胃癌患者組織中BDNF、miR-1468表達變化及其診斷價值分析

焦凌玉，黃立娜，李曉麗

商丘市第一人民醫院病理科(河南 商丘 476000)

胃癌是常見的消化道惡性腫瘤，是全球第2大致死癌癥，已成為威脅人類生命安全的惡性腫瘤之一。胃癌為非特異性癥狀，致使早期診斷率較低，影響患者的治愈率、生存率[1]。研究表明[2]腦源性神經營養因子(BDNF)參與了神經母細胞瘤、肝癌及肺癌等多種腫瘤的發生、發展、侵襲轉移，但關于其在胃癌組織中表達的研究較少。近年來微小RNA與腫瘤發病之間關系成為了研究熱點，越來越多的研究顯示[3]miRNAs參與了胃癌細胞的代謝、分化、增殖及凋亡，但微小核糖核酸1648(miR-1468)在胃癌組織中的表達情況仍不明確。本次研究對胃癌組織中BDNF、miR-1468的表達水平進行檢測，并分析其與臨床病理的關系。

1 資料與方法

1.1一般資料收集2019年9月-2021年9月商丘市第一人民醫院進行手術切除的胃癌組織80例，其中女性28例，男性52例，年齡25～79歲，平均年齡(61.56±3.78)歲；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期48例，Ⅲ～Ⅳ期32例；腫瘤浸潤深度：T1、T2期31例，T3+T4期49例；腫瘤大小：≥5 cm 24例，<5 cm 56例；淋巴結轉移：無淋巴結轉移33例，有淋巴結轉移47例；組織分化程度：高、中分化45例，低、未分化35例。

1.2方法

1.2.1 BDNF檢測 采用免疫組化染色法，將胃癌組織進行連續切片(5 μm)，先進行脫蠟水化，然后室溫下加入3%H2O2；將切片放入檸檬酸緩沖液中，微波加熱，使抗原修復，冷卻，將山羊血清加入其中，然后封閉30 min；加入1∶300的鼠抗人BDNF多克隆抗體，隔夜(過夜反應)，加入生物素標記的(1∶2 000)二抗，將緩沖液放置于保濕盒中，加入反應液，PBS3次振洗；加入DAB試劑，觀察顯色情況，控制顯色時間，采用蒸餾水沖洗，采用蘇木精襯染，蒸餾水沖洗完成后，脫水，最后采用中性樹膠封片。

1.2.2 miR-1468檢測 將胃癌組織置于研缽中，加入液氮，將組織研磨成細粉并置入離心管中，氯仿萃取，采用異丙醇進行沉淀，采用75%乙醇進行洗滌，再將其置入DEPC水中保存。采用Nanodrop 2000超微量分光光度計對RNA的純度和濃度進行測定。采用miRNA檢測試劑盒檢測miR-1468，以U6作為內參，miR-1468的表達水平采用2-ΔΔCt法表示。

1.3統計學處理采用SPSS 21.0統計學軟件，計數資料以%表示，組間比較采用χ2檢驗，以P<0.05表示有統計學差異。

2 結果

2.1胃癌患者組織中BDNF表達水平與其臨床病理的關系胃癌組織中BDNF的陽性表達與患者的性別、年齡、腫瘤大小、組織分化程度無關(P>0.05)，胃癌組織中BDNF的陽性表達與患者的TNM分期、腫瘤浸潤深度、淋巴結轉移有關(P<0.05)；其中TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期的陽性表達率高于TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期的患者(P<0.05)，腫瘤浸潤較深(T3+T4)的陽性表達率高于腫瘤浸潤較淺(T1+T2)的患者(P<0.05)，有淋巴結轉移的陽性表達率高于無淋巴結轉移的患者(P<0.05)，見表1。

表1 胃癌患者組織中BDNF表達水平與其臨床病理的關系[n(%)]

2.2胃癌患者組織中miR-1468表達水平與其臨床病理的關系胃癌組織中miR-1468表達水平與患者的年齡、性別、組織分化程度無關(P>0.05)，胃癌組織中miR-1468表達水平與患者的TNM分期、腫瘤浸潤深度、腫瘤大小、淋巴結轉移有關(P<0.05)；其中TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期的高表達率高于TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期的患者(P<0.05)，腫瘤浸潤較深(T3+T4)的高表達率高于腫瘤浸潤較淺(T1+T2)的患者(P<0.05)，腫瘤≥5 cm的高表達率高于腫瘤<5 cm的患者(P<0.05)，有淋巴結轉移的高表達率高于無淋巴結轉移的患者(P<0.05)，見表2。

