上皮性卵巢惡性腫瘤中PCNA、HER2、Vimentin及E-Cadherin表達與臨床病理特征的關系

陳海琛，李旭苗，劉立媛，曹茜，丁彩霞

1.西安高新醫院病理科，陜西 西安 710075；2.陜西省腫瘤醫院病理科，陜西 西安 710076

卵巢癌是發病率僅次于子宮頸癌和子宮體惡性腫瘤而病死率居于女性生殖道惡性腫瘤之首的女性生殖系統腫瘤，其中約80%的卵巢癌為上皮性卵巢惡性腫瘤[1-2]。目前早期上皮性卵巢惡性腫瘤患者可經單純手術治愈，但因該腫瘤病灶位于盆腔深部，早期缺乏特異性癥狀，尚未找到有效的早期篩查方法，大多數患者就診時已發展至中晚期，需接受腫瘤細胞減滅術聯合放化療等綜合治療方案，預后較差[3-4]。增殖細胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)是細胞核脫氧核糖核酸復制所必需的聚合酶的輔助蛋白，參與腫瘤細胞的增殖和侵襲[5]。人表皮生長因子受體-2(human epidermal growth factor receptor 2，HER2)介導細胞的增殖、分化和抗凋亡等生理過程，與多種惡性腫瘤的發生發展有關，是目前腫瘤免疫治療研究中的重要靶分子之一[6]。此外，現有臨床研究指出，上皮-間質轉化(epithelial mesenchymal transition，EMT)是腫瘤侵襲、轉移過程中的重要生理過程，而這一過程的生物學改變包括波形蛋白(Vimentin)表達上調和上皮鈣黏蛋白(E-Cadherin)下調[7-9]。基于PCNA、HER2、Vimentin及E-Cadherin在腫瘤發生、發展和轉移過程中的重要作用，本研究檢測上皮性卵巢惡性腫瘤中PCNA、HER2、Vimentin及E-Cadherin的表達情況，并分析四者與臨床病理特征的關系，以期為上皮性卵巢惡性腫瘤臨床診療提供參考依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2019年3月至2022年3月期間于西安高新醫院、陜西省腫瘤醫院接受手術治療的92例上皮性卵巢惡性腫瘤患者作為癌癥組，年齡36～72歲，平均(56.59±6.52)歲。納入標準：(1)符合上皮性卵巢惡性腫瘤診斷標準[10]，經術后病理確診；(2)首次確診并接受手術治療；(3)臨床資料完整。排除標準：(1)有惡性腫瘤病史或合并其他惡性腫瘤；(2)標本污染或不足以用于本研究。另選擇同期50例在西安高新醫院行卵巢良性囊腫剔除組織者作為對照組，年齡28～74歲，平均(52.88±5.79)歲。兩組患者的年齡比較差異無統計學意義(P＞0.05)，具有可比性。本研究經以上兩家醫院倫理委員會批準。

1.2 檢測方法采用免疫組織化學染色法檢測腫瘤組織中PCNA、HER2、Vimentin及E-Cadherin蛋白表達情況，鼠抗人PCNA單克隆抗體、兔抗人HER2單克隆抗體、兔抗人Vimentin單克隆抗體、鼠抗人E-cadherin單克隆抗體、免疫組化試劑盒均購自福州邁新公司、美國羅氏公司。所有患者均于術中取卵巢腫瘤樣本，以10%中性福爾馬林固定、石蠟包埋、3.0 μm連續切片，切片常規脫蠟至水；用羅氏Ventana Benchmark全自動免疫組織化學平臺染色；染色完成后用洗潔精稀釋水沖洗，無水乙醇脫水兩次，2 min/次，中性樹膠封片。

1.3 PCNA、HER2、Vimentin及E-Cadherin陽性表達判定標準采用半定量法判定，PCNA定位于細胞核，HER2、E-cadherin定位于細胞膜，Vimentin定位于細胞質，每張切片于400倍光學顯微鏡下隨機選擇5個視野，各視野記100個細胞，對染色強度和染色細胞百分比進行評估：無色、淺黃色、棕黃色、棕褐色對應計0分、1分、2分、3分，陽性細胞所占的百分比＜5%、5%～25%、26%～50%、51%～75%、＞75%對應計0分、1分、2分、3分、4分，以染色強度與陽性細胞占比分值乘積分數判定，0～3分陰性(-)，4～6分弱陽性(+)，7～9分為陽性(++)，10～12分強陽性(+++)，乘積＞3分即陽性表達。

