子宮內(nèi)膜異位癥不孕患者異位內(nèi)膜組織PAQR3、CAMS、HIF-1α表達(dá)及與生育指數(shù)關(guān)系

陳曉霞 權(quán)麗麗

河南省三門峽市中心醫(yī)院(472000)

子宮內(nèi)膜異位癥(EMs)發(fā)病率為10%～15%，患者多伴有不孕癥，不孕率達(dá)40%[1-2]。EMs是一種具有惡性生物學(xué)行為的良性婦科疾患，大量研究證實(shí)，新生血管的形成為EMs的發(fā)生、發(fā)展奠定了基礎(chǔ)關(guān)系密切[3]，多種惡性腫瘤及癌前病變組織中而現(xiàn)今缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)已被諸多學(xué)者證實(shí)其在多種惡性腫瘤及癌前病變中過(guò)度表達(dá)高表達(dá)，因此臨床普遍認(rèn)為HIF-1α是腫瘤血管生成環(huán)節(jié)中的形成過(guò)程中心啟動(dòng)分子子[4]。EMs的確切發(fā)病機(jī)制尚不清楚，但多數(shù)學(xué)者認(rèn)可子宮內(nèi)密種植學(xué)說(shuō)。黏附作用是EMs發(fā)生過(guò)程中的一個(gè)重要環(huán)節(jié)，是通過(guò)一系列位于細(xì)胞表面的細(xì)胞黏附分子(CAMS)來(lái)完成[5]。孕激素和脂聯(lián)素分子受體3(PAQR3)在多種腫瘤中可結(jié)合絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶B-Raf與C-Raf，從而抑制絲裂原細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(MEK)信號(hào)通路高爾基體上的膜蛋白，進(jìn)而調(diào)節(jié)腫瘤相關(guān)生物學(xué)行為[6]。本研究檢測(cè)EMs不孕患者PAQR3、CAMs、HIF-1α表達(dá)情況，并探究與EMs不孕的可能關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年4月-2020年4月就診于本院、術(shù)后經(jīng)病理檢查證實(shí)為EMs合并不孕患者42例，年齡(39.3±5.2)歲(28～50歲)，取其異位內(nèi)膜組織作為異位內(nèi)膜組，依據(jù)美國(guó)生殖醫(yī)學(xué)會(huì)(ASRM)分期分為Ⅰ期10例、Ⅱ期15例、Ⅲ期10例、Ⅳ期7例。選擇同期收治的EMs患者30例為在位內(nèi)膜組，行切開手術(shù)或刮宮或切開手術(shù)30例EMs患者收集手術(shù)時(shí)獲得在位內(nèi)膜作為在位內(nèi)膜組，年齡(41.3±4.7)歲(27～53歲)；20例另選擇同期因子宮肌瘤患者為正常內(nèi)膜組，行子宮切除術(shù)的20例正常子宮內(nèi)膜作為正常內(nèi)膜組，年齡(39.6±5.1)歲(28～49歲)。3組對(duì)象月經(jīng)周期規(guī)律穩(wěn)定，均處于月經(jīng)增生期，在術(shù)前3個(gè)月均未應(yīng)用激素治療，均不存在內(nèi)分泌性疾病以及內(nèi)外科相關(guān)疾病。本研究經(jīng)倫理委員會(huì)審批。患者簽署知情同意書。

