慢傳輸型便秘動物模型的研究進展

許燕城，劉啟鴻，柯曉

(福建中醫(yī)藥大學附屬第二人民醫(yī)院脾胃病科，福州 350003)

慢傳輸型便秘(slow transit constipation，STC)屬于慢性功能性便秘，與腸動力障礙、腸道分泌功能異常、腸道菌群失衡、精神心理因素等有關，主要表現(xiàn)為便次減少、糞質(zhì)干硬、排便費力[1]。其患病率隨人們飲食、生活習慣變化以及社會、心理因素等影響而逐漸增加。但目前STC發(fā)病機制并不明確，現(xiàn)有的藥物治療大都有效性不足，因而通過動物實驗進行更深層次的機制研究以尋求更高效的治療方法至關重要。現(xiàn)有STC造模方法主要分為藥物及非藥物誘導，評價方法則囊括了模型的各項生理、病理情況檢測。目前尚缺乏對模型的建造方法及其評價手段的全面整理總結。因此，有必要建立一種操作簡便、復制性強，且符合STC病理、生理特點及臨床特點的動物模型，并建立一套統(tǒng)一的評價標準。現(xiàn)通過文獻檢索，對國內(nèi)外STC動物模型建造方法及評價手段進行歸納總結，并提出可進一步改進意見，以期為今后的研究提供參考。

1 造模動物的選擇

目前，國內(nèi)外常用的便秘模型動物以大鼠和小鼠為主。作為常用實驗動物，大鼠具有易獲得、經(jīng)濟、易飼養(yǎng)、性格溫順、耐受力好、抗病力強、繁殖力強、解剖學特性及生理特性與人類接近等優(yōu)點。國內(nèi)外多選用6～8周清潔級或無特定病原體的SD大鼠或Wister大鼠，體重110～250 g，雌雄不限。與雌鼠相比，雄鼠對大黃的敏感性更好，因此在使用大黃誘導模型時可使用雄鼠[2]。

小鼠亦是實驗室研究常用動物，同樣具有易獲取、成本低、易飼養(yǎng)、性格溫順、繁殖力強等優(yōu)點，但相較于大鼠，壽命短、耐受力差，不宜長時間給藥，用于模型建立存在一定局限性。常用品系為昆明小鼠及ICR小鼠，體重20～25 g，雌雄均可。有研究發(fā)現(xiàn)，小鼠對嗎啡等阿片類藥物敏感，出現(xiàn)便秘癥狀顯著，而且造模周期短，因此嗎啡法誘導STC動物模型時多選用小鼠[2]。

2 造模方法的選擇

目前已有的造模方法多種多樣，大致分為藥物及非藥物兩大類，每種造模方法的作用機制不同，同時也各具優(yōu)缺點。

2.1藥物造模法

2.1.1復方地芬諾酯 復方地芬諾酯的主要成分為地芬諾酯和阿托品，其作用機制類似于嗎啡：腸黏膜感受器受到抑制，局部黏膜蠕動反射被消除，從而使腸道蠕動減緩，腸內(nèi)容物與腸黏膜的接觸時間延長，水分的吸收增多。

劉麗兵等[3]按10 mg/(kg·d)的復方地芬諾酯喂養(yǎng)大鼠，連續(xù)喂養(yǎng)14 d后，大鼠糞便數(shù)量和含水量降低，檢測結果顯示P物質(zhì)含量明顯下降，血清一氧化氮和一氧化氮合酶含量明顯增加；血管活性腸多肽(vasoactive intestinal polypeptide,VIP)水平明顯升高、黏膜c-Kit陽性細胞明顯減少、干細胞因子表達明顯降低，表明STC動物模型建立成功。楊穎等[4]將復方地芬諾酯按10 mg/(kg·d)的劑量連續(xù)給藥20 d，結果發(fā)現(xiàn)STC大鼠的首粒黑便時間延長，糞便干濕重百分比、大腸埃希菌含量顯著上升，VIP含量顯著上升，蛋白激酶A、水通道蛋白3及水通道蛋白4的基因、蛋白表達顯著上調(diào)，雙歧桿菌、乳酸菌及P物質(zhì)含量顯著減少。

