灰樹花野生優勢菌株篩選初報

彭學文 陶 月 詹云達 解文強 吳志會

（唐山市農業科學研究院，河北唐山 063001）

灰樹花Grifola frondosa，又名舞茸，屬擔子菌亞門 Basidiomycotina、層菌綱 Hymenomycetes、多孔菌目 Polyporales、皺孔菌科 Meruliaceae、樹花菌屬Gri?fola，是一種珍稀食藥用菌[1?2]。灰樹花營養豐富，含18 種人體必需的氨基酸和多種有益礦物質，有醫療保健作用，是一種優良的食藥用菌[3?4]。當前灰樹花的市場需求量逐年上升，但唐山市遷西縣灰樹花栽培品種較單一，加上菌種退化等因素的影響，導致灰樹花產量下降。為此，筆者開展野生灰樹花菌株馴化研究，旨在篩選適合遷西縣氣候的優質、高產灰樹花菌株，并為灰樹花育種提供種質資源。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

（1）供試菌株：試驗對照菌株為遷西3 號，慶灰151。

供試野生菌株6 株，均為唐山市農業科學院食用菌研究所實驗室野外采集分離獲得。詳見表1。

表1 供試野生灰樹花菌株

（2）供試培養基：PDA 加富固體培養基為去皮馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，硫酸鎂1 g，磷酸二氫鉀1 g，瓊脂20 g，pH 自然；栽培料配方為栗木屑40%，棉籽殼42%，麩皮16%，紅糖1%，石膏1%，料水比為1∶0.8，pH自然。

圖1 部分野生灰樹花子實體生態照

1.2 試驗方法

1.2.1 供試灰樹花菌株拮抗試驗

將供試菌株兩兩組合，接種于PDA 平板培養基，25 ℃黑暗培養，觀察菌絲接觸區有無拮抗反應。3次重復。如果檢測菌株間無帶線出現，表示2個菌株間親緣關系較近，需要采用其他方法進一步鑒定。如果檢測菌株間出現拮抗（拮抗線或隆起或溝狀），表示兩菌株間親緣關系較遠。

1.2.2 供試灰樹花菌株在PDA平板上菌絲生長情況

圖2 部分灰樹花菌株拮抗情況

將對照菌株和野生菌株轉接到PDA 培養基上活化，于25 ℃恒溫暗培養15 d，用打孔器取直徑為5 mm 菌餅接種到新PDA 培養基中央，置25 ℃恒溫暗培養。培養11 d 后觀察菌落生長情況，并采用“十”字交叉法測量菌落直徑，每處理設4個重復。

試驗計算菌絲平均生長速度，觀察記錄菌絲長勢。

菌絲生長速度=（[菌落直徑?菌餅直徑）/2]÷11

1.2.3 供試灰樹花菌株出菇比較試驗

栽培袋（17 cm×36 cm×0.005 cm）裝濕料1 kg（折干0.55 kg），100 ℃滅菌12 h 后冷卻，中心軸接種顆粒菌種。發菌期管理同常規，出菇采用遷西縣當地常規模式地栽覆土出菇。每個菌株栽培3 畦，每畦36袋（菌棒）。

試驗記錄菌絲生長情況包括菌絲滿袋時間，接種到子實體形成時間，測定子實體性狀。

2 結果與分析

2.1 供試灰樹花菌株拮抗試驗結果

由表2可知，8個灰樹花菌株間兩兩組合均發生拮抗反應，說明供試8個灰樹花菌株親緣關系較遠。

表2 供試灰樹花菌株拮抗試驗結果

2.2 供試灰樹花菌株菌絲在PDA平板上生長情況

由表3可知，試驗灰樹花菌株菌絲顏色均潔白；從菌絲長勢、菌落形態來看，都均勻，慶灰151 菌株菌絲較稀疏，95 號、96 號、98 號、100 號、101 號菌株菌絲生長旺盛；從菌絲平均生長速度來看，96 號菌株生長速度較慢，且與 88 號、95 號、遷西 3 號、慶灰151菌株差異顯著，生長速度最快的是慶灰151菌株（4.74 mm/d），其次是遷西3號菌株、88號菌株。

表3 供試灰樹花菌株PDA平板培養菌絲生長情況

2.3 供試灰樹花菌株出菇試驗結果

由表4 可知，接種到菌絲滿袋時間最短的是遷西3 號菌株（22 d），其次是88 號菌株、98 號菌株，滿袋用時最長的是慶灰151 菌株、95 號菌株。接種到子實體形成時間最短的是遷西3 號、96 號菌株、98號菌株（均為48 d），100號菌株時間最長（為54 d）。

表4 供試灰樹花菌株子實體特性

子實體形態及顏色，所有菌株都是蓮花狀，但遷西3號菌株、慶灰151菌株、88號菌株、95號菌株、96 號菌株、100 號菌株色深；葉片大小，96 號菌株、100 號菌株葉片較大，但96 號菌株子實體屬于中等大小，子實體最大的為101 號菌株，其次是遷西3 號菌株。由表5 可知，產量最高是遷西3 號菌株，514.3 g/袋，其次是 101 號菌株，508.0 g/袋，但兩者沒有顯著差異。

表5 供試灰樹花菌株產量比較

3 小結

拮抗試驗表明，所采集野生灰樹花菌株與對照遷西3 號及慶灰151 均有拮抗，且野生灰樹花菌株之間也有拮抗，下一步將通過ISSR 和SRAP 進一步鑒定他們之間的親緣關系。供試灰樹花菌株出菇試驗結果，101 號菌株產量較高，但是顏色淺，96 號菌株生物轉化率為90.96%，較遷西3 號稍低，葉片較大，色深，適合鮮銷，具有一定的市場前景。

圖1 部分供試灰樹花菌株子實體