妊娠期糖尿病并發巨大兒產婦胎盤質量、胎盤組織超微結構及自噬相關信號通路變化

樊炳娟 王 丹 曲曉芹

河南省許昌市中心醫院(461000)

妊娠糖尿病(GDM)是一種糖代謝異常疾病，發生機制尚未完全明確，并發巨大兒發生率較高[1]。近年GDM臨床治療現狀得到明顯改善，但巨大兒控制效果仍有待提升[2-3]。自噬相關信號通路研究是GDM并發巨大兒發生發展的一個新探究方向[4-5]。胎盤是妊娠母體與胎兒物質和能量交換場所，胎盤組織超微結構改變是引起不良妊娠結局的主要原因[6-7]。關于GDM并發巨大兒胎盤組織超微結構及自噬相關信號通路改變之間關系尚處于探索中，未能完全明確。本文選擇GDM并發巨大兒患者作為研究對象，分析其胎盤組織超微結構與自噬相關信號通路的可能變化。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年10月-2021年2月本院診治的GDM并發巨大兒患者98例臨床資料(觀察組)。納入標準：①符合《婦產科》中關于巨大兒及GDM診斷標準；②胎盤完整；①單胎。排除標準：①合并其他代謝性疾病；②患惡性腫瘤；③產后大出血。同期產前檢查診斷為單純GDM患者98例為對照組，健康產婦98例為健康組。本研究經醫院倫理委員會批準，患者和家屬知情同意。

1.2 檢測方法

1.2.1胎盤組織超微結構觀察使用精密儀檢測3組胎盤質量和胎盤容積。在分娩2h內檢查產婦胎盤。獲得胎盤組織使用2.5%戊二醛先行短暫固定后切片，4%戊二醛、1%鋨酸雙固定，30%、50%、70%、80%、95%無水乙醇梯度脫水，環氧樹脂包埋，半薄切片定位，超薄切片后檸檬酸鉛、醋酸雙氧鈾雙染色。使用透視鏡觀察胎盤組織超微結構，參考健康組產婦胎盤微結構進行判斷是否出現改變。

1.2.2酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)信號通路使用實時熒光定量聚合酶鏈式反應檢測AMPKαRNA表達量。引物為5'-ACTGTACCAGGTCATCAGTACACC-3'；5'-CCACCATATGCCTGTGACAA-3'。剪刀剪取50～100mg組織置離心管內，生理鹽水沖洗，震動，反復沖洗3次直至透明，離心處理后卵育5min，使用核蛋白分解，再次離心處理，向沉淀RNA中加入1ml 75%乙醇溶液，輕輕混勻。高速冷凍離心5min，去上清，逆轉錄反應，行PCR擴增，Western blot測定AMPKαRNA表達。

1.3 評價指標

比較3組胎盤質量、胎盤容積、胎盤組織超微結構改變情況、AMPKαRNA表達量。分析胎盤組織超微結構改變與AMPKαRNA表達量關系。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 基本情況

觀察組年齡(36.2±3.1)歲(24～44歲)，孕周(39.0±0.5)周(32～41周)；對照組年齡(36.5±2.2)歲(23歲～43歲)，孕周(39.1±0.4)周(32～41周)；健康組年齡(36.4±2.2)歲(25歲～42歲)，孕周(39.2±0.4)周(32～41周)。3組年齡及孕周無差異(P>0.05)。

2.2 胎盤質量、胎盤容積

胎盤質量觀察組、對照組、健康組依次降低(均P <0.001)，胎盤容積3組無差異(P>0.05)，見表1。

表1 各組胎盤質量、胎盤容積比較

2.3 胎盤組織超微結構改變情況

胎盤組織超微結構改變率觀察組(66.3%，65/98)、對照組(29.6%，29/98)、健康組(2.1%，2/98)依次降低(χ2=92.710，P<0.001)。