1.2 PAQR3、CAMs與HIF-1α檢測(cè)

收集內(nèi)膜組織，部分經(jīng)液氮處理30 min后置-80℃保存待用，另一部分經(jīng)10%濃度甲醛固定，石蠟包埋，5 μm連續(xù)切片切片，常規(guī)HE染色；免疫組織化學(xué)染色分析。小鼠抗人單克隆抗體(Abcam公司)。①PAQR3陽(yáng)性：為細(xì)胞漿內(nèi)可見淺紫藍(lán)色顆粒，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≤10%、≤30%、≤70%和>70%分別記0、1、2、3分；陽(yáng)性著色強(qiáng)染色為細(xì)胞漿內(nèi)可見可觀察到淺紫藍(lán)色顆粒狀染色顆粒且顏色顏色與背景色對(duì)比明顯明顯高于背景底色、細(xì)胞漿內(nèi)見可觀察到較紫藍(lán)色顆粒狀染色顆粒、細(xì)胞漿內(nèi)可以觀察到有大量紫藍(lán)色顆粒狀染色情況時(shí)需要依次分別記記為1、2、3分；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)評(píng)分與陽(yáng)性細(xì)胞染色評(píng)分上述兩種記分相加為最終結(jié)果，≥3分為陽(yáng)性，否則為陰性。②CAMs陽(yáng)性：以腺上皮細(xì)胞胞漿或者胞膜中檢出CD44表達(dá)為標(biāo)準(zhǔn)，即依據(jù)上述位置出現(xiàn)顏色，無(wú)色、淡黃、黃色、深黃色分別賦0、1、2、3分；染色范圍<5%、5%～20%、20%～50%、>50%分別賦0、1、2、3分。兩記分相加，≥2分為陽(yáng)性，否則為陰性。③HIF-1α陽(yáng)性：著色弱但且染色與陰性對(duì)照組強(qiáng)明顯強(qiáng)于陰性對(duì)照者、染色著色情況清晰、染色著色程度強(qiáng)等依次分別記為1、2、3分；陽(yáng)性細(xì)胞與切片中總細(xì)胞數(shù) <10%、10%～50%，51%～80%，>80%分別賦0、1、2、3分。以上兩項(xiàng)評(píng)分相加，≥3分為陽(yáng)性，否則為陰性。

1.3 EMs生育指數(shù)(EFI)

利用EFI評(píng)估EMs合并不孕患者腹腔鏡手術(shù)分期后自然妊娠情況，評(píng)分越高妊娠概率越高。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 不同內(nèi)膜組織中 PAQR3、CD44、HIF-1α表達(dá)

異位內(nèi)膜組織中PAQR3、HIF-1α、CD44蛋白表達(dá)陽(yáng)性率均低于在位內(nèi)膜組織及正常內(nèi)膜組織(均P<0.05)，但不同分期患者異位內(nèi)膜組織各蛋白表達(dá)無(wú)差異(P>0.05)。見表1。

表1 各蛋白在不同內(nèi)膜組織中陽(yáng)性表達(dá)比較[例(%)]

2.2 PAQR3、CD44、HIF-1α表達(dá)與患者EFI評(píng)分

異位內(nèi)膜組患者，PAQR3表達(dá)陽(yáng)性者EFI評(píng)分(7.26±1.11分)均高于表達(dá)陰性者(4.03±0.82分)，CD44、HIF-1α表達(dá)陽(yáng)性者EFI評(píng)分(6.00±1.03分、5.55±0.76分)均低于表達(dá)陰性者(9.26±0.47分、8.82±0.64分)(t=10.676、6.922、9.164，均P=0.000)。

2.3 PAQR3、CD44以及HIF-1α表達(dá)情況與EMs不孕的相關(guān)性

PAQR3與EFI評(píng)分呈正相關(guān)(r=0.312，P<0.05)，CD44、HIF-1α均與EFI評(píng)分呈負(fù)相關(guān)(r=-0.354、-0.305，均P<0.05)。

