高級別腦膠質瘤中GFAP、p53、Ki67的表達水平及臨床意義

程鈺，李永來，黃璐

安康市中心醫院病理科，陜西 安康 725000

腦膠質瘤又被稱為腦干腫瘤，在顱內腫瘤中占比37%～52%，通常是神經膠質瘤，其中，較為多見的是極性成膠質細胞瘤與星形細胞瘤[1]。腦膠質瘤中，惡性超過75%，惡性腦膠質瘤又稱高級別膠質瘤。依據相關文獻顯示，高級別腦膠質瘤好發于中年及青少年，且多數為男性[2]。血清指標檢測因為其重復性高、客觀、簡便等優點，在腫瘤疾病診治方面得到廣泛關注。膠質纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)屬于膠質腫瘤的一種標志蛋白，它能夠在細胞分裂、增殖及血-腦脊液屏障維護等方面發揮作用，往往被應用于明確顱內膠質腫瘤的來源[3]。p53蛋白是由于p53基因突變而產生的，屬于腫瘤促進生長因子之一，可以對p53基因的作用進行抑制，同時，p53基因出現突變，使細胞增殖失控，進而引發癌變[4]。然而相關文獻顯示，p53蛋白于膠質瘤內的陽性表達率約為50%，于低級別膠質瘤內陽性表達率更低[5]。Ki67屬于一種細胞增殖標志物，在細胞核中存在，且同細胞周期息息相關，廣泛應用于臨床。目前有文獻顯示，伴隨腦膠質瘤級別的增加，Ki67的表達也不斷增加[6]。本研究主要探討高級別腦膠質瘤中GFAP、p53、Ki67的表達水平及臨床意義，現將結果報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料回顧性分析2019年1月至2021年12月在安康市中心醫院診治的126例腦膠質瘤患者的臨床資料。納入標準：(1)通過影像學、病理學等診斷為腦膠質瘤；(2)同世界衛生組織(WHO)公布的公布的樞神經系統膠質瘤病理分級標準相符[7]；(3)臨床資料完整；(4)未接受放、化療等干預。排除標準：(1)心、腎、肺、肝功能障礙；(2)其他腦類疾病；(3)嚴重感染者。其中男性62例，女性64例；年齡34～76歲，平均(50.25±8.36)歲；腫瘤直徑1～8 cm，平均(5.96±0.52)cm。按照世界衛生組織(WHO)中腫瘤病理分級標準，分為高級別組(Ⅲ～Ⅳ級腦膠質瘤)70例與低級別組(Ⅰ～Ⅱ級腦膠質瘤)56例。

1.2 檢測方法將所有研究對象的腦組織用中性甲醛10%固定之后，用石蠟包埋，并切片4 μm，之后實施免疫組化染色，期間選擇上海億新生物科技有限公司生產的GFAP、p53、Ki67單克隆抗體(鼠抗人)、磷酸緩沖鹽溶液緩沖液、DAB顯色劑，嚴格依據試劑盒說明書操作。依據免疫組化染色評分判斷結果[8]：(1)陽性細胞計數，隨機挑選5個400倍視野，對陽性細胞數進行觀察，之中0～5%記0分，6%～25%記1分，26%～50%記2分，51%～75%記3分，超過75%記4分；(2)染色強度，對胞質顏色進行觀察，顏色為棕黃、淡黃、棕褐色記陽性細胞，其中無著色記0分、淡黃色記1分、棕黃色記2分、棕褐色3分。最終評分為陽性細胞計數評分同染色強度評分的乘積，陽性為≥2分，陰性為＜2分。

1.3 統計學方法應用SPSS20.0統計學軟件進行數據分析。計量資料以均數±標準差(±s)表示，比較采用t檢驗，計數資料比較采用χ2檢驗；采用Spearman相關性分析GFAP、p53、Ki67陽性表達率與病理分級的相關性。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者的GFAP、p53、Ki67陽性表達率比較高級別組患者的GFAP陽性表達率明顯低于低級別組，p53、Ki67陽性表達率明顯高于低級別組，差異均有統計學意義(P＜0.05)，見表1。

表1 兩組患者的GFAP、p53、Ki67陽性表達率比較[例(%)]

2.2 不同病理特征患者的GFAP、p53、Ki67陽性表達率比較不同性別、年齡、腫瘤原發位置及腫瘤大小患者的GFAP、p53、Ki67陽性表達率比較差異均無統計學意義(P＞0.05)，見表2。

表2 不同病理特征患者的GFAP、p53、Ki67陽性表達率比較[例(%)]

2.3 GFAP、p53、Ki67陽性表達率與病理分級的相關性經Spearman相關分析結果顯示，GFAP陽性表達率與病理分級呈負相關(r=-0.663，P=0.001)，p53、Ki67陽性表達率與病理分級呈正相關(r=0.732、0.441，P=0.001、0.001)。

