MMP2、IGF2BP2 及HMGA2在侵入性胎盤組織中的表達

葉芳兵 朱寶菊

鄭州大學第二附屬醫院婦產科，河南鄭州 450014

侵入性胎盤是子宮內膜不全或損傷導致子宮蛻膜缺陷，使胎盤絨毛異常侵入甚至穿透子宮肌層的病理現象[1]。侵入性胎盤的主要發病因素包括剖宮產史和前置胎盤。隨著剖宮產率的增加及子宮肌瘤剔除等宮腔操作手術的增加，全球范圍內侵入性胎盤疾病的發病率持續增加，從40 年前的1/30 000 增加為1/300[2-3]。侵入性胎盤是導致產后出血、休克、子宮切除甚至死亡等產科嚴重并發癥的重要原因[4]。而且侵入性胎盤起病隱匿，處理時被動且棘手，給產科醫生帶來了巨大挑戰。了解侵入性胎盤疾病的具體發生機制，從分子水平上尋求該病的標志物，以期盡早發現、診斷甚至治療該病有重大意義。

侵入性胎盤滋養細胞發生與腫瘤細胞侵襲類似的上皮間質轉化（epithelialmesenchymaltransition，EMT）過程[5]，推測侵入性胎盤疾病的具體發生機制可能與一系列具有EMT 特征性的因子調控相關。近年來國內外研究顯示，基質金屬蛋白酶2（matrix metallopeptidase 2，MMP2）、胰島素樣生長因子2 mRNA 結合蛋白2（insulin like growth factor 2 mRNA binding protein 2，IGF2BP2）及高遷移率族蛋白A2（high mobility group A2，HMGA2）不僅參與腫瘤細胞EMT 過程在其侵襲和轉移過程中發揮重要作用，而且參與滋養細胞浸潤遷移的調控。本研究通過檢測以上3 種因子在侵入性胎盤組織中的表達，初步探討其與侵入性胎盤疾病的發生關系，以便為該病的早期預測及診療提供新的醫學思路及臨床方法提供參考依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2021 年3 月至12 月于鄭州大學第二附屬醫院（以下簡稱“我院”）產科分娩并確診為侵入性胎盤疾病的孕婦23 例為侵入性胎盤組，同期正常妊娠孕婦29 名為對照組。納入標準：①符合侵入性胎盤診斷標準[1]；②受試者及其家屬知情同意。排除標準：①伴妊娠糖尿病、感染、免疫類疾病及妊娠高血壓等并發癥；②合并腫瘤、各器官功能障礙等。侵入性胎盤組分娩孕齡小于對照組，差異有統計學意義（P ＜0.05）；兩組年齡、孕次、宮腔操作次數（包括剖宮產、其他子宮手術、清宮術）比較，差異無統計學意義（P ＞0.05），見表1。本研究經我院醫學倫理委員會批準（2021322）。

表1 兩組一般資料比較[M（P25，P75）]

1.2 研究方法

兩組于胎盤娩出30 min 內避開出血壞死、鈣化區域，剪取粘連植入病灶中心區域或正常胎盤母體面靠近臍帶的中央組織2 塊，大小約1 cm×1 cm×1 cm，經無菌0.9%氯化鈉液漂洗后，所有組織均保存在液氮中。

1.3 觀察指標

1.3.1 Western blot 取適量待測樣本，將其放在滅菌后的缽體中研磨，取準備好的磷酸鹽緩沖液處理樣本，取適量的細胞裂解液與處理后的樣本混勻并破碎細胞；室溫下12 000 r/min 離心15 min（離心半徑為21 cm），取上清液。制備BCA 液進行蛋白濃度測定。應用SDS-PAGE 系統對獲得的總蛋白電泳，電泳結束后進行PVDF 轉膜。將PVDF 膜封閉1 h 加入一抗（1∶1 000 稀釋）和二抗（1∶1 000 稀釋），使用ECL 試劑盒處理后，放入化學發光成像系統成像并保存條帶圖像。

1.3.2 實時定量PCR 取適量待測樣本加入液氮研磨粉碎，加入1 ml Trizol 提取總RNA，并進行RNA 濃度和純度的檢測。使用invitrogen 的逆轉錄試劑盒superscript Ⅲ合成cDNA，取2 μl cDNA 作為模板進行實時熒光定量檢測。引物序列包括Actin 正向引物：5’-TCCTCCTGAGCGCAAGTACTCC-3’，反向引物：5’-CATACTCCTGCTTGCTGATCCAC-3’（22 bp）；MMP2 正向引物：5’-AGTTTCCATTCCGCTTCCAG-3’，反向引物：5’-CACCTTCTGAGTTCCCACCAA-3’（20 bp）；IGF2BP2正向引物：5’-GAAGCCTGTCACCATCCA-3’，反向引物：5’-GGTCTCATCTGCCTCTTTC-3’（18 bp）；HMGA2正向引物：5’-TAGGAAATGGGCTGGAGTGG-3’，反向引物：5’-GGTGGTGGGTGCCTGTAATC-3’（20 bp）。反應條件：預變性95℃5 min；95℃10 s，58℃20 s，72℃20 s，40 個循環。

1.4 統計學方法

采用SPSS 26.0 軟件進行數據分析。符合正態分布的計量資料用均數±標準差（）表示，比較采用t檢驗；不符合正態分布的采用中位數（M）和四分位數（P25，P75）表示，比較采用Mann-Whitney U 檢驗。計數資料用例數表示。以P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組IGF2BP2、HMGA2、MMP2 蛋白表達比較

