發酵飼料對雛雞生長性能、免疫性能、抗氧化能力及肝功能的影響

徐 翡， 劉 震， 田 勇， 盧永勝， 楊家新，屠炳江， 武洪志， 楊鵬強， 盧志望， 刁新平， 盧立志*

（1.農產品質量安全危害因子與風險防控國家重點實驗室，浙江省農業科學院畜牧獸醫研究所，浙江 杭州 310000；2.東北農業大學動物科學技術學院，黑龍江 哈爾濱 150030；3.江西棲嶺農牧有限公司，江西 贛州 342300；4.湖州動物疫病預防控制中心，浙江 湖州 313002；5.中國熱帶農業科學院熱帶作物品種資源研究所，海南 ?？?571101）

近年來，隨著家禽業集約化、規?；畈l展，諸多問題也逐漸凸顯，在飼料行業全面禁抗和國際貿易摩擦引發飼料原料價格攀升的背景下（王蕾蕾等，2021；Dao等，2021），糧食谷物深加工后剩余的副產物、廢渣等雖然含有豐富的營養成分，卻不能得到充分利用（田波，2013）。因此通過技術研發、科技創新等手段，利用微生物發酵工業邊角料、副產物和廢渣等生產發酵飼料，引起科研人員的關注。研究表明，發酵飼料富含營養成分如碳水化合物、蛋白肽、揮發性脂肪酸、氨基酸、大豆肽等（馮海峰，2020），通過發酵可降低抗原蛋白、胰蛋白酶抑制劑以及致甲狀腺腫素等抗營養物質的含量（李繼彬，2019），發酵飼料不但能夠維持動物腸道健康，調節腸道菌群平衡（胡新旭，2013），而且能提高自身的適口性，增加動物的采食量，進而提高動物生產性能，降低企業生產成本，提高經濟效益。雖然目前對微生物的認知已經非常全面，但不同的原料經過不同微生物、益生菌以及不同的發酵工藝會產生不同比例的營養物質（劉澤等，2021）。本研究以乳酸菌、酵母菌等益生菌發酵豆渣并將其添加到雛雞日糧中，探究發酵飼料對雛雞的作用效果，旨在為發酵飼料在畜禽日糧中的應用提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗設計 選擇1日齡黃羽肉雞雛雞240只，隨機分為2組，每組6個重復，每個重復20只雛雞。對照組飼喂基礎日糧，發酵飼料組飼喂基礎日糧+2%發酵飼料，試驗基礎飼糧為玉米-小麥型，參照NRC（1994）營養需要進行配制。基礎日糧組成及營養水平見表1。雛雞飼養模式為地面平鋪稻殼散養，24 h光照，自由采食、飲水，按照正常免疫程序進行接種，試驗期共22 d。

表1 基礎日糧組成及營養水平（風干基礎）

1.2 發酵飼料的制備 發酵飼料選用價格便宜的豆腐渣，以麩皮和稻殼粉為輔料，添加乳酸菌、酵母菌（活菌數均為2.0×107CFU/g），在常溫下混勻、裝袋、密閉，經控溫發酵3~5 d，最終經過檢測合格后，在基礎日糧中，按2%的比例額外添加。飼料均由盛和集團江西棲嶺農牧有限公司提供。

1.3 樣品的采集 試驗期結束后，禁食12 h，每個重復中隨機抽取一只雛雞，頸動脈采血10 mL，3500 r/min離心20 min，將析出的上清液用移液槍轉移到離心管中，在-80℃的冰箱內保存備用。清水打濕羽毛后，快速打開腹腔，取肝臟、脾臟、法氏囊、胸腺，稱重。

1.4 測定指標及方法

1.4.1 生長性能 試驗期間，每天記錄每個重復雛雞的采食量，并在第1、11、22天空腹稱量體重，用于計算平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）、料肉比（F/G）。

1.4.2 免疫性能 每重復隨機選取1只雛雞，取肝臟、脾臟、法氏囊、胸腺等器官并稱重，計算各器官指數。免疫指標包括：免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）、白細胞介素-1β（IL-1β）、白細胞介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素-4（IL-4）、白細胞介素-10（IL-10）。用酶聯免疫吸附測定。使用華衛德朗DR-200BS酶標分析儀（無錫華衛德朗儀器有限公司）。試劑盒由北京華英生物有限公司提供。

器官指數/%=（器官重量/體重）×100。

1.4.3 抗氧化指標 抗氧化指標包括：超氧化物歧化酶（SOD）、總抗氧能力（T-AOC）、過氧化氫酶（CAT）。用酶聯免疫吸附測定。使用華衛德朗DR-200BS酶標分析儀（無錫華衛德朗儀器有限公司）。試劑盒由北京華英生物有限公司提供。