2.4 典型病例患者女性，55歲，反復頭暈半年來院。頭顱CT提示：右側丘腦、基底節區及右側頂、枕、顳葉改變，考慮腫瘤性病變。建議MRI平掃+增強檢查。查顱腦磁共振平掃+增強+DWI+MRS：右側頂、枕、顳葉、右側海馬區、胼胝體壓部占位，考慮腫瘤性病變，高級別膠質瘤可能(枕葉病灶邊緣彌散稍受限)，腦疝形成。給予安排急診手術。病理大體肉眼所見：灰白灰紅腦樣碎組織一堆，總體積7.0 cm×5.0 cm×2.0 cm。病理回報：“顱內腫瘤”高級別膠質瘤，形態學結合免疫組化考慮膠質母細胞瘤(WHOⅣ級)，IDH-1陰性，見圖1～9(SP法)。

圖1 腫瘤HE切片(10×)

圖2 出現血管增生(10×)

圖3 壞死(10×)

圖4 腫瘤細胞密度增大(10×)

圖5 細胞核出現異型性(10×)

圖6 免疫組化GFAP：膜漿陽性(10×)

圖7 免疫組化Olig2：核陽性(10×)

圖8 免疫組化p53：核陽性(10×)

圖9 Ki67高表達，增殖指數高(10×)

3 討論

腦膠質瘤起病慢，病情逐漸加重，具有復雜性與多樣性，輕癥者呈現出頭痛、頭暈等癥狀，重癥者則可能產生發作性昏迷、紅核震顫等，且膠質瘤患者往往在就診時惡性程度就較高，所以及時診斷非常重要。相關文獻顯示，細胞周期調控同腫瘤進展息息相關，抑癌基因、癌基因喪失調控細胞周期的作用后，會較大幅度地提升細胞癌變概率[9]。近幾年，伴隨研究的逐漸深入，發現諸多基因于互相作用下能加快腫瘤的發展。

GFAP屬于損壞星形膠質細胞后產生的標志物之一，具有特異性，能夠判斷中樞神經系統出現的腫瘤細胞來源[10]。于缺血狀況下，成熟星形細胞被刺激后后就能產生GFAP，所以，GFAP能夠對腦細胞缺血狀況進行判斷，同時也能作為此類型腦膠質瘤的評價指標[11]。本次研究表明，高級別腦膠質瘤患者的GFAP陽性表達率明顯低于低級別腦膠質瘤患者，差異有統計學意義(P＜0.05)，說明惡性程度較高的腫瘤細胞使GFAP的分泌及釋放受到了抑制。相關文獻顯示，腦膠質瘤細胞中GFAP的表達同惡性程度為負相關關系，高惡性程度的腫瘤細胞切片后幾乎沒有GFAP表達[12]。這同本次研究相符。所以，GFAP能夠鑒別腦膠質瘤的級別。

人體中p53基因分為突變型、野生型兩種，p53野生型基因屬于抑癌基因之一，于調節細胞周期、細胞凋亡期間作用顯著[13]。外界諸多因素干擾下，DNA不能對損傷進行修復，p53野生型基因會在較短時間內使細胞出現凋亡，抑制潛在癌變細胞的發育與生長，進而體現它在人體內的抑癌價值[14]。然而，p53野生型基因于人體內會由于諸多原因導致突變，進而喪失抑癌功能，p53突變之后不能對癌細胞增殖進行抑制，進而產生腫瘤。此外，相關研究表明，p53蛋白產生于p53突變基因，同ras/cmyc癌基因等誘導細胞癌變，加快腫瘤發生的速度[15]。本次研究中，p53于高級別腦膠質瘤患者中的陽性表達率為82.86%，明顯高于低級別腦膠質瘤患者的39.29%，差異均有統計學意義(P＜0.05)，說明p53能夠鑒別腦膠質瘤的級別，同時經Spearman相關分析顯示，p53陽性表達率同病理分級為正相關關系。

Ki-67在增殖細胞內的核抗原中存在，它的免疫反應同細胞周期有一定相關性，是當前應用最廣泛的一種指標，同時在腫瘤細胞增殖活性檢測中也比較可靠[16]。Ki-67能夠反映腫瘤細胞生長的活躍程度，換句話說就是Ki-67水平越高，惡性程度越高，腫瘤細胞生長越活躍[17]。本研究顯示，p53于高級別腦膠質瘤患者中的陽性表達率為81.43%，明顯高于低級別腦膠質瘤患者的33.93%，說明Ki-67可以反映腦膠質瘤的惡性程度，同時經Spearman相關分析顯示，Ki-67陽性表達率同病理分級為正相關關系。這同黃卓彥等[18]的研究相符。

綜上所述，GFAP于高級別腦膠質瘤中的陽性表達率較低，且同病理分級呈負相關關系，p53、Ki67于高級別腦膠質瘤中的陽性表達率較高，同病理分級呈正相關關系。