陸泰旭等[5]在飼料中添加復方地芬諾酯，劑量為8 mg/(kg·d)，連續(xù)飼養(yǎng)120 d，結果表明該模型大鼠首次排便時間延長，P物質(zhì)、VIP含量明顯下降，符合STC患者臨床癥狀和病理、生理特點。包云光等[6]在3 d基線期后，以8 mg/(kg·d)的劑量給模型組大鼠連續(xù)飼喂復方地芬諾酯混懸液90 d，結果表明，相較正常大鼠，模型組大鼠排便粒數(shù)較少，每粒糞便重量更大，首粒黑便排出時間延長；模型組c-Kit陽性細胞的數(shù)量顯著減少；但遠端結腸黏膜的一氧化氮、P物質(zhì)含量及VIP陽性細胞分布與正常大鼠相比差異無統(tǒng)計學意義。

該模型與STC患者結腸的功能狀態(tài)、病理改變情況相近，且操作簡單，成本較低，成功率高，可重復性強，是國內(nèi)STC研究的經(jīng)典造模方法之一。但經(jīng)對比發(fā)現(xiàn)，不同研究之間一氧化氮、P物質(zhì)、VIP等指標不同，造成這種差異可能與給藥劑型不同、飼養(yǎng)時間差異、是否設置基線期及基線期長短、是否限水等因素相關，確切的原因還有待進一步研究。此外，劑量為8 mg/(kg·d)模型與劑量為10 mg/(kg·d)模型僅相差2 mg/(kg·d)，造模周期卻相差100多天，相較周期長的模型，周期明顯縮短的10 mg/(kg·d)復方地芬諾酯模型的穩(wěn)定性研究目前未發(fā)現(xiàn)相關報道。

2.1.2洛哌丁胺 洛哌丁胺為阿片受體激動劑，可抑制腸道平滑肌的收縮，減少腸蠕動；減少乙酰膽堿的釋放,憑借膽堿能與非膽堿能神經(jīng)元局部的相互作用,直接抑制蠕動反射，從而增加腸壁與腸內(nèi)容物的接觸時間；抑制前列腺素、霍亂毒素及其他腸毒素導致的過度分泌，增加水分吸收[7]；增加腸黏膜細胞水通道蛋白8的表達，促進跨膜水運輸，減少糞便含水量[8]，這些機制共同作用，最終導致糞便干結、排便減少。

將洛哌丁胺與嗎啡進行比較發(fā)現(xiàn)，當以30 mg/kg劑量注射洛哌丁胺，每日2次，給藥2 d，其對胃腸傳輸?shù)囊种谱饔妹黠@降低，而嗎啡未出現(xiàn)上述情況，提示洛哌丁胺易產(chǎn)生耐受而降低其抑制胃腸傳輸?shù)淖饔肹9]。樂音子等[10]予以大鼠洛哌丁胺混懸液3.0 mg/(kg·d)灌胃，持續(xù)14 d，結果顯示，STC大鼠糞便干結，含水率顯著下降，小腸活性炭推進率明顯降低，結腸組織結構異常，炎癥細胞浸潤，組織一氧化氮和一氧化氮合酶含量顯著增多，c-Kit和肌球蛋白輕鏈激酶蛋白表達顯著減少，符合STC的病理改變。黃亞娟等[11]設置了模型組和模型維持組，兩組均給予洛哌丁胺混懸液3.0 mg/(kg·d)劑量連續(xù)給藥6 d，第7天開始，模型維持組繼續(xù)以上述劑量給藥6 d，模型組予以等量蒸餾水。結果表明，給藥6 d后，兩組大鼠糞便粒數(shù)、質(zhì)量、含水量均下降，與STC的臨床表現(xiàn)相似；給藥12 d后，模型維持組上述現(xiàn)象較模型組加重。提示洛哌丁胺混懸液造模以3.0 mg/(kg·d)給藥6 d的方案能夠成功建立STC模型，具有造模時間短、經(jīng)濟、易操作等優(yōu)點，但停藥后有自愈的可能，而以“6+6”的維持方案能夠獲得一個較為穩(wěn)定且安全的動物模型，是一種較為簡便可靠的造模方法，與樂音子等[10]造模所用時間接近。但維持給藥6 d后癥狀是否會再次逐漸恢復，最佳維持給藥時間仍需進一步實驗探討。

