重組雞α干擾素生物學活性測定用細胞的篩選

王 翠，謝彩華，趙雪麗，王淑娟，柴 茂，馬震原，楊海波，劉 影，王東方，閆若潛

(河南省動物疫病預防控制中心 河南省重大動物疫病監(jiān)測預警及防控重點實驗室，河南 鄭州 450008)

干擾素是一類動物機體產(chǎn)生的具有多重生物學功能的蛋白質。α干擾素屬于細胞水平上的廣譜的抗病毒、抗腫瘤細胞因子[1]，其主要通過抑制病毒增殖、增強抗腫瘤活性及加強NK細胞殺傷力從而發(fā)揮作用[2]，是一類具有臨床應用價值的抗病毒制劑。重組雞α干擾素(rChIFN-α)是雞α干擾素和白細胞介素兩種基因融合表達的蛋白，具有α干擾素和白細胞介素-2的雙重生物學活性，適宜劑量rChIFN-α在雞體內具有顯著的抗病毒活性和免疫增強活性，是有應用潛力的基因工程抗病毒制劑[3]。

目前我國尚無rChIFN-α生物學活性測定的國家標準，《中華人民共和國獸用生物制品質量標準》(2001版)《中國藥典》均采用細胞病變抑制法測定干擾素的生物學活性[4,5]。本試驗參照 “微量細胞病變抑制法”(簡稱CPE 抑制法)，采用雞胚成纖維細胞(CEF)/水皰性口炎病毒(VSV)、雞成纖維細胞系(DF-1)/水皰性口炎病毒(VSV)，測定三個批次rChIFN-α的生物學活性，比較CEF和DF-1兩種細胞在rChIFN-α生物活性測定上的優(yōu)劣。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要試劑

DMEM高糖培養(yǎng)基和D-Hanks緩沖液均為武漢博士德生物公司產(chǎn)品。胎牛血清為Sera Pro公司產(chǎn)品。胰蛋白酶-EDTA消化液和青鏈霉素混合液(100X)均為北京索萊寶科技有限公司產(chǎn)品。

1.1.2 主要儀器

二級生物安全柜為青島海爾生物產(chǎn)品。INCUBATOR371二氧化碳培養(yǎng)箱為美國Thermo公司產(chǎn)品。TE2000倒置熒光顯微鏡為日本尼康公司產(chǎn)品。……