3 討論

現(xiàn)今EMs公認(rèn)的病理機(jī)理主要有經(jīng)血逆流、淋巴及靜脈播散、免疫內(nèi)分泌、遺傳等學(xué)說(shuō)[7]。女性月經(jīng)周期中存在低氧狀況，子宮內(nèi)膜功能層的腺細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞中HIF-1α高表達(dá)導(dǎo)致細(xì)胞大量表達(dá)缺氧誘導(dǎo)細(xì)胞因子，進(jìn)而調(diào)節(jié)靶基因表達(dá)情況，使細(xì)胞對(duì)于缺氧耐受能力提高[8]。本研究結(jié)果顯示，相對(duì)于正常內(nèi)膜組，發(fā)現(xiàn)HIF-1α蛋白在異位內(nèi)膜組和及在位內(nèi)膜組組織中HIF-1α蛋白的表達(dá)陽(yáng)性率較高高于正常子宮內(nèi)膜組，提示HIF-1α在EMs不孕的發(fā)生發(fā)展中存在某種作用。EMs疾病涉及多種基因的變異與異常表達(dá)，目前認(rèn)為與子宮內(nèi)膜細(xì)胞異位種植有關(guān)的典型生物學(xué)因子為CAMS，CAMS為一類細(xì)胞膜表面糖蛋白，在組織間黏附中起介導(dǎo)作用，目前研究證實(shí)CAMS與腫瘤的侵襲、種植以及轉(zhuǎn)移有關(guān)[9]。EMs雖屬于良性疾病，但能通過(guò)細(xì)胞增殖作用、生成新生血管、造成局部侵犯和破壞[10]。作為CAMS一員的CD44，能夠與透明質(zhì)酸結(jié)合，維持組織或器官的結(jié)構(gòu)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)和介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞遷移[11]。本研究中CD44在異位內(nèi)膜組中的表達(dá)陽(yáng)性率高于正常內(nèi)膜組，表明CD44在異位內(nèi)膜有更強(qiáng)的黏附作用，增加了細(xì)胞游走性，加快細(xì)胞遷移，并能夠逃過(guò)腹腔中自然殺傷細(xì)胞的作用，繼而導(dǎo)致腹膜的侵襲并種植，參與EMs進(jìn)展。吳水梅等[12]研究證實(shí)，PAQR3在多種惡性腫瘤中具有明顯的抑癌作用。PAQR3主要通過(guò)將Raf-1激酶錨定在高爾基體上，阻斷其與上下游信號(hào)分子結(jié)合，繼而阻斷 Ras/Raf/MEK/ERK信號(hào)聯(lián)級(jí)通路，抑制使機(jī)體腫瘤細(xì)胞病灶中細(xì)胞增殖、以及遷移過(guò)程被抑制與轉(zhuǎn)化[13]；另外，PAQR3可發(fā)揮明顯抑癌作用，作用機(jī)制為PAQR3可誘使機(jī)體能夠抑制血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子自分泌信號(hào)通路激活被抑制，進(jìn)而負(fù)調(diào)控由抑制對(duì)應(yīng)信號(hào)通路血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子介導(dǎo)的參與血管生成，進(jìn)而抑制腫瘤細(xì)胞增殖血管內(nèi)皮細(xì)胞及血管生成，從而發(fā)揮抑癌作用[14]。

本研究中，PAQR3在異位內(nèi)膜組中的表達(dá)陽(yáng)性率均低于另外兩組，EMs發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)相對(duì)較高。另外，本研究還對(duì)PAQR3、CAMs以及HIF-1α與EMs不孕的關(guān)系進(jìn)行探討，以EFI評(píng)分作為不孕概率的評(píng)價(jià)指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)PAQR3、CD44、HIF-1α表達(dá)陽(yáng)性患者EFI評(píng)分均高于或低于表達(dá)陰性患者，且PAQR3、CD44、HIF-1α均與EFI評(píng)分相關(guān)，提示PAQR3表達(dá)陽(yáng)性率越高，EMs患者妊娠幾率越高，CD44以及HIF-1α表達(dá)陽(yáng)性率越高患者不孕的幾率越大，三者可共同反映EMs患者的不孕與妊娠的概率；另外，不同分期EMs合并不孕患者PAQR3、CD44、HIF-1α表達(dá)均未見差異，可能與本研究納入的樣本量較少有關(guān)，需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量再分析。

綜上所述，EMs合并不孕患者內(nèi)膜組織PAQR3、CAMs、HIF-1α均表達(dá)異常，提示3者可能促進(jìn)了EMs的發(fā)生，進(jìn)而導(dǎo)致患者不孕；EMs患者PAQRS表達(dá)陽(yáng)性率越高妊娠幾率越高，CD44、HIF-1α表達(dá)陽(yáng)性率越高患者不孕的幾率越大，三者可共同反映EMs患者的不孕與妊娠概率情況。