2.1.3嗎啡 嗎啡為阿片受體激動劑，主要用于鎮(zhèn)痛，患者在使用嗎啡后往往出現(xiàn)嚴重且持久的便秘癥狀，其作用機制為嗎啡對胃腸平滑肌有興奮作用，可提高其張力，甚至痙攣，胃腸平滑肌張力增加，蠕動減弱，內(nèi)容物通過延遲；回盲瓣與肛門括約肌張力增加，阻礙了腸內(nèi)容物排空；嗎啡對消化液的分泌有抑制作用，延長內(nèi)容物消化時間；嗎啡有中樞抑制作用，影響便意的產(chǎn)生，因而引起便秘[12]。王吉侯等[13]按2.5 mg/(kg·d)的劑量，連續(xù)45 d予模型組小鼠皮下注射嗎啡建立模型。結果顯示，STC小鼠糞便質(zhì)量降低，腸道蠕動減緩，P物質(zhì)、結腸Cajal間質(zhì)細胞(interstitial cells of Cajal，ICCs)陽性表達減少。該模型與STC的病理特征吻合，造模方法較為簡單，但仍存在以下幾點問題：①ICCs 的減少與嗎啡有無關聯(lián)性仍有待進一步研究;②小鼠耐受力較差，皮下注射的給藥方式存在感染風險，易發(fā)生小鼠死亡的情況；③嗎啡作為成癮性藥物，現(xiàn)有報道均缺乏對給藥后期小鼠精神狀況的評估；④作為管控嚴格的精神藥品，嗎啡的獲取困難；⑤相較于STC發(fā)病機制，嗎啡的作用機制是復合的，但其所誘導模型更接近于混合型便秘，這在很大程度上影響后續(xù)研究。

2.1.4鹽酸小檗堿 鹽酸小檗堿為中藥黃連中提取的一種生物堿，因其抗菌作用，常被用于腸道感染，其不良反應之一為排便困難。吳迪等[14]設置低、中、高劑量模型組，分別給予25、50、100 mg/(kg·d)的鹽酸小檗堿，連續(xù)14 d灌胃，給藥過程中自由飲食，觀察發(fā)現(xiàn)，與正常大鼠相比，中劑量組大鼠首次排便時間延長，糞便粒數(shù)及含水量下降，而低劑量組各指標無顯著改變，高劑量組糞便粒數(shù)無顯著改變。關永俊[15]通過鹽酸小檗堿50 mg/(kg·d)灌胃14 d發(fā)現(xiàn)，STC大鼠胞內(nèi)游離Ca2+增加，從而導致腸道內(nèi)ICCs發(fā)生細胞自噬，形態(tài)萎縮，數(shù)目減少，進一步導致STC的發(fā)生。鹽酸小檗堿模型與STC臨床表現(xiàn)一致，且成本低、操作簡易、周期短，但該方法作用機制尚不明確，有待進一步研究。

