核酸檢測聯合ELISA檢測技術在獻血者血液篩查中的應用價值分析

李冰芳，姚映卿

（莆田市中心血站，福建 莆田 351100）

輸血性傳染病的主要傳播載體即為血液及血液制品，檢測血液中病毒標記物，可預防輸血傳播疾病［1］。臨床通過檢測病毒的抗原、抗體進行血液篩查，以降低血液傳染性疾病的傳播，但仍無法避免，輸血傳播疾病頻頻發生，可見單純的檢測抗原、抗體無法完全保證血液安全。相關研究［2］表明，血液中病毒進入人體后，到可檢測到病毒抗原、抗體前需要一段時間，此時間被稱為感染的“窗口期”。 “窗口期”血液及血液制品病毒感染經酶聯免疫吸附法（ELISA）檢測無法檢出，檢測結果為陰性，但實際上血液中已存在病毒，隨著病毒不斷復制而出現改變。若能縮短病毒檢測的“窗口期”，可利于提高病毒檢出，預防疾病傳播。核酸檢測（NAT）是篩查血液的重要方法，具有敏感度高、特異度高等優勢，可縮短“窗口期”，降低疾病傳播風險［3］。鑒于此，本研究探討NAT聯合ELISA檢測技術在獻血者血液篩查中的應用價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 標本來源選擇2021年1月至2021年10月在本地區采集的19845份無償獻血標本，均經至少一種酶免試劑檢測為陰性，各個獻血者留取2管標本，每管5 mL，分別進行ELISA、NAT檢測。所有標本均進行離心操作，4 h內完成所有步驟，置入2℃～8℃的冰箱保存待測，若當天不能完成檢測，需將標本轉移至-20℃的冰箱凍存。

1.2 儀器與試劑使用諾華診斷公司生產的Procleix Panther system全自動核酸檢測分析系統、上海浩源生物科技有限公司生產的全自動核酸純化儀（ChiTaS BSS1200）和ABI7500基因擴增儀，所有試劑均為產品配套試劑，嚴格按照說明書操作。

1.3 方法對所有標本均使用兩種不同的ELISA試劑進行檢測，對至少有一種試劑結果為陰性的標本進行NAT檢測，分別使用浩源檢測系統或諾華檢測系統進行同時檢測。①浩源系統NAT檢測：檢測模式選擇8人份標本混合檢測，每份標本以200 μL血漿作為取樣量，由自動提取儀進行提取，并使用擴增儀系統進行分析，每組檢測均需設置陰陽性對照，均含室內質控。檢測結果判斷標準：檢測完成是指標本判定為NAT非反應性；若出現反應性，再進行拆分檢測，檢測有反應性的標本即可判定為不合格。②諾華系統NAT檢測：檢測模式選擇單人份標本聯檢，向一級反應池提取500 μL血漿，使用全自動核酸檢測分析儀進行檢測，結果由服務器自動判讀。所有檢測需設置陰陽性校準物，均含室內質控。若標本判定為NAT非反應性則提示檢測完成；而若呈反應性，則進行鑒別檢測，檢測有反應性的標本即可判定為不合格。

1.4 統計學分析采用SPSS 22.0統計軟件分析數據。計數資料以n（%）表示，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 NAT檢測情況19845份無償獻血標本經NAT檢測，一級反應池共檢測了4205個，其中出現85個反應性一級反應池，反應率為2.02%（85／4205）；拆分后進行單檢或再鑒別檢測，共有44份標本出現反應性，總反應率為0.22%（44／19845）。

2.2 不同系統NAT檢測情況諾華操作系統共檢測1970份標本，出現8個反應性，反應率為0.41%（8／1970）；然后再進行鑒別檢測，共4份標本出現反應性，反應率為0.20%（4／1970）。浩源操作系統共檢測17875份標本，出現77個反應性一級混樣池，反應率為0.43%（77／17875）；拆分后進行單檢，共40份標本出現反應性，反應率為0.22%（40／17875）。兩種操 作系統 反應率 比較無 統計學差 異（χ2＝0.004，P＝0.947）。見表1。

表1 不同系統NAT檢測情況

3 討論

輸血治療是多種疾病傳播的重要途徑，雖然在輸血治療前會對血液進行基本傳染病化驗，但仍會發生感染，無法完全避免輸血疾病的傳播［4］。目前，大部分血站篩查血液仍采用ELISA檢測技術對乙肝、丙肝、艾滋病等病毒進行篩查，但由于該方法“窗口期”較長，且易出現免疫沉默，導致敏感度較低，漏檢情況頻發［5］，在輸血臨床中已引起高度重視。

研究［6］表明，ELISA檢測中的血清轉化“窗口期”是導致漏檢的主要原因，故若能縮短“窗口期”則可降低漏檢率，提高敏感度。隨著血液檢測技術不斷發展，NAT檢測已覆蓋發達城市大部分血站，在血液篩查中越來越常用，該項檢測技術可直擊病毒DNA或RNA結構，檢測血液中有無病毒核酸，判斷血液是否攜帶感染病毒，應用價值較高［7］。NAT檢測在一些發達國家已被作為獻血者常規篩查項目，我國已逐步展開并取得了一定成效，可明顯縮短“窗口期”，彌補ELISA存在的不足［8］。本研究結果顯示，19845份無償獻血標本經NAT檢測，一級反應池共檢測了4205個，其中出現85個反應性一級反應池，反應率為2.02%；拆分后進行單檢或再鑒別檢測，共有44份標本出現反應性，總反應率為0.22%。諾華操作系統共檢測1970份標本，出現8個反應性，反應率為0.41%；然后再進行鑒別檢測，共4份標本出現反應性，反應率為0.20%。浩源操作系統共檢測17875份標本，出現77個反應性一級混樣池，反應率為0.43%；拆分后進行單檢，共40份標本出現反應性，反應率為0.22%；兩種操作系統反應率相比未見明顯差異。上述結果表明，獻血者血液篩查中ELISA檢測易出現漏診，若聯合NAT檢測則可起到補充作用，提高陽性檢出率。究其原因為，NAT檢測在人員技術培訓、檢測步驟、質量控制等方面已形成一套科學規范的流程，具有較高的可行性與操作性，與ELISA檢測聯用可發揮不同程度的檢測效能，提高血液陽性檢出率，確保血液質量，提高輸血安全。ELISA是檢測輸血傳播性疾病的常用方法，通過檢測血液中病毒或螺旋體的抗體，具有較高靈敏度，但特異度低下，非特異性反應升高，導致假陽性頻發。ELISA與NAT檢測相互補充，病毒從感染人體到體內復制，到發病的過程，病毒核酸及蛋白，人體抗體蛋白的產生量是個動態過程，經ELISA單試劑檢測陽性標本多數經NAT檢測為非反應性，可見標本可能發生了非特異性反應。

綜上所述，獻血者血液篩查中ELISA檢測易出現漏診，若聯合NAT檢測則可起到補充作用，提高陽性檢出率。