腸道病毒71型疫苗研究進展

董成威

賀州市疾病預防控制中心 廣西 賀州 542899

手足口病（hand, foot, and mouth disease，HFMD）作為兒童常見一類傳染性疾病，特征表現為發熱﹑口腔后部多發潰瘍及手﹑足底﹑臀部丘疹或皰疹，對部分病情危重患兒而言，甚至會引起無菌性腦膜炎﹑急性弛緩性癱瘓﹑腦干腦炎﹑肺水腫等嚴重并發癥。HFMD傳染性較強，可通過糞-口途徑﹑直接接觸﹑間接接觸及呼吸道飛沫等途徑傳播[1]。HFMD多見于5歲以下兒童，全面均可發生，且疾病呈現明顯季節分布，每年4～8月份﹑9～12月份亞太地區為HFMD流行高峰時期。HFMD作為腸道病毒，歸屬為小RNA病毒科腸道病毒屬，包括柯薩奇病毒A組的4﹑5﹑6﹑7﹑9﹑10﹑16型及B組的1﹑2﹑3﹑5型，埃可病毒部分血清型﹑腸道病毒71型（EV71）等。腸道病毒71型具有嗜神經毒性，極易引起嚴重神經系統并發癥，作為重癥HFMD發生主要病原[2]。隨著近些年來國家對HFMD相關重視程度上升，有關防治手段不斷完善，且針對腸道病毒71型等病毒有相關疫苗研制及應用，取得顯著成效。文章就腸道病毒71型疫苗應用情況如下分析，現報道如下。

1.EV71病毒

1969年首次在加利福尼亞患有中樞神經系統疾病嬰兒糞便中分離出EV71病毒。至20世紀90年代后，EV71并廣泛在亞洲地區流行，并在馬來西亞﹑新加坡等地區大規模爆發流行。患兒主要表現癥狀輕微，僅表現出皮疹﹑皰疹性咽峽炎，預后良好[3]。對部分患兒而言，會合并重癥感染，如無菌性腦膜炎﹑腦干腦炎及脊髓灰質炎樣麻痹﹑神經源性肺水腫等多種與神經系統相關嚴重并發癥，極少數病例不出現皮疹等手足口病典型癥狀，但由于病情兇險，進展快，臨床致殘率﹑致死率偏高。調查結果顯示，582例手足口病病例中腸道病毒陽性患者389例，其中EV71型占比為30.59%，柯薩奇病毒A16占比21.34%，其他腸道病毒感染占比48.07%[4]。對蘇州市2017～2018年手足口病病理標本1377份分析，2017年重癥病例發生與EV71相關，占比重癥病例綜述67.05%，2018年重癥病例與EV71﹑CA6相關，占據重癥病例總數22.72%﹑20.45%。EV71作為單股正鏈無囊膜小RNA病毒，病毒顆粒為二十面立體對稱球形結構，直徑維持在24～30nm[5]。病毒離子衣殼為60個亞單位構成，每個亞單位又由4種衣殼蛋白拼裝成五聚體樣結構，基因組編碼4種結構蛋白﹑7種非結構蛋白。

2.EV71疫苗

2.1 滅活全病毒疫苗

理化方法處理人工大量培養的完整病毒，喪失感染性毒性以保持免疫原性，與相應佐劑聯合所制成疫苗。迄今為止，中國大陸﹑中國臺灣及新加坡開發出完整滅活病毒EV-A71疫苗。2010年～2011年科興生物技術有限公司﹑微谷生物技術有限公司和中國醫學科學院醫學生物學研究所完成對滅活全病毒EVA71疫苗I期臨床試驗，并在2013年完成III期臨床試驗，2015年正式投入使用[6]。上述三個單位應用不同病毒株所開發疫苗分別為：H07菌株﹑FY7VP5菌株﹑FY-23菌株，均屬于EV-A71 C4亞型，為中國常見EV-A71 A亞型。科興生物技術有限公司III期臨床試驗中納入10077名6～35月齡嬰幼兒，隨機接受400U滅活EV-A 71全病毒疫苗﹑安慰劑，第一年監測中，EV-A71相關HFMD或皰疹咽峽炎保護率為94.8%，而EV-A 71相關住院﹑神經系統并發癥保護率為100%[7]。第二年對9595名嬰幼兒繼續隨訪，EV-A 71相關疾病保護率為95.1%，兩年總體保護率為94.7%，同時疫苗可針對EV-A71意外基因型產生交叉免疫，但對于CV-A 16等其他腸病毒相關的HFMD保護率僅為6.8%，不具備交叉保護能力[8]。

