lncRNA CCAT1在子宮內膜癌組織中的表達及其與病理參數的關系

姜秋慧 宋曉霞

鄭州人民醫院婦科，鄭州 450053

子宮內膜癌又稱子宮體癌，是女性生殖道常見的三大惡性腫瘤之一，好發于肥胖、高血壓、糖尿病、患有多囊卵巢綜合征、絕經后長期服用單一雌激素而無孕酮拮抗的婦女。早期通常無明顯癥狀，隨著病情的發展可表現為絕經后陰道出血、陰道排液等［1］。子宮內膜癌的發生是原癌基因活化和抑癌基因失活等因素相互作用的結果，但其發病機制尚不明確。因此深入研究子宮內膜癌的發病機制對其病情的早期診斷及預后有重要意義［2］。長鏈非編碼RNA結腸癌相關轉錄因子1（lncRNA CCAT1）是一種在結直腸癌中表達異常增高的lncRNA，其與結直腸癌的發展密切相關，由于其在多種惡性腫瘤的發生發展的過程中有重要作用，因此被認為是致癌基因［3］。本研究旨在探討lncRNA CCAT1在子宮內膜癌組織中的表達及與病理參數的關系，現報道如下。

資料與方法

1、一般資料

回顧性選取2021年1月至2022年1月鄭州人民醫院收治的105例子宮內膜癌行手術治療的患者為研究對象，收集患者術后切除的子宮內膜癌組織標本及相應癌旁距腫瘤邊緣約5 cm以上的組織標本。患者年齡30～73（55.37±3.46）歲，腫瘤長徑≤2 cm 52例、＞2 cm 53例。納入標準：（1）符合《子宮內膜癌篩查和早期診斷專家共識（草案）》［4］中的相關標準者；（2）癌旁組織經診斷標準證實未經腫瘤細胞入侵者；（3）術前未接受過放療、化療等抗腫瘤治療方案者等。排除標準：（1）合并其他腫瘤性疾病者；（2）中途退出者；（3）合并血液系統疾病者等。本研究經醫院醫學倫理委員會審批同意。

2、方法

所有子宮內膜癌組織在分離后30 min內注入液氮，存放于-80℃冰箱中備用。采用總RNA試劑（Redzol）對患者子宮內膜癌組織進行提取：（1）依據培養皿的面積估算Redzol和組織細胞的用量，每1 ml Redzol的組織用量為50～100 mg。（2）吸盡培養液，加入Redzol，用槍反復吹打數次，確保全部裂解，之后將其轉移至新的離心管中。（3）將新鮮組織剪成小塊，置入勻漿器內，加入Redzol后用勻漿器勻漿，再轉移至新的離心管中。（4）將勻漿液置于15～30℃中靜置5 min使其充分溶解，每1 ml Redzol中加入0.2 ml氯仿，震蕩混勻置于15～30℃中靜置2～3 min后進行離心（2～8℃，12 000 rpm，15 min，離心半徑8 cm）。（5）轉移上層水相至另一新離心管中，按0.5 ml異丙醇/1 ml Redzol的比例加入異丙醇，充分混勻后置于15～30℃中靜置10 min，再次進行離心（2～8℃，12 000 rpm，10 min，離心半徑8 cm），RNA形成的白色團狀沉淀在離心管的底部和側面。（6）按1 ml乙醇/1 ml Redzol加入乙醇，漂洗2～3次RNA沉淀，離心（2～8℃，7 500 rpm，5 min，離心半徑8 cm），棄去上清。（7）盡量棄去乙醇溶液，于超凈工作臺自然風干5～10 min，離心管蒸發完畢，白色RNA沉淀萎黃即可。（8）采用實時熒光定量聚合酶鏈反應（PCR）擴增儀（湖南圣洲生物科技有限公司，注冊證20212220277，規格：Cycler Z200），進行反轉錄，置于冰上冷卻或放入-20℃冰箱中待用。

3、觀察指標

采用PCR技術檢測并觀察lncRNA CCAT1在子宮內膜癌組織與癌旁組織中、不同病理分期、不同組織分級、不同分化程度、不同肌層浸潤程度、有無淋巴結轉移中的表達及其關系。

4、統計學方法

數據進行計算與分析的軟件為SPSS 21.0，P＜0.05提示其數據差異有統計學意義。采用配對t檢驗、方差分析、獨立樣本t檢驗分析以（）代表的符合正態分布的計量資料，使用Spearman相關性分析分析各指標間的相關性。

