目標物為黔地喀斯特地區采集樣品，地域特點較為突出，與湖南、浙江等地差異較大，推測該差異或因此產生，也體現了三葉青生物特性隨區域不同變化較大的特點。而《湖南省中藥材標準》三葉青莖橫切特征中“韌皮部外緣的兩徑向面有草酸鈣簇晶環列”又異于本研究，也佐證了地域性差異的影響。

本研究還對三葉青塊根、莖、葉粉末特征進行了對比，發現均含有草酸鈣簇晶，大小無明顯差異，莖中簇晶常成排；草酸針晶甚多，塊根、莖中晶體多散在，存在于類方形黏液細胞，而葉晶體存在于紡錘形黏液細胞中；塊根中淀粉粒較大，臍點及層紋不明顯，網紋細胞大型，黃色。其中，塊根粉末特征與已報道的特征差異不明顯[1，12]，而莖、葉粉末顯微特征，未見相關文獻報道。研究還發現，葉片中草酸晶體(簇晶、針晶)數量明顯多于莖葉中，而三葉青葉片口味較酸，或與該特點密切相關。

綜上，本研究較為詳細地闡明了三葉青不同部位的顯微特征，為其準確合理應用提供了參考，也為后續深入研究、制定地方標準及申報國家標準提供了有價值的理論依據。