臍血PCT、單核細胞表面髓系細胞觸發受體、脂多糖受體聯合胃液細菌培養在診斷早產兒早發性感染中的價值分析

吳琦梁，王斌，陳欣欣，歐陽學軍

早發性感染是指出生72 h 內發生的感染，早產兒早發性感染發生率約占活產兒的1%，具有病情危重、進展迅速、病死率高等特點，早期診斷并選取科學有效的治療方案是降低病死率的關鍵［1-2］。目前臨床尚無理想的診斷方案，胃液細菌培養、降鈣素原（procalcitonin，PCT）檢測是診斷早發性感染的常用方式，但均存在一定假陽性、假陰性，影響診斷結果準確性。臍血是新生兒血液循環的一部分，可能與外周血相關生化指標檢測早發性感染具有相似價值，單核細胞表面髓系細胞觸發受體（MONO-TREM1）、脂多糖受體（MONO-CD14）在早發性感染患兒中異常表達［3］。由于目前臨床尚無臍血PCT、MONO-TREM1、MONO-CD14 水平聯合胃液細菌培養診斷早產兒早發性感染的研究報道，本研究以早發性感染早產兒35 例及同期未發生早發性感染早產兒70 例為研究對象，首次分析四者聯合的診斷價值，為臨床診療提供指導。報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性選取2018 年1 月至2021 年1 月南方醫科大學珠江醫院早發性感染早產兒35 例為觀察組，其中消化道感染13 例，呼吸道感染7 例、泌尿道感染9 例、敗血癥6 例。以1∶2 配對原則選取同期未發生早發性感染早產兒70 例為對照組。2 組孕周均＜37 周，觀察組出生72 h 內確診為感染，符合以下診斷標準中的（1），且同時符合（2）、（3）、（4）項中的任一項：（1）有以下臨床表現：體溫波動明顯或發熱、皮膚發花或末梢循環不良、皮疹、吃奶減少、嗜睡、反應差、少動、腹脹、黃疸加重、心率增快、肝脾增大等；（2）血培養陽性；（3）腦脊液培養、尿培養、便培養、外周分泌物培養或胸片檢查顯示有肺炎等；（4）各項培養陰性，但至少有以下指標之一者：外周血白細胞計數（white blood cell count，WBC）＞30×109/L或＜6×109/L，血小板計數（platelet count，PLT）＜100×109/L，末梢血未成熟中性粒細胞與中性粒細胞總數比值（I/T）＞0.16，C 反應蛋白（c-reaction protein，CRP）＞8 mg/L。對照組出生72 h 內未發生感染。一般資料見表1。

表1 觀察組與對照組一般資料比較

1.2 方法

1.2.1 胃液細菌培養 早產兒出生1 h 內在喂水、進食、給藥前通過無菌操作放置胃管，抽取胃液2 ml，培養基由北京北納創聯生物技術研究院提供，35 ℃下培養48 h 后觀察生長情況，采用MODERNWATER 微生物分析儀按照《全國臨床檢驗操作規程》［4］要求分離鑒定菌株。

1.2.2 臍血PCT、MONO-TREM1、MONO-CD14 水平檢測 早產兒出生后臍周常規消毒，10 min 內在臍帶端抽取臍血4 ml，離心，取血清，均分為2 份，其中一份采用美國貝克曼庫爾特AU5800 型全自動生化分析儀及配套試劑盒以電化學發光法檢測PCT 水平，另一份采用美國BD FACSCantoⅡ型流式細胞儀以雙抗體夾心酶聯免疫吸附法測定MONO-TREM1、MONO-CD14平均熒光強度（mean fluorescence intensity，MFI）比值。

1.3 觀察指標

對比2 組臍血PCT、MONO-TREM1、MONO-CD14；Logistic 回歸方程分析臍血PCT、MONO-TREM1、MONO-CD14 與早產兒早發性感染的關系；分析胃液培養結果；臍血PCT、MONO-TREM1、MONO-CD14、胃液細菌培養單獨及聯合診斷早產兒早發性感染的結果。PCT≥0.5 μg/L 為陽性，MONOTREM1≥8.61 MFI 為陽性，MONO-CD14≤130.20 MFI 為陽性，聯合診斷均為陽性則判斷為陽性。

