試驗用山羊血型及臨床應用

王振芳，王 亞，馬建青，鄭麗紅，王 帥，張晶梅

(1.冀中能源邢臺礦業集團總醫院，河北 邢臺 054000；2.邢臺市第三醫院，河北 邢臺 054000)

近年來，臨床科研人員利用試驗山羊模擬骨外科高新術式越來越多。然而，在模擬試驗過程中，有的山羊出現失血，甚至個別山羊出現大出血現象，直接影響臨床新技術研究的成敗。此時及時準確給山羊進行血液補給尤為重要。若要給試驗山羊輸血，尋找試驗山羊的匹配血型是首要問題。有學者對試驗山羊的血型進行了初步探討[1-2]，為了不斷提高臨床醫療水平，實現精準醫療。了解掌握試驗用山羊的血型及其臨床意義很有必要。因此，筆者對試驗用山羊的紅細胞進行了ABO、Rh、MN三個血型系統的血型研究分析。現報告如下。

1 材料與方法

1.1 試驗動物 試驗用山羊為本院骨科研究所中心飼養及邢臺縣當地山羊，共計102只。母羊63只，公羊39只，山羊年齡為1～2歲，體重為24～46 kg，平均體重為35 kg。

1.2 主要試劑與儀器 抗-D、抗-C、抗-c、抗-E、抗-e?？?M、抗-N標準血清(批號：20183102、20183203、20185605)，購自上海血液生物醫療有限責任公司；A型血紅細胞、B型紅細胞、O型紅細胞(批號：20180607、20181025)；微柱凝膠血型卡(批號：20180610)、TD-3A型血型血清學離心機、FYQ免疫微柱孵育器，均購自長春博德生物技術有限責任公司。2005-2型血庫專用離心機(BaSo貝索)。

1.3 方法

1.3.1 血樣采集及處理 首先將山羊臥倒，使山羊頭抬起與身體成90°，采血者右手固定山羊頸部，在頸靜脈1/3處頸靜脈溝內消毒，直徑約4 cm×4 cm， 左手拇指按壓山羊頸靜脈使其充盈，右手持采血針沿頸靜脈縱向45°角刺入血管中。采集3 mL EDTA抗凝全血，3 400 r/min離心10 min，分離血漿待檢。

1.3.2 ABO血型檢測 選用微柱凝膠卡方法：將微柱凝膠卡的6支凝膠微管做好標記，撕開封口膜，將待檢山羊0.8%紅細胞懸液分別加入第1～3微管中，每管50 μL；再將被檢山羊血清分別加入第4～6 微管中，每管50 μL；然后將已知A型、B型及O型標準紅細胞(0.8%濃度)分別加入第4～6微管中，每管50 μL。即刻使用專業離心機3 400 r/min離心5 min，取出,肉眼觀察結果。

1.3.3 Rh血型、MN血型檢測 選用經典試管法：準備100 mm×13 mm試管若干支，做好標記。每管加1滴抗血清于試管底部，再加1滴3%～5%被檢山羊紅細胞懸液于試管底部，混勻。以轉速1 000 r/min離心1 min,或轉速3 400 r/min離心15 s。然后取出試管輕輕搖動，使試管內容物重新懸浮。借助顯微鏡觀察結果。

2 結果

2.1 山羊ABO血型 試驗山羊結果顯示，既無ABO血型系統的A抗原、也無ABO血型系統的B抗原，存在類似人類O型血型特征(見表1)。

表1 山羊ABO血型檢測結果Table 1 Results of ABO blood group examination in goats

2.2 山羊Rh(D、E、e、C、c)及MN血型 采用試管法對102只試驗山羊血型標本進行Rh血型系統的D、E、C、c、e抗原檢測，同時用同樣方法將試驗山羊血標本進行M、N血型抗原檢測。通過試驗發現，D抗原、C抗原、c抗原、e抗原、N抗原陽性數均為0，即陰性率為100%。結果顯示，102只試驗山羊中發現6只山羊紅細胞上含有E抗原，3只山羊紅細胞上含有M抗原(見表2)。

表2 山羊Rh(D、E、e、C、c)及MN血型結果Table 2 The results of RH (D,E,e,C,c) and MN blood group of goats

