高效陰離子交換色譜-脈沖安培法檢測凍干b 型流感嗜血桿菌結合疫苗的游離多糖含量

賈松華，鄧海清，杜閃，張艷紅，尹珊珊，劉建凱

流感嗜血桿菌（haemophilus influenzae，Hi）為革蘭氏陰性桿菌，隸屬嗜血桿菌屬，威脅的主要人群為 5 歲以下兒童，是全球嚴重的公共衛生問題。在常規使用疫苗前，流感嗜血桿菌造成的所有侵入性疾病中 95% 是由 b 型流感嗜血桿菌（haemophilus influenzae type b，Hib）引起[1-3]。多聚磷酸核糖基核糖醇（polyribosylribitol phosphate，PRP）是 b 型流感嗜血桿菌莢膜多糖的主要組成部分，也是制備 Hib 疫苗有效的抗原成分[4]，結構見圖 1。本公司制備的 Hib 結合疫苗通過將純化的PRP 與破傷風類毒素（tetanus toxoid，TT）共價結合為結合態多糖，增加了 Hib 疫苗的免疫原性，將免疫應答類型由 T 細胞非依賴性轉換為具有免疫記憶的 T 細胞依賴性免疫應答，對于預防 Hib引起的腦膜炎及肺炎等疾病具有重要意義。在 Hib結合疫苗中，與載體蛋白結合的處于結合態的PRP，即為 Hib 結合態多糖；而未與載體蛋白結合的處于游離狀態的 PRP，即為 Hib 游離多糖。Guo 等[5]研究結果表明游離多糖含量高的 Hib 疫苗免疫小鼠的抗體水平差。多項研究表明，Hib 游離多糖含量是評價疫苗效價的重要質量控制指標，Hib 游離多糖含量過高會顯著影響疫苗的免疫原性[1,5-6]。

目前，《中華人民共和國藥典》2020 版（三部）（簡稱《中國藥典》）推薦使用乙醇分步沉淀法[7]測定 Hib 結合疫苗中的游離多糖含量。乙醇分步沉淀法作為測定游離多糖含量的經典方法，其穩定性、線性、準確度、精密度等均得到廣泛驗證，但該方法操作繁瑣，操作要求高，且試驗周期長，對于游離多糖含量低的樣品，可能因含量低于測定下限造成誤差[6]。……