2.1.5大黃 大黃為臨床常用中藥之一，國內(nèi)常用大黃建造“瀉劑結腸”的STC動物模型。徐天舒等[16]予以大黃粉混懸液灌胃，初始量為 150 mg/(kg·d)，并以150 mg/(kg·d)逐日遞增，當50%大鼠腹瀉時，持續(xù)給藥至80%大鼠無排稀便，此后繼續(xù)按150 mg/(kg·d)逐日增加，至又見50%大鼠腹瀉時，維持劑量不變，其后繼續(xù)逐日加量，這樣重復3次，當?shù)?次出現(xiàn)80%大鼠無稀便，維持給藥1周后停藥，最后大鼠糞便含水量、排便量明顯少于正常大鼠，提示造模成功。孫宇和姚秋園[17]以300 mg/(kg·d)為初始量造模，并以300 mg/(kg·d)逐日遞增至1/2大鼠出現(xiàn)粥樣便，并以此劑量維持至4/5大鼠粥樣便消失，這樣重復3次，當?shù)?次出現(xiàn)4/5大鼠無稀便，維持給藥1周后停藥；該造模方法給藥劑量高達5 700 mg/(kg·d)，造模時間長達87 d，遠超大黃中毒劑量，且周期長。“瀉劑結腸”動物模型誘導過程與STC形成過程相似，是一種較為可靠、操作簡便、經(jīng)濟、重復性高的造模方法。但仍存在以下問題：①藥物劑量過大，甚至達到中毒劑量，周期較長；②目前不同學者采用大黃造模的劑量差異較大，造模時間也各不相同，這可能與不同產(chǎn)地、不同廠家的大黃有效成分存在較大差異相關，目前缺乏統(tǒng)一標準；③大黃并非單一成分藥物，其中所含其他成分對大鼠的影響目前尚不明確[2]，這些因素均不利于STC模型的建立及進一步用于實驗。

2.1.6酚酞 類似于大黃造模方法，張連陽等[18]將酚酞混入飼料喂養(yǎng)大鼠，整個造模過程分2期：第1期，初始量為100 mg/(kg·d)，此后以前日2倍劑量逐日遞增，當50%大鼠排稀便后維持劑量至80%大鼠無稀便,之后繼續(xù)雙倍劑量遞增至50%大鼠糞便變稀，如此循環(huán)3次,當末次80%大鼠無稀便1周后停藥,予以普通軟飼料喂養(yǎng)待處理,初次50%致瀉量為1 000 mg/(kg·d),末次調(diào)整量為4 000 mg/(kg·d)；第2期，初始量為200 mg/(kg·d),50%致瀉量為1 600 mg/(kg·d),末次調(diào)整量為3 600 mg/(kg·d)。與大黃模型相仿，該造模方法使得大鼠腸道傳輸延緩，肌間神經(jīng)叢嗜銀性顯著下降，這些改變均與STC患者相吻合。此外，本模型還具有成本低、易操作、可復制等優(yōu)點。然而，酚酞造模同樣存在藥物劑量過大、造模時間較長的問題，長期腹瀉易導致實驗動物出現(xiàn)電解質(zhì)紊亂，免疫力降低，甚至死亡。

2.2非藥物造模法

2.2.1冰水灌胃 長期冷刺激使腸道交感神經(jīng)興奮，血管收縮，腸道平滑肌痙攣，正性腸道激素分泌降低，腸道感覺功能和動力下降，進一步使腸道蠕動延緩，最終導致STC的形成[19]。林強等[20]每天以2 ml 0.9%氯化鈉溶液(0～4 ℃)灌胃大鼠，連續(xù)14 d，建立STC模型，結果顯示STC大鼠結腸c-Kit陽性的ICCs數(shù)目、超極化激活環(huán)核苷酸門控陽離子通道1蛋白表達、結腸推進速率、結腸離體肌條收縮幅度與頻率均降低，該模型能夠使模型動物出現(xiàn)與STC相似的糞便質(zhì)量、含水量下降，且方法簡便、成本低，但其作用機制更接近便秘型腸易激綜合征；模型穩(wěn)定性不明確，停止冰水刺激后，腸道表現(xiàn)是否會自愈尚有待評估。

2.2.2限水法 水分攝入的減少將會導致糞便含水量下降，糞便干結，傳輸延緩。王朝暉等[21]在測得大鼠每日正常飲水量并估計其每日正常糞便量后，于前2 d給予大鼠正常飲水量的1/6，后4 d給予正常飲水量的1/3，最后模型大鼠糞便表現(xiàn)為豌豆樣、圓珠狀干燥糞便，排出緩慢。曾群和趙果毅[22]通過連續(xù)3 d喂食大米并禁水及一切含水分食物，使得大鼠變得干瘦、小便黃，糞便顆粒小，呈串珠樣或圓珠樣。限水法所得模型病理表現(xiàn)與STC相似，具有造模時間短、操作簡便、成本低等優(yōu)點，但恢復正常水分攝入后模型的穩(wěn)定性情況及空氣濕度等生存環(huán)境對誘導模型的影響均有待進一步探討。

