吉林烏頭和龍船烏泡合劑對正常大鼠的痛覺調(diào)節(jié)作用

王雪純，付立波，呂 航，彭佳琪,李佳林，朱妮娜

(長春師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，吉林 長春 130032)

根據(jù)國際疼痛學(xué)會(IASP)的定義，疼痛是一種由于實(shí)際的或是潛在的組織損傷導(dǎo)致的不好的感覺和情緒情感體驗(yàn)，或者是與此類似的經(jīng)歷[1]。目前一般通過藥物來達(dá)到鎮(zhèn)痛效果，阿片類藥物的作用效果強(qiáng)，但具有許多不良反應(yīng)，有極強(qiáng)的成癮性，可能會對機(jī)體造成不可逆的傷害[2]，因此尋找無依賴性的鎮(zhèn)痛藥物迫在眉睫。而中草藥的鎮(zhèn)痛作用歷史悠長，許多中藥材能起到一定的鎮(zhèn)痛作用且副作用較小。

龍船烏泡又稱過江龍，具有舒筋活絡(luò)，治療跌打損傷及筋骨疼痛的功效[3]；吉林烏頭同樣具有散寒止痛，祛風(fēng)除濕的功效，在民間常用來治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、牙痛、神經(jīng)痛、心腹冷痛等癥[4]。研究表明，吉林烏頭主要成分有生物堿類、黃酮類、多糖等[5]。但至今尚未發(fā)現(xiàn)有關(guān)于吉林烏頭和龍船烏泡對痛覺調(diào)節(jié)的研究。因此本實(shí)驗(yàn)采用灌胃及行為學(xué)測痛等方法，探討吉林烏頭和龍船烏泡對痛覺的作用，以期能對臨床鎮(zhèn)痛藥物的開發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動物與藥品

使用雄性Wistar大鼠6只，長春億斯實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司提供。購買后6只大鼠單獨(dú)喂養(yǎng)，保證大鼠自由進(jìn)水進(jìn)食，室內(nèi)溫度保持適宜和穩(wěn)定，維持實(shí)驗(yàn)室的安靜，確保實(shí)驗(yàn)大鼠穩(wěn)定的生活條件。

吉林烏頭，龍船烏泡購買于恩春堂大藥店；生理鹽水產(chǎn)自遼寧明康制藥有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

主要實(shí)驗(yàn)儀器有灌胃針(深圳瑞沃德公司)，YLS-6B智能熱板儀(上海曼普生物公司)；YLS-3E電子壓痛儀(意大利UGO)。

2 方法

2.1 水煮液母液及不同質(zhì)量濃度溶液的制備

稱取龍船烏泡和吉林烏頭各10 g，分別放在陶瓷缸中，先將吉林烏頭煎15 min，然后將吉林烏頭和龍船烏泡分別熬煮3次，取水煮液的母液，再用母液分別配制成5、10、20 mg/mL的合劑。

2.2 行為痛覺測試

行為痛覺測試包括熱板測試和壓板測試。在實(shí)驗(yàn)之前對正常雄性大鼠進(jìn)行一周的熱板和壓板測試訓(xùn)練，6只正常雄性大鼠都進(jìn)行相同訓(xùn)練，每天3 輪，每輪5 次，以此減少大鼠的應(yīng)激性和實(shí)驗(yàn)誤差。經(jīng)過7天訓(xùn)練后，第8天注射生理鹽水作為對照，之后用不同質(zhì)量濃度的混合液進(jìn)行灌胃。在每次灌胃之前需要先測3次基礎(chǔ)HWL，作為基礎(chǔ)值。灌胃之后在第5、10、15、20、30、45、60 min進(jìn)行行為學(xué)測痛。

2.3 數(shù)據(jù)處理

收集整理數(shù)據(jù)，用實(shí)驗(yàn)前測得的3次HWL值的平均值作為基礎(chǔ)值，實(shí)驗(yàn)中測得的結(jié)果與其比較，計(jì)算HWL的變化百分比。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以“均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差”(x±s)的形式表示，用SPSS 22.0軟件分析數(shù)據(jù)，采用單因素方差分析方法進(jìn)行組間比較和分析。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

