不孕癥患者NK細胞、Th1/Th2水平變化及與自身免疫抗體的關(guān)系

武娟，束潁，許麗娜

（周口市中心醫(yī)院 檢驗科，河南 周口 466000）

不孕癥為常見生殖健康缺陷，其病因復(fù)雜，輸卵管疾病、免疫失調(diào)、排卵障礙等影響排卵、著床的因素均可能引發(fā)不孕癥；近年免疫因素所致不孕癥的發(fā)病率逐漸升高，病例占比約達20%，逐漸引起臨床關(guān)注［1］。研究表明，正常妊娠狀態(tài)Th1 型細胞因子受到抑制，以分泌Th2 型細胞因子為主，若Th1/Th2 紊亂，可能導(dǎo)致不孕［2］。自然殺傷（natural killer,NK）細胞亦為重要免疫細胞，可能與免疫性不孕癥相關(guān)；同時此類患者外周血自身免疫抗體異常［3］。因此分析不孕癥患者Th1/Th2 平衡性、NK 細胞水平及自身免疫抗體間可能存在一定聯(lián)系，但不孕癥患者自身免疫抗體與NK細胞、Th1/Th2 水平變化關(guān)系的相關(guān)研究較少。基于此，本研究選取周口市中心醫(yī)院132 例不孕癥患者，旨在探究NK 細胞、Th1/Th2 水平與抗精子抗體（AsAb）、抗子宮內(nèi)膜抗體（EMAb）、抗卵巢抗體（AoAb）等自身免疫抗體的相關(guān)性，為不孕癥診治提供新思路?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019 年5 月至2021 年12 月周口市中心醫(yī)院收治的132 例不孕癥患者為觀察組，另選取同期孕育功能正常的110 例健康體檢者為健康組。其中觀察組年齡28～39 歲，平均（33.57±2.63）歲；健康組年齡27～39 歲，平均（33.18±2.58）歲。兩組基線資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。本研究經(jīng)周口市中心醫(yī)院倫理委員會審批通過。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合世界衛(wèi)生組織（WHO）標(biāo)準(zhǔn)，未避孕正常性生活≥12 個月而未妊娠；②近3個月無性激素類藥物服用史；③伴侶性功能無異常；④患者及近親屬均了解本研究并簽訂知情同意書。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①存在炎癥性疾??；②器質(zhì)性病變所致不孕；③存在認知、精神障礙；④存在吸煙、酗酒史；⑤存在惡性腫瘤疾病。

1.3 方法

1.3.1 NK 細胞、Th1/Th2 水平檢測 入組后均采集100 μL 靜脈血樣，加入100 μL 培養(yǎng)液（RPMI-1640）稀釋，加入96 孔平板，采用莫能霉素、PMA、離子霉素工作液混合后，于CO2（5%）環(huán)境中培養(yǎng)5 h，棄上清液，加入10 μL CD4-FITC 單克隆抗體。靜置15 min（避光），磷酸緩沖液清洗，再次加入破膜劑，靜置15 min 后清洗。采用流式細胞儀測定NK 細胞、Th1/Th2 水平。

1.3.2 自身免疫抗體檢測 入組后抽取4 mL 空腹靜脈血，離心（3 500 r/min,10 min）取血清，采用酶聯(lián)免疫吸附測定血清中AsAb、抗人絨毛膜促性腺激素抗體（AhCGAb）、EMAb、AoAb 水平，抗體定性試劑盒購自伊利康生物公司。

1.3.3 性激素檢測 于月經(jīng)第3～5 天空腹采血，閉經(jīng)或月經(jīng)稀疏者以其以往規(guī)律月經(jīng)情況預(yù)測經(jīng)期進行采血，以電化學(xué)發(fā)光免疫法測定血清黃體生成素（LH）、睪酮（T）、雌二醇（E2）、促卵泡激素（FSH）、孕酮（P）水平。

1.4 觀察指標(biāo)

①比較兩組NK 細胞、Th1/Th2 水平；②比較兩組自身免疫抗體AsAb、AhCGAb、EMAb、AoAb陽性率；③比較兩組LH、FSH、E2、T、P 等性激素水平；④分析NK 細胞、Th1/Th2 水平與自身免疫抗體的相關(guān)性；⑤分析NK 細胞、Th1/Th2 水平與性激素水平的相關(guān)性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS b23.0 對數(shù)據(jù)進行分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，采用t檢驗；計數(shù)資料以百分率（%）表示，采用χ2檢驗。以Spearman 相關(guān)性分析NK 細胞、Th1/Th2 水平與自身免疫抗體、性激素水平的相關(guān)性。P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組NK 細胞、Th1/Th2 水平比較

觀察組NK 細胞、Th1/Th2 水平均高于健康組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

表1 兩組NK 細胞、Th1/Th2 水平比較（）

表1 兩組NK 細胞、Th1/Th2 水平比較（）

2.2 兩組自身免疫抗體陽性率比較

觀察組自身免疫抗體AsAb、AhCGAb、EMAb、AoAb 陽性率均較健康組高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

表2 兩組自身免疫抗體陽性率比較［n(%)］

2.3 兩組性激素水平比較

觀察組E2、P 水平較健康組低，LH 水平較健康組高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；兩組FSH、T 水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。見表3。

