15%調環酸鈣·烯效唑懸浮劑高效液相色譜分析

2022-11-10 08:09:12王鵬思牛洺鑫宋霜雨張宇鑄張繼偉馮文英

世界農藥 2022年10期

范婭，王鵬思，牛洺鑫，宋霜雨，張宇鑄，張繼偉，馮文英，張博

(中化化工科學技術研究總院有限公司，北京 100083)

調環酸鈣(prohexadione calcium)和烯效唑(uniconazole)作為植物生長調節劑，可以抑制植物營養生長，促進植物光合作用，顯著提高作物產量[1]。調環酸鈣的分析方法主要采用高效液相色譜法，鄭先福、李巖等分別報道了調環酸鈣原藥和5%調環酸鈣泡騰片劑法分析方法[2-3]。烯效唑的分析方法比較常見的有液相色譜法和氣相色譜法，丁明偉等對2種方法進行了對比[4]。調環酸鈣在水中的溶解度為174 mg/L (20 ℃)，微溶于其他有機溶劑，而烯效唑在水中的溶解度為8.41 mg/L (25 ℃)，甲醇中溶解度為88 g/kg (25 ℃)，溶于丙酮、乙酸乙酯等多種有機溶劑[5]。基于兩者的理化性質差異，為了讓2者都充分溶解且有響應，調環酸鈣和烯效唑的復配制劑多數采用逐項檢測各個有效成分含量的方法，其檢測效率較低。有關2種活性組分一次性分離檢測方法尚未見報道。基于此，本文采用高效液相色譜法開展了同時分離檢測15%調環酸鈣·烯效唑懸浮劑中有效成分的方法研究，以期為調環酸鈣和烯效唑復配農藥產品質量控制提供技術支撐。

1 材料與方法

1.1 試劑

調環酸鈣標樣(質量分數94.5%，山東中科睿譜技術有限公司)；烯效唑標樣(質量分數99.3%，上海市農藥研究所)；15%調環酸鈣·烯效唑懸浮劑(中化化工科學技術研究總院有限公司)；蒸餾水(廣州屈臣氏食品飲料有限公司)；甲醇，色譜純(賽默飛世爾科技有限公司)；磷酸，分析純(上海阿拉丁生化科技股份有限公司)；溶液A為甲醇-0.3%磷酸水溶液(60∶40，體積比)。

1.2 儀器

LC-20型高效液相色譜儀配有DAD檢測器(日本島津公司)；微孔濾膜(孔徑約0.45 μm)(天津市津騰實驗設備有限公司)；電子天平(ME204E/02、MS-105) (梅特勒托利多科技有限公司)；VGT-1730QT型小型超聲波清洗器(廣東固特超聲股份有限公司)。

1.3 色譜操作條件

色譜柱為Inert Sustain AQ-C18色譜柱(4.6 mm× 150 mm，5 μm)，流動相為甲醇-0.3%磷酸溶液，采用梯度洗脫程序：甲醇-0.3%磷酸溶液(55∶45，體積比)保持8.0 min，8.1～18.0 min 甲醇-0.3%磷酸溶液(80∶20，體積比)，18.1～26 min甲醇-0.3%磷酸溶液(55∶45，體積比)。柱溫：30 ℃；流速：1.0 mL/min；檢測波長：260 nm；進樣體積：5.0 μL。在上述色譜條件下，調環酸鈣和烯效唑的保留時間分別約為5.1、15.9 min。混合標樣及樣品的典型高效液相色譜圖見圖1和圖2。

1.4 測定步驟

1.4.1 標樣溶液的配制

在同一100 mL容量瓶中，加入0.05 g調環酸鈣標樣和0.10 g烯效唑標樣(均精確至0.000 1 g)，用溶液A溶解，超聲，冷卻后定容，搖勻，過濾，備用。

1.4.2 試樣溶液的配制

在100 mL容量瓶中稱取約1.0 g (精確至0.000 1 g)試樣，用溶液A稀釋至刻度，在超聲波中超聲振蕩5 min，取出，恢復至室溫，過濾，備用。

1.4.3 測定

在1.3節色譜條件下，待儀器穩定后，連續進數針標樣溶液并計算，直至相鄰2針調環酸鈣(或烯效唑)的峰面積相對變化小于1.5%后，方可進樣，進樣順序按照標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液進行。

1.4.4 計算

將2針試樣溶液中調環酸鈣(或烯效唑)峰面積以及其前后2針標樣溶液中調環酸鈣(或烯效唑)峰面積分別計算平均值。試樣中調環酸鈣(或烯效唑)的質量分數ω1(%)按下式計算：

式中：A2為試樣溶液中調環酸鈣(或烯效唑)面積的平均值；m1為調環酸鈣(或烯效唑)標樣的質量，g；ω為標樣中調環酸鈣(或烯效唑)的含量，%；A1為標樣溶液中調環酸鈣(或烯效唑)峰面積的平均值；m2為試樣的質量，g。

2 結果與討論

2.1 檢測波長的選擇

采用島津LC-20自帶的DAD檢測器，在190～ 400 nm的波長范圍內進行紫外掃描，得到調環酸鈣和烯效唑的紫外吸收光譜圖(圖3)。考慮溶劑和雜質的干擾，檢測波長選定為260 nm。

2.2 樣品溶劑的選擇

調環酸鈣易溶于水，微溶于有機溶劑；而烯效唑則相反。依據兩者理化性質，樣品在配制過程中溶劑使用甲醇和磷酸水的混合溶液。經過多次調整甲醇和磷酸水溶液的配比，選定溶劑為甲醇∶0.3%磷酸水溶液=60∶40 (體積比)。

2.3 流動相的選擇

采用Inert Sustain AQ-C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)進行分析。依據調環酸鈣和烯效唑的理化性質，采用甲醇-0.3%磷酸水體系和乙腈-0.3%磷酸水體系作為流動相。在等度洗脫條件下，篩選不同配比的流動相進行試驗，當流動相中有機相比例低時，采集時間過長；而有機相比例高時，樣品中目標峰又無法與雜質峰分離，因此采用梯度洗脫程序。而甲醇成本相對較低，故選擇甲醇-0.3%磷酸水體系作為流動相。經多次調整比例及采集時間，選擇1.3節所示梯度洗脫程序，流速為1.0 mL/min。此條件下，調環酸鈣和烯效唑均能較好分離，基線平穩，峰形尖銳且對稱，保留時間適當。

2.4 方法的線性相關性測定

在1.3節色譜條件下，按1.4.1節中方法配制多個不同質量濃度的標樣溶液進行測定，以調環酸鈣(烯效唑)濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標作圖(圖4、圖5)，分別得到調環酸鈣和烯效唑線性回歸方程：調環酸鈣，y=8 741.7x+ 18 709，相關系數R2為0.999 7；烯效唑，y=13 273x+ 433 292，相關系數R2為0.999 1，說明兩者線性關系均較為良好。

2.5 方法的精密度測定

在1.3節色譜條件下，從同一個15%調環酸鈣·烯效唑懸浮劑試樣中稱取5個平行試樣，進行分析測試，計算調環酸鈣和烯效唑的標準偏差和變異系數，試驗結果見表1。可見，調環酸鈣的標準偏差為0.013%、變異系數為0.25%，烯效唑的標準偏差為0.011%、變異系數為0.11%，說明該方法的精密度高，重現性良好，可滿足該復配產品的分析要求。