2.4 AMPKαRNA表達量

AMPKαRNA表達量，觀察組(0.31±0.02)、對照組(0.41±0.08)、健康組(0.49±0.03)依次升高(P<0.05)；健康組胎盤組織超微結構改變者表達量(0.47±0.04)與未改變者(0.51±0.06)無差異，而對照組及觀察組胎盤組織超微結構改變者表達量(0.42±0.01、0.33±0.04)均低于未改變者(0.34±0.07、0.24±0.06)(均P<0.001)。

2.5 胎盤質量、胎盤組織超微結構改變對AMPKαRNA表達量的影響

分析發現，胎盤質量越大(r=-0.772，P<0.001)、胎盤組織超微結構改變越明顯(r=-0.560，P<0.001)均會影響AMPKαRNA的表達，呈負相關(P<0.05)。

3 討論

GDM主要表現為不同程度的葡萄糖耐量異常[8-9]。GDM并發巨大兒出現與胎盤組織糖及脂質代謝信號傳導通路異常關系密切[10-11]。胎盤為胎兒生長及發育提供所需營養物質。葡萄糖是胎兒代謝的主要能量之一，母體葡萄糖對胎兒生長發育起到至關重要作用[12-13]。通過擴散方式進入細胞膜內。當母體葡萄糖含量增加時胎兒也能吸收到更多的葡萄糖，從而增加巨大兒發生風險[14-16]。脂質代謝異常是影響胎兒發育的第二大因素。胎盤組織具有轉運脂肪酸的能力，脂肪酸過多進入胎兒血液循環中，增加了胎兒蛋白質和脂肪合成數量，引起巨大兒。胎盤絨毛表層分布合體滋養細胞，各細胞間排列較紊亂，細胞核無特定性狀，大小分布不均勻[17-18]。健康產婦的胎盤組織超微結構清晰、完整，絨毛干支無斷裂、破損等，滋養細胞發育良好，游離面形態規則；粗面內質網和線粒體分布較廣泛，細胞核性狀呈長方形[19]。隨著GDM發生發展，胎盤吸收了過多的脂肪和葡萄糖，使得胎盤組織超微結構主要表現在滋養細胞增加、絨毛干支排列混亂[20-21]。本文分析發現，胎盤質量越大、胎盤組織超微結構改變越明顯將影響AMPKαRNA表達量，呈負相關。目前關于自噬相關信號通路研究較多。有報道發現[22-23]，自噬相關信號通路參與糖尿病腎病發生發展。自噬主要通過溶酶途徑降解和循環利用細胞內蛋白質，去除受損的細胞器以維持細胞的穩定性和完整性。因此，分析自噬相關信號通路有利于判斷機體細胞完整性。本文顯示，AMPKαRNA表達量可以反映自噬相關信號通路情況，其表達量增加提示自噬相關信號通路較好，含量下降表示自噬相關信號通路受損。

對GDM并發巨大兒胎盤組織超微結構對自噬相關信號通路的差異性改變影響進行分析發現，觀察組患者的胎盤質量最大，高于對照組和健康組，且胎盤組織超微結構改變率顯著增加。胎盤對胎兒生長發育影響明顯，胎盤質量越大，表明胎盤對脂肪和葡萄糖吸收越多，胎兒能吸收到更多的脂肪和葡萄糖，增加巨大兒發生率。GDM并發巨大兒產婦胎盤組織超微結構也會隨之改變，主要表現為絨毛發育較多，絨毛分支排列紊亂，胎盤質量增加，與米陽等[24]研究結果一致。觀察組AMPKαRNA表達量在3組中最低，且胎盤組織超微結構改變的產婦AMPKαRNA表達量低于未改變產婦。分析認為：AMPKαRNA表達量下降說明自噬能力下降，相關信號通路未能及時清除受損細胞器，從而導致細胞內環境紊亂加劇，最終導致GDM并發巨大兒發生發展。

綜上所述，GDM并發巨大兒患者的胎盤組織超微結構發生改變且影響了自噬相關信號通路，臨床需密切關注患者胎盤質量及胎盤組織超微結構改變情況。