ARID1A在浸潤性乳腺癌中的表達及臨床意義＊

張 郡，夏紅蕾，楊沁惠

（蘭州市婦幼保健院，甘肅 蘭州 730030）

乳腺癌是女性腫瘤中發病率占第一位的腫瘤[1]。近年來，腫瘤全基因組測序發現ARID1A基因在多種腫瘤中存在大量突變[2]，ARID1A基因突變導致的ARIDA亞基缺失會影響SW1/SNF復合物功能的完整性，從而影響下游靶基因的轉錄、DNA復制和修復。浸潤性乳腺癌中ARID1A表達的研究，檢索國內外文獻相關報道較少。本研究中，采用免疫組織化學SP法檢測ARID1A基因在浸潤性乳腺癌組織中的表達情況，統計并分析ARID1A基因在浸潤性乳腺癌、乳腺良性病變及正常乳腺組織中的表達及與乳腺癌患者臨床病理參數間的關系。

1 資料與方法

1.1 標本收集及臨床資料

收集蘭州市婦幼保健院2014年1月—2017年1月病理診斷為乳腺浸潤性癌的病例101例，并取其癌旁正常組織19例，收集診斷為乳腺纖維腺瘤的患者48例，收集納入病例完整的臨床資料及隨訪信息。以上信息獲得患者的知情同意。

1.2 HE染色及免疫組織化學染色檢測

組織經4%的中性甲醛固定，常規石蠟切片、HE染色。免疫組化染色抗體ARID1A購自蘇州百道生物有限公司。免疫組化采用SP法。實驗設置陽性、陰性對照，依據報道，ARID1A因子以細胞核呈棕黃色顆粒為陽性表達，ARID1A陽性的判定以＜5%的陽性細胞為0-+，5%～10%的陽性細胞為++。＞10%的陽性細胞為+++，將++、+++定義為陽性，0-+定義為陰性。經免疫組織化學染色的組織切片由2位病理科副主任醫師對切片獨立評估并獨立評分，而不知道患者特征。最終選取其一致性結果。

1.3 統計學分析

采用SPSS 24.0統計學軟件進行統計分析，使用卡方檢驗，以P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 臨床資料

101例浸潤性乳腺癌患者均為女性，年齡27～84歲，中位年齡52歲，其中浸潤性導管癌98例，內分泌癌1例，粘液癌2例，有脈管侵犯1例，同側乳腺多發病灶4例，雙側乳腺癌1例。

2.2 結果分析

根據ARID1A在乳腺癌組織中的表達情況，將101例乳腺癌患者分為陽性組和陰性組，陽性患者32例，陰性患者69例。

在101例浸潤性乳腺癌中ARID1A陽性表達32例，陽性率為31.68%。對照組中乳腺纖維腺瘤及癌旁正常乳腺組織中ARID1A陽性表達率均較浸潤性乳腺癌組織中增高，分別為43.75%、68.42%，兩者與乳腺癌組比較差異有顯著性（P<0.05）（表1）。

表1 浸潤性乳腺癌組和對照組中ARID1A的表達

在浸潤性乳腺癌患者組織中ARID1A的表達與是否發生淋巴結轉移相關（P＜0.05），且在發生淋巴結轉移的患者中（陽性率18.03%）陽性表達明顯低于無淋巴結轉移的患者（陽性率52.50%），而與患者年齡、組織分級、腫瘤的大小及TNM分期無關（P＞0.05）（表2）。

表2 ARID1A在浸潤性乳腺癌中的表達及與臨床病理特征之間的關系

ARID1A在浸潤性乳腺癌、乳腺纖維腺瘤及癌周 正常乳腺組織中表達均定位于細胞核（見圖1—圖4）。

圖1 ARID1A在乳腺浸潤性導管癌中呈陽性表達

圖2 ARID1A在乳腺浸潤性導管癌中呈陰性表達

圖3 ARID1A在乳腺纖維腺瘤中呈陽性表達

圖4 ARID1A在正常乳腺組織中呈陽性表達

3 討論

ARID1A基因又名BAF250A、SMARCF1或P270，ARID1A基因位于人染色體1P35.3，結構分析以及體外實驗顯示，ARID1A可以以序列非特異性的方式與富含AT的DNA序列結合發揮作用[3]。