1.4.4 肝功能 肝功能指標包括：總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、堿性磷酸酶（ALP）。采用比色法。儀器型號為邁瑞BS-420全自動生化儀（深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司）。試劑盒由中生北控股份有限公司提供。

1.4.5 血清其他指標 血清其他指標包括：總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）、尿素（UREA）、尿酸（Ua）、血氨（AN）、游離脂肪酸（NEFA）。采用比色法。儀器型號為邁瑞BS-420全自動生化儀（深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司）。試劑盒由中生北控股份有限公司提供。

1.5 數據統計與分析 采用SPSS 26.0軟件對數據進行分析，首先檢驗數據的方差齊性，服從正態分布的數據再進行單因子方差分析（one-wayANOVA），運用t檢驗進行組間比較，結果用“標準差±標準誤”表示，P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著。

2 結果

2.1 添加發酵飼料對生長性能的影響 由表2可知，與對照組相比，添加發酵飼料后雛雞的ADG在1~11、12~22 d和1~22 d階段分別提高了9.52%、4.5%、6.26%（P>0.05），ADFI在0~11、12~22 d和0~22 d階段分別降低2.11%、0.38%、0.99%（P>0.05），F/G在1~11、12~22 d和1~22 d階段分別降低了10.7%、4.44%、6.56%（P>0.05）。這說明發酵飼料能降低雛雞的料肉比，提高生長性能，但差異不顯著。

表2 發酵飼料對雛雞生長性能的影響

2.2 添加發酵飼料對雛雞免疫性能的影響

2.2.1 對免疫器官的影響 由表3可知，與對照組相比，發酵飼料組的肝臟指數、脾臟指數、胸腺指數提高，其中肝臟指數提高了11.21%，差異極顯著（P<0.01），脾臟指數、胸腺指數分別提高了29.31%、2.38%，但差異不顯著（P>0.05）。

表3 發酵飼料對雛雞免疫器官指數的影響 g/kg

2.2.2 對血清免疫指標的影響 由表4可知，與對照組相比，添加發酵飼料組的血清中免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、以及抗炎因子白細胞介素-4（IL-4）和白細胞介素-10（IL-10）含量極顯著高于對照組 （P<0.01），分別提高了30.1%、26.79%、50.3%和40.7%，免疫球蛋白G（IgG）顯著高于對照組（P<0.05），提高了14.3%；添加發酵飼料組雛雞血清中促炎因子白細胞介素-1β（IL-1β）、白細胞介素-6（IL-6）和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的含量極顯著低于對照組（P<0.01），分別降低了41.1%、50.84%和41.67%。

表4 發酵飼料對雛雞血清免疫指標的影響

2.3 添加發酵飼料對雛雞抗氧化能力的影響由表5可知，發酵飼料組中的抗氧化指標，超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）活性和總抗氧能力（T-AOC）極顯著高于對照組（P<0.01），分別提高78.81%、46.86%、28.95%。

表5 發酵飼料對雛雞抗氧化指標的影響 U/mL

2.4 添加發酵飼料對雛雞肝功能的影響 由表6可知，與對照組相比，發酵飼料組的堿性磷酸酶（ALP）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）含量均降低，分別降低了51.13%、17.02%、21.89%（P<0.05）

表6 發酵飼料對雛雞肝功能的影響

2.5 添加發酵飼料對雛雞血清生化指標的影響由表7可知，與對照組相比，添加發酵飼料組的雛雞血清中總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL）、尿素（UREA）、血氨（AN）含量顯著下降，分別降低26.5%、36.15%、15.63%、26.4%（P<0.05），其中高密度脂蛋白（HDL）、血氨（AN）極顯著低于對照組（P<0.01）；添加發酵飼料組的甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）、尿酸（UA）、游離脂肪酸（NEFA）含量降低10.9%、8.1%、4.59%、9.3%，但差異不顯著（P>0.05）。