表2 胃癌患者組織中miR-1468表達水平與其臨床病理的關系[n(%)]

3 討論

胃癌的發病機制尚不明確，研究認為[4]其發病與慢性疾病進展、飲食、遺傳、幽門螺旋桿菌感染等有關，飲食習慣中腌制食品含有的大量N-亞硝基化合物是引起人類癌癥最主要的化合物，是胃癌發病的高危因素；飲酒對胃的長期刺激導致胃黏膜細胞損傷并在繁殖的細菌作用下促進致癌物質亞硝胺類合成也是胃癌發病的危險因素；遺傳因素對胃癌發病的影響則可能與細胞色素P450酶系統與胃癌的易感性有關。胃癌早期臨床癥狀不明顯，導致患者未及時診斷疾病，致使錯過早期最佳治療時機，因此，盡早診斷對胃癌治療具有重要意義。

BDNF位于11號染色體的短臂上，是神經營養因子家族成員之一，可與高親和力受體酪氨酸激酶受體B或低親和力受體p75神經生長因子受體結合,可激活下游PI3K/PDK1/Akt/Ras/MAPK等信號通路,上調Ca2+通道發揮生物學效應，參與多種非神經系統、神經系統腫瘤的發生發展，并可以維持腫瘤細胞生存，影響腫瘤細胞增殖、侵襲轉移，還與腫瘤血管生成等惡性生物學行為有關[5-6]。miRNA是存在于真核生物中的非編碼RNA，長約22個核苷酸，其可調控靶基因的表達，參與腫瘤細胞的增殖、分化、遷移、侵襲及凋亡，對于惡性腫瘤的診斷、預后具有重要意義。研究表明[7]miR-1468與胰腺癌、肺癌、肝細胞癌等多種系統腫瘤密切相關[8]。miRNA可通過促進磷酸酶和張力蛋白同源物/磷脂酰肌醇3-激酶/絲氨酸蘇氨酸激酶信號傳導通路以及誘導上皮-間充質轉化等途徑促進胃癌的發生，在缺氧環境下則可能在缺氧誘導因子-1α的作用下調節miRNA含量，如miR-224的表達，從而下調RASSF8基因并促進胃癌細胞生長。胃液中的miRNA直接由腫瘤釋放而未經肝臟清除，其含量表達對于提示胃癌程度準確度也相對較高，在胃癌患者與良性患者之間miRNA的表達差異較為顯著。

竇維佳等[9]認為BDNF參與了胃癌的進展，其在胃癌晚期患者體內高度表達。本組結果顯示：胃癌組織中BDNF在患者TNM分期后期、腫瘤浸潤較深、有淋巴結轉移時的陽性表達率較高，說明BDNF表達與胃癌的疾病發展密切相關，可作為胃癌診斷的重要指標[10]。徐文靜[11]研究發現，BDNF在胃癌前病變時表現出過度表達，更易出現淋巴結轉移、血管侵犯、腹腔轉移等不良預后，提示患者可能生存率更低，對于胃癌患者的預后有一定提示意義。BDNF可激活Akt信號通路并促進化療藥物的安全使用，例如降低阿霉素引起的心臟毒性，從而發揮心臟保護作用以減輕胃癌治療過程中化療藥物帶來的損傷。郭東棟等[12]研究證實miR-1468在胃癌組織中高度表達會影響患者的預后。本組結果顯示：胃癌組織中miR-1468在患者TNM分期后期、腫瘤浸潤較深、腫瘤較大、有淋巴結轉移轉移時高度表達，說明miR-1468在胃癌晚期高度表達，其可能參與了胃癌的發展，檢測該指標可以反映患者的預后。

綜上所述，胃癌組織中BDNF的陽性表達與患者的TNM分期、腫瘤浸潤深度、淋巴結轉移有關，miR-1468高表達與患者的TNM分期、腫瘤浸潤深度、腫瘤大小、淋巴結轉移有關，對于胃癌的診斷具有較好價值。