表3 兩組性激素水平比較（）

表3 兩組性激素水平比較（）

2.4 NK 細胞、Th1/Th2 水平與自身免疫抗體的相關(guān)性分析

NK 細胞、Th1/Th2 水平與自身免疫抗體AsAb、AhCGAb、EMAb、AoAb 呈正相關(guān)（P<0.05）。見表4。

表4 NK 細胞、Th1/Th2 水平與自身免疫抗體的相關(guān)性分析

2.5 NK 細胞、Th1/Th2 水平與性激素水平的相關(guān)性分析

NK 細胞、Th1/Th2 水平與E2、P 呈負相關(guān)，與LH 呈正相關(guān)（P<0.05）。見表5。

表5 NK 細胞、Th1/Th2 水平與性激素水平的相關(guān)性分析

3 討論

相關(guān)研究表明，正常妊娠過程中Th1/Th2 的平衡具有重要作用，其中Th1 型細胞因子可作用于妊娠組織，產(chǎn)生細胞免疫反應(yīng)，而Th2 型細胞因子則有利于妊娠過程中胎兒生長發(fā)育［4］。郭玲等［5］研究亦表明，Th1/Th2 細胞失衡影響胚胎種植。本研究中觀察組Th1/Th2 水平較健康組明顯升高，原因可能在于：若Th1/Th2 失衡，其比值向Th1 偏倚，Th1 介導(dǎo)的細胞毒效應(yīng)增強，進一步激活巨噬細胞，可能導(dǎo)致滋養(yǎng)層細胞發(fā)生免疫損傷，對胚胎著床、發(fā)育產(chǎn)生不良影響［6］。NK 細胞主要存在于子宮內(nèi)膜及外周血中，可通過自身免疫性反應(yīng)、超敏反應(yīng)，無需抗原致敏性就可參與免疫反應(yīng)過程，發(fā)揮自發(fā)性殺傷功能［7］。本研究中，觀察組NK 細胞水平異常升高，表明局部組織存在一定炎性反應(yīng)，影響下丘腦-垂體性腺軸功能，進一步干擾卵泡發(fā)育。正常免疫過程中，E2、LH 等性激素對性器官功能成熟有重要意義，同時具有細胞免疫調(diào)節(jié)功能，免疫反應(yīng)與性激素相互調(diào)節(jié)［8］。本研究中觀察組E2、P 水平較健康組低，LH 水平較健康組高（P<0.05），性激素水平失衡，且與NK 細胞、Th1/Th2 水平存在明顯相關(guān)性，提示不孕癥患者不僅性激素失調(diào)，而且存在免疫功能障礙，機體性激素水平紊亂可能是免疫功能異常的重要因素。

有研究表明，不孕癥與AsAb、AhCGAb 等相關(guān)，Th 細胞功能紊亂可介導(dǎo)B 細胞抗體異常釋放是影響卵巢功能的重要免疫因素［9］。本研究顯示，觀察組自身免疫抗體AsAb、AhCGAb、EMAb、AoAb 陽性率均較健康組高（P<0.05）；提示不孕癥病理改變過程中多種抗體發(fā)生陽性改變，故以上抗體對篩查、診斷不孕癥具有一定指導(dǎo)作用。原因可能為：AsAb 作為抗生育抗體，在干擾精子獲能、代謝及受精卵著床的同時，還對胚胎發(fā)育過程具有一定影響，甚者造成不孕、早期流產(chǎn)等不良妊娠結(jié)局［10］。AhCGAb 可作用于hCG，阻斷其正常功能，導(dǎo)致受精卵不能著床，可能導(dǎo)致胚胎停止發(fā)育、妊娠丟失，引發(fā)不良妊娠結(jié)局［11］。EMAb 的抗生育機制可介導(dǎo)子宮內(nèi)膜抗原抗體反應(yīng)，損傷其生理、生化代謝功能，影響受精卵著床、發(fā)育［12］。AoAb 主要產(chǎn)生于顆粒細胞、卵母細胞、黃體細胞等卵巢組織成分，于創(chuàng)傷、感染刺激等情況下產(chǎn)生，激活自身免疫反應(yīng)，干擾孕激素、孕酮的合成分泌，影響卵巢排卵、卵泡發(fā)育［13］。王琪等［14］研究顯示，多巢囊腫綜合征不孕患者NK 細胞、Th1/Th2 與P（r1=-0.774,r2=-0.451,P<0.05）、E2（r1=-0.552,r2=-0.558,P<0.05）呈負相關(guān)，與LH（r1=0.449,r2=0.621,P<0.05）、T（r1=0.481,r2=0.251,P<0.05）呈正相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，NK 細胞、Th1/Th2 水平與E2、P 呈負相關(guān)，與LH 呈正相關(guān)（P<0.05），與其研究結(jié)果相似；可見NK 細胞、Th1/Th2 水平與不孕癥血清性激素水平存在密切聯(lián)系。

綜上所述，不孕癥患者NK 細胞、Th1/Th2 水平與AsAb、AhCGAb、EMAb、AoAb、性激素水平存在明顯的正負相關(guān)性關(guān)系，檢測相應(yīng)細胞因子及自身免疫抗體對診斷不孕癥具有一定臨床意義。