表7 發酵飼料對雛雞血清生化指標的影響

3 討論

3.1 發酵飼料對雛雞生長性能的影響 研究表明，發酵飼料中含有多種利于動物生長發育的有益成分（喬艷明，2016），如酶、有機酸、多糖、維生素、粗蛋白質、低分子量肽及總氨基酸等（王佰濤等，2020；吳逸飛，2016），飼料通過發酵還能降低抗營養因子的含量（張秀林等，2017；桑靜超，2014），從而提高飼料的適口性，提高動物機體腸胃對營養物質的分解、消化、吸收和利用。彭蕭等（2020）研究表明，在飼糧中添加發酵飼料，可顯著提高蛋雞產蛋期的產蛋率，有效降低死亡率。孫波等（2021）研究表明，與對照組相比，發酵飼料組40日齡的納雍土雞ADFI、ADG顯著提高，F/D顯著降低。周露等（2019）研究表明，發酵飼料能夠提高育肥期文昌雞的日增重和成活率，降低料肉比，但差異不顯著。本試驗結果分析得出，與對照組相比，添加發酵飼料能夠提高雛雞的ADG，降低ADFI和F/G，但發酵飼料對雛雞ADG、ADFI和F/G等數據指標的改善效果僅表現出良好趨勢，未達到顯著性差異。本研究結果原因：（1）由于8月天氣炎熱潮濕，對雛雞的采食量有一定影響；（2）可能由于雛雞剛出生，其消化系統發育不完善，對營養物質的吸收不完全；（3）由于黃羽肉雞相比別的品種生長速度快，采食量大，白天禁止過多添加飼料，避免積食導致窒息。

3.2 發酵飼料對雛雞免疫性能的影響 動物機體的免疫水平可以通過免疫器官指數來評價（朱孟玲等，2010），在動物機體健康狀態下，免疫器官指數越大，表明機體的免疫水平越高。免疫器官主要包括肝臟、脾臟、法氏囊、胸腺等。肝細胞內含有大量的巨噬細胞，可以吞噬毒素、清除細菌，干細胞還能產生抗體，消滅侵入機體的病原體（侯彥茹等，2021）。脾臟作為中樞免疫器官，是動物機體體液免疫和細胞免疫的中心（張雪等，2021；張凱歌等，2021）。法氏囊是禽類特有的中樞免疫器官，是B細胞誘導、分化、發育的場所（石天虹等，2020）。胸腺屬于中樞免疫器官，可以誘導骨髓的多功能干細胞轉變為T淋巴細胞（張雪等，2021）。目前為止，關于發酵飼料對家禽免疫器官指數的報道很少。李念珍等（2020）研究發現，與地面平養組相比，使用油樟葉渣發酵床能顯著提高肉雞脾臟指數，極顯著提高胸腺指數。徐輝等（2021）研究發現，添加生物發酵飼料對育肥鵝的胸腺指數、脾臟指數和法氏囊指數均無顯著影響。本試驗結果發現，與對照組相比，發酵飼料組肝臟指數極顯著提高，脾臟指數、胸腺指數雖然有提高的趨勢，但差異不顯著。雖然雛雞的免疫系統還處在發育階段，但發酵飼料能夠提高雛雞的免疫性能趨勢已定。

免疫機制主要包括體液免疫和細胞免疫，免疫力是動物抵抗外來病原微生物、細菌、病毒的能力，主要通過免疫指標來體現（Koo等，2018），提高免疫力有助于動物健康生長，對生產能力、經濟效益具有重要意義。血清中IgA、IgG、IgM由免疫器官分泌（Chun等，2021）。抗炎因子IL-4、IL-10是免疫細胞間相互作用的淋巴因子，具有激活并提高免疫細胞的功能（吳雅鋆等，2021）。TNF-α是由單核細胞和巨噬細胞產生的因子，參與分泌調節具有免疫活性，促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α等含量降低，說明動物機體的免疫力增強（范秋麗等，2021）。免疫球蛋白、促炎因子和抗炎因子與動物機體的免疫水平密不可分（翟嘉怡等，2021），李薛強等（2019）研究發現，在臨產母豬日糧中添加復合菌發酵物，與對照組相比，試驗組母豬分娩時血清中IgG、IgM含量均顯著升高。王娟娟等（2011）研究發現，日糧添加發酵飼料可提高動物血液白細胞數量和IgA的含量，本試驗結果與其一致。本試驗數據分析得出，與對照組相比，添加發酵飼料組血清的IgA、IgM含量極顯著提高，IgG含量顯著提高（P<0.05）。魏越波（2020）研究發現，益生菌發酵配合飼料能使蛋雞IL-2、IL-6、TNF-α降低。海藍恩等（2020）研究發現，用10%復合益生菌發酵飼料替代基礎日糧作為試驗組，與對照組相比，仔豬血清中IgG、IgA、補體4（C4）、IL-2、IL-4含量顯著提高。本試驗結果分析發現，與對照組相比，添加發酵飼料組雛雞血清中IgA、IgG、IgM顯著提高；抗炎因子IL-4和IL-10極顯著提高；血清中促炎因子IL-1β、IL-6、TNFα的含量極顯著下降。本試驗結果說明育雛期添加發酵飼料能顯著提高雛雞血清免疫水平。