ARID1A基因是一種腫瘤抑制基因[4]，是染色質重塑復合物SW1/SNF的核心亞基，在癌細胞中具有較高的突變率[5]。SW1/SNF是一種多亞基的染色質重塑復合物，在DNA轉錄、復制、損傷修復中發揮重要的作用。ARID1A基因可與富含AT的DNA序列非特異性結合，通過蛋白質之間的相互作用介導相關蛋白發揮作用。在DNA復制、重組、修復及轉錄過程中，染色質的包裝及相應DNA分子發生改變，稱為染色質重塑，SW1/SNF是多亞基染色質重塑復合物，依賴ATP水解能量來重新定位核小體，以此來調節基因表達[6]。

以往研究表明，ARID1A的表達與細胞周期有關，其在G0-G1期表達最高，在S期和G2-M期明顯降低，在分裂旺盛的細胞中幾乎完全缺失。P21/WAF可與細胞周期蛋白CDK2/CDK4復合物結合并抑制其活性，從而使細胞周期停滯于G1期，ARID1A可調節P21/WAF1基因的表達[7]。

近年來多項研究顯示，磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K/AKT）信號通路與腫瘤的發生有密切關系，在細胞的增殖、分化、凋亡、代謝等多種細胞功能中發揮重要作用。ARID1A在腫瘤發生中的作用與PI3K信號通路的激活相關[8]。研究發現ARID1A突變常與PI3KCA激活突變和/或PTEN表達缺失共存，這兩者都可導致PI3K/AKT下游信號通路的激活。ARID1A可通過使PI3K/AKT信號通路蛋白的變化、EMT（上皮-間充質轉化）、細胞周期、與原位癌基因P53等相互作用調控細胞的增殖。

近年來，有文獻報道ARID1A在卵巢癌、腦膠質瘤、肝癌、胃癌、乳腺癌中發生突變，但其在乳腺癌中的研究較少。在卵巢癌中，ARID1A通過上調P21和SMAD3基因的表達來抑制腫瘤細胞的增殖，在腦膠質瘤中，ARID1A通過影響PI3K/AKT信號通路來抑制細胞增殖，但在肝癌、胃癌、乳腺癌中的作用機理還需進一步研究。

張倩等[9]通過以慢病毒為載體的RNA干擾技術，發現干擾ARID1A的表達促進了乳腺癌細胞的生長、遷移及侵襲能力。在干擾掉ARID1A后，Akt磷酸化水平升高，P21表達量下降，細胞周期S期上升，G2期下降，過表達ARID1A后，Akt磷酸化水平下降，P21表達上升，S期下降，G2期上升，細胞凋亡比例上升。乳腺癌中ARID1A可能通過調節Akt磷酸化以及細胞周期來調控細胞的增殖。

Zhang等[10]研究了112例浸潤性導管癌中ARID1A的表達，結果顯示，ARID1A mRNA在乳腺癌中的表達低于正常乳腺組織（P＜0.001），且與腫瘤大小、較高的臨床分期有關，發現低ARID1A表達是總體生存率的預測因素，而不是獨立因素。Samartzis等[11]研究，ARID1A敲低后，MCF7乳腺癌細胞對AKT抑制劑MK-2206和perifosine及PI3K抑制劑buparlisib的敏感性顯著增加。Uncel和Diniz[12]在292例乳腺癌標本中檢測到123例存在ARID1A基因表達缺失，且ARID1A缺失與淋巴結轉移之間有顯著性差異（P=0.001）。

本研究結果顯示，ARID1A在浸潤性乳腺癌組織中的陽性表達率低于乳腺纖維腺瘤及癌周正常乳腺組織，且在發生淋巴結轉移的患者中陽性表達明顯低于無淋巴結轉移的患者，這與之前文獻報道的結論有相似之處。提示ARID1A因子的突變或缺失與乳腺癌的發生發展密切相關，進一步提示ARID1A在浸潤性乳腺癌的發生發展中起保護性作用，ARID1A有望成為乳腺良、惡性病變鑒別的分子生物學參考指標之一。