1.4 統計學方法應用SPSS22.0統計學軟件對研究數據進行分析。計量資料符合正態分布，以均數±標準差(±s)表示，組間比較行t檢驗；計數資料比較行χ2檢驗，相關性分析采用四格表的關聯分析求Phi系數(φ)進行檢驗。以P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者卵巢腫瘤組織中PCNA、HER2、Vimentin及E-Cadherin蛋白陽性表達水平比較癌癥組患者組織中的PCNA、HER2、Vimentin蛋白陽性表達率明顯高于對照組，E-Cadherin蛋白陽性表達率明顯低于對照組，差異均有統計學意義(P＜0.05)，見表1。

表1 兩組患者卵巢腫瘤組織中PCNA、HER2、Vimentin及E-Cadherin蛋白陽性表達水平比較[例(%)]

2.2 不同臨床病理特征上皮性卵巢惡性腫瘤中PCNA、HER2和Vimentin陽性表達水平比較低級別、有淋巴結轉移腫瘤組織中PCNA陽性表達率均高于高級別、無淋巴結患者；FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、高級別、有淋巴結轉移患者腫瘤組織中HER2陽性表達率高于FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期、低級別、無淋巴結轉移患者；FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、低級別、有淋巴結轉移患者腫瘤組織中Vimentin陽性表達率均高于FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期、高級別、無淋巴結轉移患者，差異均具有統計學意義(P＜0.05)，見表2。

表2 不同臨床病理特征上皮性卵巢惡性腫瘤中PCNA、HER2、Vimentin及E-Cadherin陽性表達水平比較[例(%)]

2.3 不同臨床病理特征上皮性卵巢惡性腫瘤中E-Cadherin陽性表達水平比較FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、高級別、有淋巴結轉移患者腫瘤組織中E-Cadherin陽性表達率均低于FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期、低級別、無淋巴結轉移患者，差異均具有統計學意義(P＜0.05)，見表3。

表3 不同臨床病理特征上皮性卵巢惡性腫瘤中E-Cadherin陽性表達水平比較[例(%)]

2.4 上皮性卵巢惡性腫瘤中PCNA、HER2、Vimentin及E-Cadherin蛋白表達間的關系經Spearman秩相關分析結果顯示，上皮性卵巢惡性腫瘤中PCNA表達與HER2、Vimentin表達呈正相關(φ=0.409，0.455，P＜0.05)，與E-Cadherin表達呈負相關(φ=-0.903，P＜0.05)；HER2表達與Vimentin表達呈正相關(φ=0.597，P＜0.05)，與E-Cadherin表達呈負相關(φ=-0.393，P＜0.05)；Vimentin表 達 與E-Cadherin表 達 呈 負 相 關(φ=-0.596，P＜0.05)，見表4～表6。

表4 上皮性卵巢惡性腫瘤中PCNA與HER2、Vimentin、E-Cadherin蛋白表達的關系(例)

表5 上皮性卵巢惡性腫瘤中HER2與Vimentin、E-Cadherin蛋白表達的關系(例)

表6 上皮性卵巢惡性腫瘤中Vimentin與E-Cadherin蛋白表達的關系(例)

3 討論

上皮性卵巢惡性腫瘤起源于卵巢上皮，多發于絕經后女性群體中，具有發病率高、死亡率高、早期不易診斷、易轉移和易復發等特點[11]。目前臨床推薦檢測CA125和HE4水平為上皮性卵巢惡性腫瘤的臨床診斷、病情評估和預后評估提供參考信息，但臨床實際中仍有約一半的早期患者CA125值檢測結果并無異常[12]。現階段上皮性卵巢惡性腫瘤的分子機制尚未完全明晰，使得腫瘤診斷、病情評估級預后判斷更加困難，臨床仍需尋找新型有效的腫瘤標志物或治療靶點為該癌癥臨床診療提供有效的參考信息，從而提高患者生存質量[13]。