2.2.3低纖維飲食法 膳食纖維攝入不足導致腸道蠕動緩慢，從而出現(xiàn)排便困難。Kakino等[23]持續(xù)5周予以模型大鼠喂食低纖維飼料(41.5%的玉米淀粉、10.0%蔗糖、24.5%的牛奶酪蛋白、7.0%的礦物質(zhì)、10.0%糊精、6.0%的玉米油、1.0%維生素)，結果顯示，STC大鼠糞便重量、含水量較正常大鼠明顯下降。低纖維飲食誘導模型符合STC的發(fā)病過程，但Kakino等[23]僅通過檢測大鼠糞便性狀來判定模型成功與否，嚴謹性差，增加腸道傳輸檢測評估是否存在腸道蠕動緩慢更為準確；確切的誘導周期需要進一步對比確定，以獲得一個準確且穩(wěn)定的STC模型。

3 模型評價的方法

造模完成后，如何準確評價模型是一個尤為關鍵的問題，這關系到所建模型是否符合STC臨床及生理、病理特點，也影響后續(xù)相關實驗的準確性。

3.1一般情況觀察 一般情況觀察指在實驗過程中觀察實驗動物的活動情況、精神狀態(tài)、進食量、皮毛色澤、體重及糞便的粒數(shù)、重量、性狀等。造模成功后的大鼠多表現(xiàn)為喜靜、精神狀態(tài)差、食少、毛色枯黃、排便次數(shù)減少、顆粒變大且質(zhì)硬等情況，解剖見糞便集中在結腸段，呈串珠狀或球狀，質(zhì)干硬[24]。通過對動物的一般情況觀察能夠直觀地發(fā)現(xiàn)其外在變化，是先于解剖檢測的整體判斷，但由于這種判斷一定程度基于操作者的主觀感受，存在一定主觀性，對操作者的經(jīng)驗有一定要求，缺乏統(tǒng)一標準。

3.2排便情況觀察 評估糞便性狀，國內(nèi)通常參照Bristol糞便分型量表(Bristol stool form scale，BSFS)，共包含7類，其中BSFS1、BSFS2屬于便秘糞便性狀，BSFS4、BSFS5屬于正常糞便性狀[25]；記錄單位時間內(nèi)的糞便粒數(shù)、重量以量化排便情況，與正常大鼠相比，STC大鼠表現(xiàn)為糞便粒數(shù)、質(zhì)量下降；測定糞便含水率，通過測定動物糞便干、濕重進行推算，濕重即為新鮮糞便質(zhì)量，干重則是在適當溫度下充分烘干后的糞便重量，糞便含水率(%)=(濕重-干重)/濕重×100%[26]。排便情況觀察能夠判斷模型是否出現(xiàn)便秘癥狀，但其他類型便秘亦有可能出現(xiàn)糞便干結現(xiàn)象，特異性差，無法將STC與其他類型便秘相區(qū)別，只能作為一個大體判斷的參考指標。

3.3腸道傳輸功能測定 觀察首粒糞便排出時間，能夠直觀地了解大鼠排便是否延緩。為排除干擾，更為準確記錄這一時間，國內(nèi)外學者大都予模型動物一些無法消化的有色介質(zhì)灌胃，常見介質(zhì)包括墨汁、活性炭、曙紅、酚紅、硫酸鋇等[25]。