侵入性胎盤組IGF2BP2、HMGA2、MMP2 高于對照組，差異有統計學意義（P ＜0.05）。見圖1。

圖1 兩組IGF2BP2、HMGA2、MMP2 蛋白表達比較

2.2 兩組IGF2BP2、HMGA2、MMP2 mRNA 比較

侵入性胎盤組IGF2BP2、HMGA2、MMP2 mRNA表達水平高于對照組，差異有統計學意義（P ＜0.05）。見圖2。

圖2 兩組IGF2BP2、HMGA2、MMP2 mRNA 比較

3 討論

3.1 MMP2 在侵入性胎盤組織中的表達及意義

MMP2 屬于MMPs 家族，是一種鋅依賴的人體內重要的蛋白水解酶，可以降解多種膠原蛋白，影響細胞的生長、增殖、遷移[6]。研究表明，MMP2 與腫瘤細胞增殖及侵襲轉移的作用機制密切相關[7]，MMP2 可由滋養細胞分泌，是酶解子宮內膜外基質和基底膜的關鍵調控因子，可促進滋養細胞入侵子宮內膜，是妊娠早期調控滋養細胞浸潤過程的關鍵酶[8]。Ding 等[9]研究發現，MMP2 低表達會導致滋養細胞浸潤能力下調，子宮螺旋動脈重鑄不足，與子癇前期的發生有關。本研究結果與Kocarslan 等[10]研究結果相符。推測胎盤組織中MMP2 表達升高，滋養細胞侵襲性增強，細胞外基質的降解增多，促進滋養細胞侵入肌層，可能導致侵入性胎盤的發生。

3.2 IGF2BP2 在侵入性胎盤組織中的表達及意義

IGF2BP2 屬于IGF2BP 結合蛋白家族，作為一種新發現的m6A 解讀器，具有直接結合靶基因的mRNA穩定靶基因和促進靶基因mRNA 蛋白翻譯的作用，參與多種生命活動，并促進相關疾病的發生發展[11]。IGF2BP2 可通過激活PI3K/Akt 信號通路，來增殖和抗凋亡癌細胞，促進腫瘤增殖[12]。研究表明，IGF2BP2在多種癌癥如膽囊癌[13]、神經膠質瘤[14]等腫瘤組織中高表達，通過促進EMT 變化，在腫瘤細胞的侵襲遷移調控中發揮關鍵作用。研究顯示，IGF2BP2 在卵母細胞和早期胚胎中高表達，與受精卵的著床、胚胎發育有關[15]。

Wu 等[16]研究發現，IGF2BP2 可以促進滋養層細胞的浸潤和遷移，其蛋白水平在重度子癇前期患者胎盤中顯著降低。本研究結果顯示，侵入性胎盤組織中IGF2BP2 表達顯著升高。由此推測，其可能增強了滋養細胞的浸潤能力。Yang 等[17]研究發現，IGF2BP2 在子癇前期患者胎盤組織中表達降低，滋養細胞浸潤能力減弱，胎盤淺著床。本研究與Yang 等[17]的研究結果相符。

3.3 HMGA2 在侵入性胎盤組織中的表達及意義

HMGA2 屬于HMGA 家族，是一種非組蛋白結構的轉錄因子，其通過“AT-hook”結構與富含AT 的序列多種基因結合，并改變他們的染色質結構，進而調控轉錄活性，參與細胞凋亡、細胞周期、EMT 及端粒修復等生物過程[18-19]。研究顯示，HMGA2 可在多種惡性腫瘤中高表達，通過促進EMT 變化來調控多種腫瘤細胞的侵襲和遷移，從而導致癌癥的發生和進展[20-21]。Wei 等[22]研究發現，HMGA2 在子宮內膜樣子宮內膜癌的早期促進EMT，是子宮內膜漿液性腺癌有用的生物標志物。HMGA2 在滋養層細胞的細胞核中表達，且在浸潤母體蛻膜將胎盤體與子宮壁結合的高侵襲性的絨毛外細胞細胞質中表達最強[23]。研究發現，HMGA2 基因在人類滋養細胞祖細胞向絨毛外細胞分化的過程中發揮關鍵作用[24-25]。Abi Habib 等[26]研究發現，HMGA2-PLAG1-IGF2 通路的遺傳破壞可導致胎兒生長受限。這些均提示HMGA2 可能參與滋養細胞浸潤過程的調控。Burchardt 等[27]研究發現，HMGA2 在妊娠早期滋養細胞中高表達，而其在流產患者絨毛和蛻膜中表達降低，表明HMGA2 表達水平降低，可導致滋養細胞浸潤性下降，血管重鑄不足，與自然流產、胚胎停育等病理妊娠的發生有關。本研究結果顯示，侵入性胎盤組織中HMGA2 表達水平顯著升高。由此可知，HMGA2 在胎盤組織中高表達，可能與提高滋養細胞的侵襲能力及侵入性胎盤的形成有關。

綜上所述，MMP2、IGF2BP2 及HMGA2 在侵入性胎盤組織中高表達，促進胎盤滋養細胞過度侵入子宮肌層，與侵入性胎盤的形成相關，可為侵入性胎盤的成因及臨床預測提供參考依據。