PCNA為DNA復制過程中DNA聚合酶D的輔助蛋白，可反映細胞的增殖程度，參與腫瘤細胞的增殖過程，因此，檢測其表達水平可用于判斷腫瘤細胞增殖活性；此外，PCNA過表達時增加細胞間的張力而使細胞間的黏附能力降低，有利于腫瘤細胞脫落形成轉移灶，導致腫瘤的轉移和復發，故其表達水平還可反映腫瘤轉移、復發信息[14]。HER2是表皮生長家族員之一，具有促進細胞增殖、抑制抑制凋亡、誘導血管和淋巴管新生、增強腫瘤浸潤轉移等多種作用，作為原癌基因參與多種腫瘤的發生、發展。目前已有研究指出，卵巢癌中HER2過表達情況與乳腺癌相似，或可將其作為卵巢癌的生物標志物，從而為臨床診療提供有效信息，但仍需更多研究驗證[15]。

侵襲轉移是卵巢癌患者死亡的主要原因，而腫瘤的侵襲轉移是多種基因多種分子生物學改變、多步驟完成的復雜過程，這一復雜過程以腫瘤細胞間黏附能力減低和遷移能力增強為始動因素，相關概念即EMT。EMT是腫瘤發生侵襲轉移的基礎，目前臨床研究已證實在上皮性腫瘤的發展、侵襲轉移中EMT會被激活，引起間質性標志物(Vimentin等)表達上調、細胞表面上皮性標志物(E-cadherin等)表達下調，從而破壞細胞間的連接，使細胞間黏附能力降低、運動能力增加[16]。Vimentin主要表達于間質起源的細胞中，在上皮源性的惡性腫瘤中也有表達，其作用是引起細胞遷。Vimentin引起的細胞遷移是惡性腫瘤侵襲轉移的基礎，故Vimentin表達水平被認為與胃腸道腫瘤、乳腺癌等多種類型腫瘤細胞的惡性程度有關[17]。E-Cadherin為鈣離子依賴性跨膜糖蛋白，參與極化上皮細胞間的黏附作用，強烈表達于黏附連接中，維持上皮細胞的完整性和極性，其表達下調或缺失影響腫瘤細胞發生EMT過程，可促進腫瘤細胞的侵襲轉移[18]。基于上述PCNA、HER2、Vimentin及E-Cadherin在腫瘤發生發展過程中的作用，以上四者或可作為上皮性卵巢惡性腫瘤的生物標志物為臨床診療提供有效參考信息。

本研究獲取上皮性卵巢惡性腫瘤患者和卵巢良性囊腫患者的腫瘤組織，檢測腫瘤組織中PCNA、HER2、Vimentin及E-Cadherin表達情況，結果顯示，相比于對照組，癌癥組PCNA、HER2、Vimentin蛋白陽性表達率更高，而E-Cadherin蛋白陽性表達率更低，說明在上皮性卵巢惡性腫瘤中PCNA、HER2、Vimentin過表達而E-Cadherin低表達。分析不同臨床病理特征上皮性卵巢惡性腫瘤中PCNA、HER2和Vimentin陽性表達情況發現，FIGO分期越高，HER2、Vimentin蛋白陽性表達率越高而E-Cadherin蛋白陽性表達率越低，組織分化程度程度越低，HER2、Vimentin蛋白陽性表達率越高而PCNA、E-Cadherin蛋白陽性表達率越低，有淋巴結轉移患者較無淋巴結轉移患者PCNA、HER2、Vimentin蛋白陽性表達率更高而E-Cadherin蛋白表達陽性率更低，說明上皮性卵巢惡性腫瘤中PCNA、HER2、Vimentin及E-Cadherin表達與組織分化程度、淋巴結轉移情況相關，HER2、Vimentin及E-Cadherin表達與FIGO分期相關，其中在高級別上皮性腫瘤中HER2蛋白陽性表達率較低級別上皮性腫瘤中更高，原因是分化程度低的腫瘤細胞處于快速增殖分化期，HER2基因擴增及其蛋白過表達加速腫瘤細胞生長[19]。此外，本研究中，上皮性卵巢惡性腫瘤中PCNA、HER2、Vimentin表達間均存在正相關關系，且三者均與E-Cadherin表達負相關，提示PCNA、HER2、Vimentin及E-Cadherin可能在上皮性卵巢惡性腫瘤的發生、發展過程中相互作用、相互影響。

綜上所述，在上皮性卵巢惡性腫瘤中，PCNA、HER2、Vimentin蛋白過表達而E-Cadherin低表達，且四者異常表達均與組織分化程度、淋巴結轉移密切相關，HER2、Vimentin及E-Cadherin表達與FIGO分期相關，參與腫瘤的發生、發展，檢測四者表達情況可為臨床診療提供一定診療信息，但四者參與調控上皮性卵巢惡性腫瘤的具體機制仍需深入研究。