結腸推進實驗能夠更加準確、直觀地反映腸道的傳輸功能。陳霞等[27]造模結束后將STC動物禁食24 h,灌入活性炭，經(jīng)一段時間等待后處死動物，取出全部腸道，在無張力狀態(tài)下測量介質(zhì)在腸道內(nèi)推進的長度及腸道的全長,并計算推進長度占全腸道長度的百分比，炭末推進率(%)=炭末前端與幽門的距離(cm)/腸道總長度(cm)×100%。國內(nèi)有學者提出，活性炭或墨汁在用于結腸推進實驗中反映胃腸運輸功能并不夠客觀，原因為這兩種介質(zhì)均能夠對胃腸道運動產(chǎn)生一定影響，影響檢測結果的準確性[28]，對此，他們提出塑料球粒灌胃法，其結果與炭末灌胃法結果相吻合且具有操作簡單、對腸道傳輸無影響、重復性強等優(yōu)點，但目前此方法尚未得到推廣，這可能與塑料球粒的制作工藝較為復雜有關。

3.4腸道張力測定 腸道張力異常提示腸道平滑肌功能障礙可能，為STC發(fā)病機制之一。張顏語[29]分別截取模型大鼠一段十二指腸及回腸，以BL>420 F(系統(tǒng)型號)生物機能實驗系統(tǒng)測量其腸道張力，結果顯示十二指腸無明顯改變，而回腸頻率下降。腸道張力能在一定程度反映腸道平滑肌狀態(tài)，是一個可靠的評價指標，但目前有關腸道張力測定的報道主要截取腸段均為十二指腸及回腸，其結果并不能等同于結腸，因此結腸張力測定方法仍有待進一步探索。

3.5腸道內(nèi)容物百分比測定 造模成功后，將取出的模型大鼠腸道稱重，縱切后用磷酸鹽緩沖液將腸壁充分沖洗干凈，濾紙吸干水分后，再次稱重，前后差值即為腸道內(nèi)容物總質(zhì)量，從而計算腸道內(nèi)容物百分比[30]。本方法操作簡單，可重復性強，無介質(zhì)干擾腸道運輸。但前后對比腸道內(nèi)容物百分比僅僅反映了糞便排出情況，并不能反映腸道傳輸過程存在的問題；此外，腸壁沖洗及吸干水分不充分，腸壁糞便或水分殘留時可造成一定誤差。

3.6結腸肌電測定 結腸肌電動作電位產(chǎn)生于慢波之上，同步于平滑肌收縮，作為主動力作用于結腸產(chǎn)生推進性運動。慢波的異常會影響結腸收縮，進而導致腸道傳輸延緩。通過結腸肌電測定，可對腸道運輸功能進行判斷，是一項重要的評估結腸動力的手段。目前主要包括在體和離體兩種檢測方式。

3.6.1在體結腸肌電測定 吳本升等[26]將大鼠禁食、麻醉并消毒后，切開腹部，在距盲腸2 cm處安放一對銀絲電極，固定于結腸腸壁，導線自切口引出連接系統(tǒng)，然后縫合，15 min后開始記錄，連續(xù)記錄1 h，將每組5 min的記錄結果作為一個時間段，計算出每一組大鼠各個時間段的頻率和振幅的平均值、標準差及變異系數(shù)，慢波頻率變異系數(shù)(%)=慢波頻率標準差/慢波頻率均值×100%，慢波振幅變異系數(shù)(%)=慢波振幅標準差/慢波振幅均值×100%。他們發(fā)現(xiàn)，STC大鼠腸道振幅、頻率變異系數(shù)及振幅變異系數(shù)均顯著上升，提示STC大鼠結腸慢波節(jié)律顯著異常。通過在體結腸肌電測定，能夠較為準確、客觀地反映模型大鼠腸道電生理情況，但在體開腹檢測操作較為復雜，對操作者技術要求較高；易造成實驗動物感染甚至死亡，對無菌操作要求較高。

3.6.2離體結腸肌電測定 乙酰膽堿對胃腸道具有正性作用，可刺激肌肉收縮。在一定張力負荷下，觀察藥物刺激前后腸道張力變化，以此判斷其動力情況。徐天舒等[16]將STC大鼠結腸組織固定于實驗系統(tǒng)上，記錄經(jīng)乙酰膽堿刺激前后肌條變化，結果發(fā)現(xiàn)，STC大鼠結腸收縮幅度顯著低于正常大鼠。林強等[20]將制備好的STC大鼠環(huán)、縱行肌肌條放入恒溫肌槽(持續(xù)充入95%O2和5%CO2混合氣體并裝有37 ℃ Krebs緩沖液)，保持肌條活性，并在一定張力負荷下，測定肌條收縮振幅和頻率，結果顯示模型大鼠環(huán)、縱行肌肌條收縮振幅和頻率均明顯低于正常大鼠。