結 果

如表1所示，lncRNA CCAT1在子宮內膜癌組織、病理Ⅲ+Ⅳ期、肌層浸潤≥1/2、有淋巴結轉移中的表達水平高于癌旁組織、病理Ⅰ+Ⅱ期、肌層浸潤＜1/2、無淋巴結轉移，同時lncRNA CCAT1在G1級、G2級、G3級與高分化、中分化、低分化中的表達水平呈逐漸升高趨勢，差異均有統計學意義（均P＜0.05）。 經Spearman相 關 系 數 分 析 ，lncRNA CCAT1表達水平與病理分期、組織分級、肌層浸潤程度、淋巴結轉移呈正相關（r=0.458，0.425，0.472，0.436；均P＜0.05），lncRNA CCAT1表達水平與分化程度呈負相關（r=-0.423，P＜0.05）。

表1 lncRNA CCAT1在105例子宮內膜癌組織與癌旁組織中的表達及其與病理參數的關系（）

表1 lncRNA CCAT1在105例子宮內膜癌組織與癌旁組織中的表達及其與病理參數的關系（）

注：lncRNA CCAT1為長鏈非編碼RNA結腸癌相關轉錄因子1

類別組織子宮內膜癌組織癌旁組織不同病理分期Ⅰ+Ⅱ期Ⅲ+Ⅳ期不同組織分級G1級G2級G3級不同分化程度高分化中分化低分化不同肌層浸潤程度肌層浸潤≥1/2肌層浸潤＜1/2有無淋巴結轉移無有例數105 105 75 30 26 48 31 28 47 30 65 40 76 29 lncRNA CCAT1表達水平4.25±0.47 1.18±0.13 3.25±0.47 5.82±0.52 2.23±0.33 3.86±0.44 7.63±0.68 1.46±0.24 4.12±0.58 8.89±0.75 6.35±0.72 1.45±0.26 2.12±0.47 10.64±1.36 t/F值64.510 24.550 906.780 1 278.528 41.350 47.916 P值＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001

討 論

子宮內膜癌是發生在女性子宮內膜上皮組織的惡性腫瘤，發病率呈逐年上升趨勢［5］。Ⅰ型子宮內膜癌早期容易診斷，且預后情況較好；Ⅱ型子宮內膜癌多發于絕經后萎縮的子宮內膜組織，惡性程度較高［6］。研究證實子宮內膜癌的發展是由于細胞內部及表面遺傳的改變、癌基因的激活等引發的一種慢性持續的過程［7-8］。

lncRNA能夠影響細胞凋亡信號，在腫瘤侵襲和轉移的過程中均發揮著重要作用。lncRNA基因序列較長，功能比較復雜，并且其空間結構多樣，其不僅可以通過影響附近基因的表達引發染色體的重塑而調控基因，還可以與轉錄因子進行結合，激活輔助蛋白滅活靶基因［9-10］。Ⅲ+Ⅳ期子宮內膜癌患者病程已經發展至中晚期，病灶出現嚴重擴散，癌細胞已經廣泛轉移且呈現高表達。肌層浸潤主要指腫瘤細胞突破基底膜，進而發生的間質浸潤，其可以提高腫瘤細胞向遠處組織器官發生侵襲的可能性，此外，癌細胞的浸潤深度由內向外逐漸加深，惡性程度也會逐漸升高，此后患者治療和預后效果較差。惡性腫瘤可以通過淋巴結轉移至其他部位，造成淋巴腫瘤細胞在淋巴結滋養、繁殖，進而引起淋巴結癌性的腫大。惡性腫瘤的侵襲遷移受多種信號通路的調控，例如MAPK信號通路可參與細胞增殖、分化以及遷移、侵襲，在腫瘤細胞的生長發育及浸潤中發揮著重要作用。李林等［11］的研究結果顯示，CCAT1可以通過MAPK信號通路促進神經管細胞瘤的轉移，進而參與惡性腫瘤細胞的侵襲過程。lncRNA CCAT1最早被發現在結腸癌患者組織中呈現較高表達，此后發現其可與miRNA相互作用，參與靶細胞的表達，并形成相關基因調控網絡，可以參與腫瘤產生的多個過程，進而促進病情的發展［12］。本研究結果顯示lncRNA CCAT1在子宮內膜癌組織、病理Ⅲ+Ⅳ期、肌層浸潤≥1/2、有淋巴結轉移中的表達水平高于癌旁組織、病理Ⅰ+Ⅱ期、肌層浸潤＜1/2、無淋巴結轉移，同時lncRNACCAT1在G1級、G2級、G3級與高分化、中分化、低分化中的表達水平呈逐漸升高趨勢，經Spearman相關系數分析，lncRNA CCAT1表達水平與病理分期、組織分級、肌層浸潤程度、淋巴結轉移呈正相關關系，表明lncRNA CCAT1參與了子宮內膜癌細胞的侵襲、基層浸潤和轉移的過程，其在子宮內膜癌的發病過程中起重要作用。

綜上，lncRNA CCAT1在子宮內膜癌組織中呈現較高表達，與組織分級、分化程度、肌層浸潤程度、淋巴結轉移呈正相關，且其水平變化可為子宮內膜癌的臨床診療提供參考。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突