2.2 減毒活疫苗

減毒活疫苗免疫原性較強，對其原理分析上，可有效減弱病原體本身毒性并保留免疫原性。隨著近些年來減毒活疫苗成為研究熱點。但世界范圍內成功開發減毒活疫苗包括甲型肝炎﹑輪狀病毒及脊髓灰質炎等。當前對EV71所致手足口病，減毒活疫苗中比較成功為 EV71(S1-3′)，主要是對食蟹猴模型開展靜脈接種 EV71(S1-3′)，2～3周后食蟹猴機體內抗體滴度維持在1:2048，進一步得出，減毒活性毒株 EV71(S1-3′)對同種和不同基因型EV71病毒株具有中和作用，且對同種基因型效果跟我給顯著，但食蟹猴接種后，會產生震顫輕微中樞神經系統損害[9]。當前應用減毒活疫苗可有效刺激機體，并產生較強保護作用，但仍需進一步深入研究及分析，保證疫苗整體安全性，降低或杜絕疫苗所致神經系統損害風險。

2.3 DNA疫苗

DNA疫苗通過將編碼特異性抗原基因片段構建至含有表達調控元件的DNA質粒中，并直接遞送至機體內，并促使外源性抗原基因在機體內表達，可誘導機體所產生特異的細胞免疫﹑特體免疫應答，發揮治療﹑預防疾病目的，當前DNA疫苗被廣泛用于多種感染性疾病﹑慢性疾病及惡性腫瘤動物模型中[10]。相比較傳統疫苗，DNA疫苗特點為免疫效果顯著，免疫應答持久，價格低廉等優點。但DNA疫苗也存在缺陷，如外源性DNA進入機體后，是否會導致癌基因激活﹑抑癌基因失活，DNA疫苗長期在機體內表達，是否會誘導機體產生免疫耐受并造成機體免疫力低下，上述問題均是疫苗制備過程中需要注意問題，當前考慮是否添加佐劑﹑改變接種途徑等方式提高保護作用。

2.4 病毒樣顆粒疫苗（VLP）

VLP為病毒單一﹑多個結構蛋白自行裝配而成高度結構化蛋白質顆粒，相比較天然病毒顆粒，在形態特征﹑抗原性上相似，可有效繼發宿主免疫反應能力。VLP疫苗中不含有病毒基因組，不具備自發復制感染，作為候選疫苗構建安全選擇。基于制備脊髓灰質炎病毒VLP經驗，構建昆蟲細胞-桿狀病毒表達系統，制備EV-A71 B5亞型VLP疫苗[11]。疫苗誘導恒河猴產生較高水平EV-A71不同亞型特異性病毒抗體，進一步阻止EV-A71傳播。同時，酵母中同樣可產生EV-A71 VLP，應用畢赤酵母表達EV-A71 VLP可誘導小鼠產生同源﹑異源EV-A71株的中和抗體，經母體免疫保護新生小鼠免受EV-A71供給。當前，EV-A71 VLP下具有顯著保護效果，安全性高，抑郁制備，為優質的EV-A71候選疫苗，但疫苗生產成本偏高，產量相對偏低，仍需進一步改進[12]。

3.小結

EV71會引起手足口病，且作為手足口病產生常見病原株，并產生嚴重中樞神經系統疾病，危害兒童生命健康，成為當前嚴重公共衛生問題之一。當前有關EV71抗病毒藥物相關研究均為達到臨床試驗階段，為此，當前有關EV71防治多采取疫苗干預。自2015年上市了EV71滅活疫苗后，可顯著降低手足口病患病率，但當前有關EV71所引起重癥手足口病防控依然不能放松。因此，一方面需遵照衛生部門防控要求保護易感人群，降低患病率，并按照規程積極配合有效救治活動，以控制重癥率﹑死亡率。同時，應當加快EV71相關機制研究工作，包括EV71致病機制﹑阻斷病毒體內增殖藥物靶點研究﹑相關藥物開發﹑新疫苗開發研究等。