抗角蛋白抗體、抗核周因子、葡萄糖-磷酸異構酶聯合檢測在類風濕關節炎臨床診斷中的應用價值

楊春秋，王俊杰，鄒 瑞

(安徽省太和縣人民醫院/皖南醫學院附屬太和醫院，安徽 阜陽 236600)

類風濕關節炎(rheumatoid arthritis，RA)屬于自身免疫性疾病，在我國有著較高的發病率，在0.32%～0.36%[1]。隨著患者病情進展，在2年內可出現無法逆轉的骨關節破壞，影響患者關節功能。類風濕因子為RA患者血清中主要的一種自身抗體，是臨床中常用診斷RA的標準，但其特異性不高[2]。隨著對RA研究不斷深入，更多的自身抗體如抗角蛋白抗體(anti keratin antibody，AKA)、抗核周因子(antinuclear factor，APF)也被逐漸應用于臨床，為早期診斷RA提供更全面參考依據，可減少了RA致殘率[3]。有研究表明，RA患者血液及關節液中的葡萄糖-磷酸異構酶(glucose phosphate isomerase，GPI)均有明顯升高，對RA早期診斷參考作用[4]。但在臨床中單獨實驗室指標用于臨床診斷均存在一定局限性，因此本文使用AKA、APF、GPI聯合檢測，分析三者聯合檢測在RA中的應用價值，以期為臨床早期診斷提供新方向。

1 資料與方法

1.1 一般資料2019年3月至2021年3月我院收治的106例RA患者(RA組)，納入標準：①資料無缺失；②符合美國風濕病學會聯合歐洲抗風濕病聯盟(ACR/EU-LAR)中的診斷標準[5]。排除標準：①入院前進行非甾體類消炎藥、抗風濕藥、免疫抑制劑等治療者；②存在代謝性疾病者；③合并其他臟器腫瘤者。RA組男41例，女65例，年齡40～80歲[(51.65±6.69)歲]，病程2個月至10年[(5.15±1.31)年]，DAS28評分2～12分[(4.16±1.24)分]。RA患者活動性判斷標準[6]：①關節腫脹≥6個；②關節壓痛≥16個；③紅細胞沉降率≥30 mm/h；④晨僵≥45 min；⑤C反應蛋白大于正常上限的1.5倍。RA患者存在①+②同時伴有③、④、⑤三項的任何兩項被認為活動(活動期)；不同時滿足①+②或僅③、④、⑤一項，被認為不活動或活動度低(非活動期)。其中51例為活動期，55例為非活動期。根據X射線檢查結果分為輕度組(輕微關節侵蝕)58例，重度組(嚴重關節侵蝕)48例。另選取同期收治的非RA自身免疫性疾病患者91例作為非RA組，其中男36例，女55例，年齡39～81歲[(50.71±6.33)歲]，骨性關節炎44例、系統性紅斑狼瘡31例、干燥綜合征9例、強直性脊柱炎7例。兩組一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 檢測方法入院當日收集入選者靜脈血液3 ml待檢。間接免疫熒光法進行AKA、APF檢測，AKA抗原：大鼠食道中1/3段橫切面，APF抗原：正常人即將脫落的頰黏膜上皮細胞，在與入選者血清充分反應后，將熒光素所標記兔抗人IgG抗體加入到血清當中，隨后進行觀察。AKA試劑為德國歐蒙公司提供，陽性：在熒光顯微鏡下觀察標本角質層呈線性，可見板層狀熒光則判定為陽性[7]。APF試劑為北京和杰公司提供，陽性：在細胞質中出現大小不等的橢圓形或圓形的均質熒光顆粒[8]。GPI使用雙抗體夾心法進行檢測，試劑盒為上海北加生化試劑公司提供，結果判讀：≥0.2 mg/L為陽性。

1.3 觀察指標①RA組與非RA組AKA、APF、GPI表達。②活動期與非活動期患者AKA、APF、GPI陽性率。③不同病情程度患者AKA、APF、GPI陽性率。④分析AKA、APF、GPI單獨及聯合檢測對類風濕關節炎的診斷價值。

1.4 統計學方法采用SPSS 20.0統計學軟件分析數據。計量資料以均數±標準差描述，組間比較采用t檢驗；計數資料以率或構成比表示，組間比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 RA組與非RA組AKA、APF、GPI陽性率比較RA組AKA、APF、GPI陽性率高于非RA組(P<0.05)。見表1。