離體檢測不存在發(fā)生感染事件的情況，操作簡便，能夠較為準確地評估腸道動力情況。但與在體檢測相比，不論是經(jīng)乙酰膽堿刺激后的離體檢測還是在恒溫肌槽中的離體檢測，均不能完全模擬動物的活體情況，與活體的實際檢測結果是否存在誤差仍有待確定；且離體檢測對肌條的制備及檢測的環(huán)境較高。

3.7結腸組織病理變化

3.7.1結腸組織大體形態(tài) 關于STC的研究，目前國內(nèi)外多使用蘇木精-伊紅染色法觀察腸道的大體形態(tài)改變，采用阿爾新藍或糖原染色觀察腸道黏液分泌情況[25]。Wallace和Keenan[31]使用蘇木精-伊紅染色對復方地芬諾酯誘導的大鼠近端結腸進行觀察分析，并采用結腸病理組織學指數(shù)評分標準(結腸病理組織學指數(shù)=炎癥細胞浸潤程度評分+杯狀細胞損壞評分情況+病變深度評分)對結腸病理切片進行評價，結果提示，STC大鼠結腸隱窩深度較正常大鼠小，有大量的炎癥反應，杯狀細胞丟失。Kim等[32]通過觀察洛哌丁胺建模發(fā)現(xiàn)，STC小鼠橫結腸黏膜、肌肉與扁平腔表面顯著變薄，黏蛋白分泌總量明顯變少。通過觀察結腸組織的大體形態(tài)，能夠一定程度判斷其病理變化是否與STC相吻合，但不同造模方法和部位結果有所差別，缺乏統(tǒng)一的判斷標準。

3.7.2腸神經(jīng)系統(tǒng)(enteric nervous system，ENS) ENS包括黏膜下神經(jīng)叢及肌間神經(jīng)叢，能夠相對獨立地調(diào)控腸道運動、分泌等多種生理功能。劉麗莎等[33]觀察發(fā)現(xiàn)，STC小鼠結腸黏膜下環(huán)肌層腸膠質(zhì)細胞、黏膜下神經(jīng)叢及肌間神經(jīng)叢的腸神經(jīng)元數(shù)量顯著減少，電鏡下觀察腸膠質(zhì)細胞結構可見細胞核染色質(zhì)聚集，部分核固縮，細胞質(zhì)內(nèi)線粒體腫脹，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張。Cheng等[34]通過光學顯微鏡發(fā)現(xiàn)，STC患者結腸內(nèi)肌間神經(jīng)叢纖維在固有肌層間出現(xiàn)空泡變性，電鏡下盆腔副交感神經(jīng)有髓纖維有明顯空泡變性。Boschetti 等[35]發(fā)現(xiàn)嚴重腸運動障礙患者的腸道推進功能明顯受損，其腸神經(jīng)節(jié)間距離顯著增加，同時腸神經(jīng)和黏膜下神經(jīng)元數(shù)量減少。ENS的改變?yōu)镾TC重要發(fā)病機制之一，因此對于ENS的觀察是準確評估模型不可或缺的一步。