3.3 發酵飼料對雛雞抗氧化性能的影響 動物機體內的活性氧自由基是健康殺手，在自由基的作用下，蛋白細胞容易纖維化，脂肪細胞易發生過氧化反應，導致動物氧化應激產生負面影響，有時候自由基還能殺死健康的細胞至動物于死地（王時雨等，2017），動物機體內有能清除活性氧自由基的抗氧化系統，能夠維持動物抗氧化水平，如SOD是一種抗氧化金屬酶，T-AOC是衡量各種抗氧化物質和抗氧化酶的綜合指標（丁鵬等，2019），CAT存在于過氧化物體內，是催化過氧化氫分解成氧和水的酶。研究發現，復合乳酸菌發酵飼料可顯著提高超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過氧化物酶活性（劉輝等，2021；李濤等，2014）。本試驗結果表明，添加發酵飼料組與對照組相比，血清中SOD、T-AOC和CAT的含量極顯著提高（P<0.01），表明發酵飼料能提高雛雞的抗氧化應激能力，提高健康水平。

3.4 發酵飼料對雛雞肝功能的影響 肝臟作為動物機體的重要器官，既屬于消化系統，又屬于血液系統，還屬于免疫系統，所以肝功能對動物機體的生長發育有重要意義。本研究發現，發酵飼料能極顯著提高肝臟器官指數，所以繼續探究發酵飼料對肝功能的影響。ALP主要來源于肝臟和膽囊（汪晶晶等，2018），當肝臟和膽囊等組織發生病變和損傷時ALP含量升高，所以ALP越低動物越健康（蘭海恩等，2020；李薛強等，2019），與對照組相比，添加發酵飼料組血清中ALP含量顯著降低。血清中TP在一定程度上反映了動物肝臟的合成和儲備功能（朱孟玲等，2010），TP的含量是ALB和GLB（球蛋白）含量的和，ALB能夠轉運代謝物和營養物質，ALB含量表示肝臟合成蛋白質能力強弱，其含量的降低，表明肝臟中蛋白質的代謝水平降低（馮建等，2016）。與對照組相比，添加發酵飼料組TP、ALB含量顯著降低，說明雛雞對發酵飼料中蛋白質的利用率較高，還表明發酵飼料里的營養成分含量較高，能夠通過直接轉運吸收，可以滿足雛雞生長的營養需要。

3.5 發酵飼料對雛雞血清其他指標的影響 血液具有運輸營養代謝產物、緩沖和維持內環境穩態、防御和保護等功能，因此血液中血清指標可以反映營養物質消化吸收與健康狀況（Chemistry，2019）。脂類以TC、TG、NEFA、HDL、LDL等的形式在機體內進行一系列的消化分解、代謝吸收的生理過程（胡毅等，2018），血清中脂類含量的高低與脂肪分解能力、脂肪沉積速率和體脂轉化有關，含量越高，分解能力越弱（Robert等，2004）。TC含量下降表明，發酵飼料對動物機體的脂類代謝調節具有重要作用。TG存在于脂肪中，可反映脂肪合成強度，當機體內氨基酸含量過高無法合成蛋白質時，氨基酸就會轉化成TG（辛小召，2014），TG含量下降說明機體氨基酸轉化成蛋白質的水平較高。NEFA濃度與脂類、糖類代謝和內分泌有關，NEFA升高容易引發高脂血癥，影響胰島功能誘發糖尿病。HDL和LDL主要運輸血液中的膽固醇，HDL把機體各個部位產生的膽固醇運到肝臟進行代謝，LDL把肝臟中的膽固醇運送到全身各個部位，當LDL含量升高時，攜帶的膽固醇容易堆積在動脈引起動脈硬化，本文LDL又被稱為“壞的脂類”。本試驗結果發現，與對照組相比，添加發酵飼料組雛雞血清中TC、TG、NEFA、HDL、LDL等脂類含量都有下降趨勢，其中TC顯著性下降，HDL極顯著下降，這說明發酵飼料對雛雞的脂類代謝具有促進作用，能夠保護肝臟，有利于雛雞的生長發育。

血清中AN、UREA、UA等含量降低表明動物機體的健康水平升高（安亞南等，2018）。本試驗中，對照組相比，添加發酵飼料組血清中AN含量極顯著下降，UREA含量顯著下降，UA含量下降，差異不顯著，說明發酵飼料中含有豐富的氨基酸、多肽、消化酶等利于氨基酸吸收的營養物質，提高了氮的吸收和蛋白質的沉積率，有利于提高生長性能，促進蛋白質合成與沉積（胡新旭等，2013）。

4 結論

本試驗條件下，雛雞日糧中添加發酵飼料能夠提高免疫性能，增強抗氧化能力，促進營養物質消化吸收，改善健康水平。