表1 RA組與非RA組AKA、APF、GPI陽性率比較 [n(%)]

2.2 活動期與非活動期患者AKA、APF、GPI陽性率比較活動期患者AKA、APF、GPI陽性率高于非活動期患者(P<0.05)。見表2。

表2 活動期與非活動期患者AKA、APF、GPI陽性率比較 [n(%)]

2.3 不同病情程度患者AKA、APF、GPI陽性率比較重度組AKA、APF、GPI陽性率高于輕度組(P<0.05)。見表3。

表3 不同病情程度患者AKA、APF、GPI陽性率比較 [n(%)]

2.4 單獨及聯合檢測對RA的診斷價值AKA+APF+GPI檢測診斷RA的靈敏度、特異度、陽性預測值、陰性預測值均高于三因子單獨檢測(P<0.05)。見表4。

表4 單獨及聯合檢測對RA的診斷價值 (%)

3 討論

AKA最先于1979年被發現及命名，AKA的把抗體是屬于不溶性纖維蛋白，為細胞的骨架成分，在臨床中發現AKA抗體的IgG型與RA相關，在RA的診斷效能較好，特異性高[9]。在以往研究中發現，在RA患者中發現AKA抗體陽性率可超過46%，其檢測的特異性可高達98%，因此也認為AKA屬于RA評估的最特異性生物學指標[10]。有研究發現，有AKA陽性的“健康人群”，后續發展成為RA的概率大，說明AKA對RA早期診斷具有一定的預測價值[11]。APF是在1995年被首次發現，靶抗原主要存在人頰黏膜的角質透明顆粒中，與AKA一樣，在早期RA患者中血液中表達可明顯升高。以往研究也認為，APF、AKA可作為RA發生的相關指標，對患者疾病進展也有一定的評估作用[12]。本研究發現，APF、AKA在RA患者中陽性率分別為50.94%、53.40%，且活動期患者與關節損傷更嚴重者APF、AKA陽性率更高，與上述研究相符，說明兩者可為RA診斷提供參考。

GPI最于1968年在非球形紅細胞溶血性貧血中被發現，GPI在細胞內的作用是促進糖酵解以及糖異生，是此過程中的重要酶類，一旦GPI升高可引發非球形紅細胞溶血性貧血，同時對患者時神經細胞也可造成一定損害[13]。GPI通常存在細胞的胞質內，同時也可作為細胞因子或生長因子被分泌于細胞外，誘導機體內髓樣肝細胞分化成為單核細胞，對B細胞分化也有誘導作用[14]。有研究發現，GPI可分泌運動因子，對細胞的增殖及遷移有促進作用，使用GPI抑制劑后可抑制運動因子以及酶活性所引起的細胞活動[15]。目前有關GPI與RA與之間的關系尚未明確，但已有研究顯示，在RA患者中出現GPI以及GPI免疫復合物升高的現象。同時也有研究表明，使用激光共聚焦顯微鏡以及免疫組織化學檢查發現，在患者的滑膜及關節滑膜的小動脈、毛細血管內均可見GPI高表達，出現此現象可能與血管內皮生長因子有關[16]。在本研究中GPI在RA、活動期RA以及未III～IV期患者中表達明顯升高，提示GPI可能參與RA發展，其表達水平與患者病情活動程度有關。同時GPI對RA診斷靈敏度與特異度分別為80.19%、80.22%，對RA診斷靈敏度稍高于APF、AKA檢查，但特異度較低。

既往有研究表明，自身抗體、抗原聯合檢測有助于提高對RA診斷特異性，降低誤診、漏診率[17～18]。在張利軍等[19]研究中也發現，多種抗體聯合檢測可明顯提高對RA診斷特異度，對RA早期診斷及治療有重要臨床意義。本研究通過AKA+APF+GPI聯合檢測發現靈敏度、特異度、陽性預測值、陰性預測值均在90%以上，說明聯合診斷可彌補單項診斷不足，當上述指標出現兩種或兩種以上陽性時需高度警惕RA。

綜上，AKA、APF、GPI聯合檢測可提高對RA早期診斷效能，為臨床提供更全面參考信息，對臨床診療有一定的指導意義。