3.7.3ICCs ICCs大多存在于肌間、黏膜下神經(jīng)叢，多為胃腸道起搏細胞，是胃腸道慢波的發(fā)起與傳播者，它在胃腸道平滑肌收縮節(jié)律、幅度、方向的調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用[35]。結腸ICCs減少以及分布、結構、功能異常與STC發(fā)病密切相關。ICCs結構的破壞或數(shù)量的減少可引發(fā)胃腸慢波改變，導致胃腸道蠕動功能障礙[35]。酪氨酸激酶受體c-Kit為ICCs的特異性標志物[36]，包云光等[6]通過蘇木精-伊紅染色及免疫組織化學染色法發(fā)現(xiàn)，與正常對照組相比，STC組結腸遠端黏膜c-Kit陽性細胞數(shù)目較少。陳霞等[27]通過免疫組織化學染色發(fā)現(xiàn)，STC小鼠結腸c-Kit陽性及ICCs數(shù)顯著減少。田宇和毛於安[37]使用免疫熒光技術檢測發(fā)現(xiàn),STC大鼠ICCs數(shù)顯著降低，ICCs交互網(wǎng)絡稀薄，細胞變窄變細；便秘大鼠ICCs自噬泡數(shù)量較正常大鼠增加，并表現(xiàn)出顯著的細胞自噬性死亡，提示細胞自噬引發(fā)了STC大鼠腸道內(nèi)ICCs的數(shù)量降低。盡管ICCs與STC關系密切，但存在其他胃腸動力障礙疾病與ICCs有關，因此ICCs的改變并不能作為STC的特異性病理改變，是否能以此作為STC模型評價方法目前仍存在爭議。

3.8腸道微生態(tài)測定 腸道菌群的代謝產(chǎn)物短鏈脂肪酸(丁酸為主)通過影響神經(jīng)遞質(zhì)5-羥色胺的釋放、改變腸道水鈉吸收、直接影響平滑肌收縮，從而改變結腸運動及排便情況[38]。楊穎等[4]通過對STC大鼠糞便培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，糞便中大腸埃希菌含量明顯上升，雙歧桿菌和乳酸菌含量明顯下降。其中，過量的大腸埃希菌可引起腸道微生態(tài)失衡，而雙歧桿菌及乳酸菌可通過調(diào)節(jié)胃腸道pH值，對病原菌的生長繁殖產(chǎn)生抑制作用，從而平衡腸道菌群[39-40]。然而，腸道菌群并非直接作用于腸道動力，并不能直接反映STC的特點，故目前國內(nèi)外研究仍主要將該方法應用于與腸道微生態(tài)相關研究中，尚未作為主要建模評價方法。

4 小 結

造模方法的不足：①同種造模方法缺乏統(tǒng)一實施標準，不同報道之間基線期、給藥劑量、給藥劑型、造模周期等不盡相同；②各模型缺乏統(tǒng)一且準確的評價標準；③多數(shù)模型的穩(wěn)定性不明確，現(xiàn)有報道大多未考慮模型在停止給藥后是否會自行恢復問題；④誘導方式單一，目前模型多為單一方法誘導的結果，有別于臨床發(fā)病原因復雜的特點。因此，在造模方法上，未來需要學者們努力的方向為：①探索同種造模方法的最佳方案，為后來者提供一個統(tǒng)一的實施標準；②重視對模型穩(wěn)定性的研究探索，推廣穩(wěn)定性強的方法，改進或淘汰穩(wěn)定性差的方法；③探索更加符合臨床發(fā)病特點的復合模型。

造模評價方面，不同動物實驗報道模型評價方法各異，涵蓋了一般情況、糞便情況、結腸動力傳輸評估、結腸病理及電生理檢測、腸神經(jīng)測定、結腸ICCs檢測及腸道微生態(tài)等多種方法。但目前國內(nèi)外尚未形成一套統(tǒng)一的評價標準，而評價的偏差也將深刻影響各項研究的結果。此外，羅馬Ⅳ提出“腦-腸互動異常”這一概念，精神心理因素與STC互為因果，但目前研究中，尚未看到關于模型動物精神心理相關的描述及評價。一套完善的評價體系應該以一般情況及糞便情況觀察為基礎，以判斷其是否符合便秘表現(xiàn)；以結腸傳輸測定為金標準，以明確模型是否符合STC表現(xiàn)。在此前提下，可根據(jù)不同研究目的增加腸道張力測定、結腸病理及電生理檢測、腸神經(jīng)測定、結腸ICC檢測及腸道微生態(tài)等方法，以明確模型是否符合STC病理生理改變。建立符合臨床疾病病理、生理特點的動物模型是進行一項實驗的重要前提，也是需要全世界學者攻克的難點，未來還需要投入更多時間精力去探索完成。