3 討論

目前尚無市售山羊的血型抗原抗體檢測專用試劑，筆者選用微柱凝膠卡氏法對試驗山羊ABO血型進行了檢測分析；采用經典的試管法對試驗山羊Rh及MN血型進行研究。微柱凝膠卡新技術近年來已在血型血清免疫學方面作為常規技術應用[3]，其原理是采用微試管凝膠凝集技術，將凝膠及抗人球蛋白血清抗體或其他抗體裝入微柱中離心，將發生凝集反應的紅細胞阻滯于凝膠之內，而未凝集的單個紅細胞則穿過凝膠間隙運動至管柱底，從而區分有無凝集反應。同傳統方法相比，該方法主要優點為血清學操作標準化[4]，重復性好，容易掌握，無需經驗，減少標記，降低了錯誤發生率。此外，該方法的結果易判斷[5]，凝集在上層為陽性，停留在下層為陰性。此方法結果穩定，可保存、可拍照、可存入計算機，并易復檢。此方法檢測試驗動物山羊ABO血型試驗標準、結果可靠。

試驗山羊的Rh及MN血型系統的血型采用經典的試管法檢測。傳統的經典試管法是血型血清學檢測的金標準，該方法準確且成本低，可用于疑難/特殊血型鑒定。尤其對一些弱血型抗原抗體更易發現。就人類的血型而言，ABO血型系統的抗原比Rh及MN血型系統血型抗原強得多。比如：ABO血型系統內的A型紅細胞表面上A抗原位點有80～100 萬個；B型紅細胞表面抗原位點有75萬個；而Rh血型系統內的“-D-”(屬于C、c、E、e缺失型)的D抗原位點有20萬個，正常的D抗原位點1～3萬個，弱D抗原位點只有700～4 000個。MN血型系統的抗-M、抗-N血型抗體為天然抗體，是一種冷抗體，在檢測血型時，室溫20 ℃左右可出現弱凝集，要注意觀察血型結果，這種冷抗體在4 ℃凝集較強。試驗動物山羊血液中的紅細胞抗原及血清中的血清抗體不像人類那么高，且紅細胞上的特異性抗原較少。故試驗人員在檢測試驗動物山羊血型之前，一定要根據試驗動物山羊的血清學特點，篩選出適合山羊血清學檢測的敏感方法。

由表1可知試驗山羊ABO血型均為類人O型，即試驗山羊的紅細胞加入單克隆抗-A、抗-B血清后均出現陰性反應，山羊的血清分別加入A、B、O三型標準紅細胞后，凝集強度為2+～4+。通過以上正反定型綜合分析，符合ABO血型系統的O型。因此，將試驗山羊ABO血型最終定為類人O型。但從試驗山羊ABO血型鑒定中的對照管中發現了新的問題，即試驗山羊血清與人類標準O型紅細胞反應時出現凝集現象。筆者推測，這一凝集現象的出現，可能是試驗山羊血清中存在著一種抗人類紅細胞的抗體，再者也可能是鑒定山羊血型所用的標準紅細胞是由人類紅細胞篩選制備。因人類的紅細胞和山羊的紅細胞在膜電位和凝集的最適溶液離子強度等方面存在差異，故兩者的紅細胞不完全匹配所致。因此有必要對試驗山羊的紅細胞膜上的抗原位點的多寡及血清中的特異性抗體進行研究，為試驗山羊的血型深入研究提供科學基礎。

本試驗通過經典試管法對102只試驗山羊進行了稀有血型調查。山羊稀有抗原檢測主要由：D、E、e、C、c、M、N七種稀有血型抗原。人類Rh血型抗原的強度僅次于ABO血型的A、B抗原。Rh血型陰性者有50%～75%，通過輸血治療或妊娠可使紅細胞上的D抗原免疫而產生抗-D。Rh血型抗原中，抗原的強度依次為D>E>C>c>e[6-7]，均顯示劑量效應，即在遺傳方式上，同質結合子比異質結合子強。MN血型系統在遺傳學、輸血學及親子鑒定等方面有其重要作用。掌握各地區山羊MN血型的分布及特征情況具有一定的臨床意義。據王振芳報道[8]，河北省邢臺地區漢族人MN血型分布為M型最多，平均為50.50%；其次為MN型，平均為26.91%；N型最少，平均為22.59%。試驗山羊的稀有血型尚無報道。此次試驗發現了6只E血型試驗山羊；3只M血型試驗山羊。由此筆者推測試驗山羊可能存在有類人類血型系統的血型，為今后掌握應用試驗山羊的其他血型系統的研究提供了思路。

本試驗采用不同方法，對試驗山羊血型進行了系統研究，既發現了ABO血型系統的O型山羊，又檢測到Rh血型系統的E抗原，還印證了MN血型系統的M抗原的存在。總之，了解掌握山羊的血型有其重要意義，特別有助于山羊在新術式試驗過程中提高試驗效果，延長山羊的生命；也有助于山羊創傷輸血救治；同時也促進了動物學、動物免疫學、動物遺傳學、動物輸血學等動物多學科的發展。