杜仲葉化學活性成分提取工藝研究

張前程

（河南科技職業大學，河南 周口 466000）

杜仲是我國的一種瀕危珍稀的名貴中藥材，最早能追溯到公元二世紀的《神農本草經》[1-2]，到目前為止已有兩千多年的入藥歷史。在傳統上主要是以樹皮入藥，但是由于資源相對匱乏，過度提取樹皮也會導致杜仲樹死亡，生產成本較高，種種因素限制了使用。然而現代研究發現，杜仲葉和杜仲皮的藥用功效基本相同，有效成分也大致相似[3-4]。由于杜仲葉的產量非常多，適量的采摘對樹生長影響不大，所以近年來杜仲葉由于其廣闊的應用前景和確切的臨床療效成為我國中醫藥發展史上廣受關注的藥物之一[5-6]。

近些年來，國內外對杜仲葉中的各種化學成分展開了大量研究[7]。結果顯示，杜仲葉中含有許多活性成分，例如環烯醚萜類、苯丙素類、木脂素類和黃酮類，這些活性成分是杜仲在臨床上產生藥理活性的物質基礎[8-10]。現代藥理藥效學研究也進一步證實了，杜仲葉具有抗病毒、抗疲勞、抗炎、增強免疫力、調節血糖、降脂、降壓等藥理作用[11-12]。杜仲葉中富含大量的杜仲膠，是可再生天然資源，減少了對于進口橡膠的依賴，現代被廣泛應用在航空航天、船舶、化工等我國經濟的各個領域[13]。另外，國內外很多研究也發現，杜仲葉除了上述臨床藥理作用外，還可以作為動物飼料的添加劑、天然的降血壓藥、保健品、杜仲膠等[14-15]。杜仲葉資源較為豐富，并且有比較高的藥用經濟價值，因此對杜仲葉展開全面的研究在臨床上有很重要的意義[16-17]。本文主要對杜仲葉中化學活性成分的提取工藝展開研究，以期篩選出最佳的提取方法，為活性成分在工業上的批量生產提供理論依據。

1 實驗部分

1.1 實驗儀器

實驗所用主要儀器如表1所示。

表1 實驗所用主要儀器

1.2 實驗材料

杜仲葉均采購于張仲景大藥房；桃葉珊瑚苷由實驗室純化，純度＞92%；綠原酸對照品、京尼平苷酸對照品由中國食品藥品檢定研究院提供；車葉草苷由上海源葉生物科技有限公司提供；乙醇（分析純），甲醇（分析純），磷酸。

2 杜仲葉中4 種主要活性成分提取工藝單因素水平篩選

2.1 乙醇體積分數對活性成分含量的影響

分別取5 批經過低溫烘干后的杜仲葉各50 g，切碎后放入閃式提取器內，再加入10 倍量的不同體積分數（0、30%、50%、70%、90%）的乙醇溶液置于閃式提取器（JHBE-50A 型）中，然后進行閃式提取，電壓為110 V。每5 min 提取一次，其中儀器每隔1 min 暫停30 s，提取后的濾液用藥用紗布粗濾。重復以上操作3 次，把所有濾液合并，精濾后即得供試品溶液。

按以下色譜條件進行含量測定：以甲醇為流動相A，以磷酸（0.5%）水溶液為流動相B；流速為1.0 mL·min-1。檢測波長：0～15 min 時為206 nm，15～55 min 時為236 nm，55～120 min 時為360 nm。梯度洗脫：5%→10% A，95%→90% B，0～30 min；10%→25% A，90%→75% B，30～70 min。計算杜仲葉活性成分提取率，結果如表2所示。

表2 乙醇體積分數對活性成分含量的影響

由表2、圖1可以看出，活性成分含量受乙醇體積分數的影響較大。乙醇體積分數在0～50%范圍內時，車葉草苷最大含量在0.5%左右，綠原酸最大含量在1.75%左右，京尼平苷酸含量在0.8%左右，桃葉珊瑚苷含量在0.9%左右；乙醇體積分數在50%～70%范圍內時，4 種主要活性成分含量明顯呈現增大趨勢，在乙醇體積分數為70%時，呈現最大值；乙醇體積分數在70%～90%范圍內時，活性成分含量明顯呈現下降趨勢。由此可以得出結論，杜仲葉中4 種主要活性成分的最適提取溶劑的體積分數為70%。

2.2 提取時間對活性成分含量的影響

分別精密稱取5 批經過低溫烘干后的杜仲葉各50 g，依次放入閃式提取器內，再按1∶10 的比例加入70%乙醇溶液到閃式提取器中，進行閃式提取，設置電壓為110 V。分別設置提取時間為1、3、5、7、9 min，按照上述操作進行提取，提取后的溶液迅速濾過，按上述色譜條件進行測定。計算活性成分的提取率，實驗結果如表3、圖2所示。

表3 提取時間對活性成分含量的影響

從表3、圖2可知，杜仲葉中4 種主要活性成分含量和提取時間呈正相關趨勢。在1～5 min 時，杜仲葉中活性成分的提取率隨著提取時間的增長，含量明顯呈現上升趨勢；當提取時間超過5 min 時，可以看出活性成分的含量不再增加。綜上所述，杜仲葉中4 種主要活性成分的最適合提取時間為5 min，說明閃式提取器具有快速便捷的優點。

2.3 閃提電壓對活性成分含量的影響

用精密天平稱取5 批處理后的杜仲葉原料各50 g，隨后放入到閃式提取器中，分別把杜仲葉原料10 倍量的70%乙醇溶液加入到閃式提取器內，設置提取時間為5 min。各按照90、100、110、120、130 V 的電壓進行閃式提取。提取后的原液過濾備用，并按上文方法及色譜條件進行含量測定，計算的結果如表4、圖3所述。

從表4、圖3可以看出，閃式提取器的電壓對杜仲葉中活性成分的含量有影響。當閃式提取器的電壓在90～110 V 之間時，杜仲葉中化學成分提取率隨著電壓的增大而呈現升高趨勢，在110 V 時出現最大值。當閃式提取器的電壓在110 V 以后時，活性成分含量基本保持不變或出現降低的趨勢。因此，在杜仲葉中活性成分提取時應選擇110 V 作為最適電壓。

表4 提取電壓對活性成分含量的影響

3 結 論

本文主要考察了提取杜仲葉中主要化學成分含量的影響因素，對提取溶劑乙醇的體積分數、閃式提取器的電壓以及提取的時間分別進行單因素試驗考察，確定各因素的最佳參數。本實驗采用梯度洗脫并變換波長的HPLC 法對4 種有效成分（京尼平苷酸、綠原酸、桃葉珊瑚苷、車葉草苷）的含量同時進行測定，對比了不同提取工藝對4 種主要活性成分含量的影響，優化了提取工藝路線，確定了最適的提取條件：提取溶劑為70%的乙醇溶液，提取電壓為110 V，提取時間為5 min。