生理鹽水與不同質(zhì)量濃度(5、10、20 mg/mL)合劑灌胃后大鼠 HWL的變化百分比見表 1、表 2和表3。

表1 灌胃5 mg/mL合劑大鼠的HWL的影響

由表1可知，與生理鹽水(對照組)相比，5 mg/mL合劑灌胃大鼠的左爪熱刺激HWL具有顯著差異(P<0.05)，右爪熱刺激及機(jī)械刺激HWL無差異(P>0.05)；大鼠右爪機(jī)械刺激HWL顯著差異(P<0.05)。

表2 灌胃10 mg/mL合劑大鼠的HWL的影響

由表2可知，與生理鹽水(對照組)相比，10 mg/mL合劑灌胃大鼠的左爪熱刺激HWL具有顯著差異(P<0.05)，右爪熱刺激HWL具有極顯著差異(P<0.01)；大鼠左爪機(jī)械刺激HWL具有極顯著差異(P<0.01)，右爪機(jī)械刺激HWL具有顯著差異(P<0.05)。

表3 灌胃20 mg/mL合劑對大鼠HWL的影響

由表3可知，與生理鹽水(對照組)相比，20 mg/mL合劑灌胃大鼠左爪熱刺激HWL具有顯著差異(P<0.05)，右爪熱刺激HWL具有極顯著差異(P<0.01)；大鼠左爪和右爪機(jī)械刺激HWL均具有顯著差異(P<0.05)。

4 討論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與灌生理鹽水相比，吉林烏頭和龍船烏泡混合水煮液灌胃后，大鼠HWL明顯增加，因此合劑對大鼠確實(shí)起到了鎮(zhèn)痛作用，且鎮(zhèn)痛效果在15 min左右最為明顯，具有時間上的規(guī)律性。本實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，對大鼠灌胃5、10、20 mg/mL 混合水煮液的作用效果不同，大鼠 HWL 也有顯著差異。通過觀察數(shù)據(jù)可以得出，隨著混合水煮液質(zhì)量濃度的逐漸增加，大鼠HWL 也逐漸增加，說明吉林烏頭和龍船烏泡合劑對正常大鼠鎮(zhèn)痛作用具有劑量依賴性。

許多烏頭類中藥材例如川烏以及附子等同樣具有一定程度的鎮(zhèn)痛功能，能夠有效緩解疼痛，陳紹斌[6]用烏頭桂枝散采用熱敷痛點(diǎn)的方法，治療患者坐骨神經(jīng)痛，發(fā)現(xiàn)效果良好。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，烏頭類藥材中的烏頭堿、草烏甲素[7]、粗莖烏頭堿A等生物堿有良好鎮(zhèn)痛作用而且不會具有成癮性[8]。另外有動物實(shí)驗(yàn)[9]表明，烏頭堿和次烏頭堿能夠明顯減少足腫脹大鼠模型的抽搐次數(shù)而且能減輕疼痛，其鎮(zhèn)痛機(jī)制與中樞神經(jīng)細(xì)胞膜Na+通道開放密切相關(guān)。可能由于吉林烏頭含有烏頭堿等多種生物堿，能對正常大鼠起到一定的鎮(zhèn)痛作用。中藥復(fù)方還可以通過調(diào)控5-羥色胺(5-HT)含量及其受體的表達(dá)等多種途徑發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用[10]。而龍船烏泡的相關(guān)研究較少，與鎮(zhèn)痛作用相關(guān)的有效成分及鎮(zhèn)痛調(diào)控途徑仍需進(jìn)一步探究。本實(shí)驗(yàn)表明吉林烏頭和龍船烏泡合劑具有一定的鎮(zhèn)痛作用，對鎮(zhèn)痛藥物的開發(fā)和研究提供初步理論基礎(chǔ)。