1.4 統計學處理

采用SPSS21.0 統計分析軟件分析所得數據，符合正態分布的計量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗；計數資料以百分比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗，Logistic 回歸方程分析變量間關系。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 臍血PCT、MONO-TREM1、MONO-CD14 水平比較

觀察組臍血PCT、MONO-TREM1 水平高于對照組，MONO-CD14 水平低于對照組（P＜0.05）。見表2。

表2 觀察組與對照組臍血PCT、MONO-TREM1、MONO-CD14 比較（± s）

表2 觀察組與對照組臍血PCT、MONO-TREM1、MONO-CD14 比較（± s）

注：PCT 為降鈣素原，MONO-TREM1 為單核細胞表面髓系細胞觸發受體，MONO-CD14 為脂多糖受體，MFI 為平均熒光強度

指標PCT（μg/L）MONO-TREM1（MFI）MONO-CD14（MFI）觀察組（n=35）1.59±0.25 10.10±1.08 126.49±62.81對照組（n=70）0.34±0.12 7.36±1.12 178.06±69.34 t/χ2 值34.701 11.957 3.704 P 值＜0.001＜0.001＜0.001

2.2 早產兒早發性感染的相關分析

以是否發生早發性感染作為因變量（賦值：發生=1，未發生=0），以PCT、MONO-TREM1、MONO-CD14（賦值：＜均值=1，≥均值=2）作為自變量，進行多因素Logistic 回歸方程分析，結果顯示，校正妊娠期感染、羊水胎糞污染、胎膜早破等混雜因素后，PCT、MONO-TREM1、MONO-CD14 仍與早產兒早發性感染有關（P＜0.05）。見表3。

表3 早產兒早發性感染相關因素分析

2.3 胃液培養結果比較

105 例早產兒經胃液培養檢出陽性38 例，38 株病原菌中大腸埃希菌14 株（36.84%），凝固酶陰性葡萄球菌9 株（23.68%），金黃色葡萄球菌7 株（18.42%），B 族鏈球菌6 株（15.79%），其他2 株（5.26%）。觀察組胃液培養陽性率65.71%（23/35）高于對照組胃液培養陽性率21.43%（15/70），差異有統計學意義（χ2=19.816，P＜0.001）。見表4。

表4 觀察組與對照組胃液培養結果比較［例（n%）］

2.4 診斷結果

臍血PCT、MONO-TREM1、MONO-CD14、胃液細菌培養聯合診斷早產兒早發性感染特異度（91.43%）高于各指標單獨診斷結果，誤診率（8.57%）低于各指標單獨診斷結果（P＜0.05）。見表5、6。

表6 單獨診斷與聯合診斷結果比較（%）

3 討論

近年來隨著醫療技術的發展及醫療環境優化，國內新生兒感染發病率有所減少，但仍是引起新生兒病死的重要因素［5-6］。而早產兒由于機體防御能力較差，加之各種侵入性操作，致使早發性感染風險增加，但其臨床表現隱匿，因此探究更為科學、高效的診斷方案尤為重要。

正常情況下，早產兒胃內是無菌狀態，但出現胎膜早破、羊水污染或宮內感染時，細菌可于胃內定植并大量繁殖，此后可因食管反流而被吸入呼吸道內引發呼吸系統感染，部分細菌會透過胃黏膜屏障進入血液系統，引發腸源性感染［7］。因此，早產兒胃液培養越來越受到臨床醫師重視，其可明確顯示胎兒出生前羊膜腔內環境及出生后胃內情況，且具有無創性，家長易于接受。本研究胃液培養結果顯示，105 例早產兒經胃液培養檢出陽性38 例，38 株病原菌，以大腸埃希菌（36.84%）、凝固酶陰性葡萄球菌（23.68%）為主，且觀察組胃液培養陽性率（65.71%）高于對照組（21.43%），表明早發性感染患兒胃內細菌定植率更顯著。但胃液培養結果僅可直觀顯示細菌定植情況，但定植細菌可能不引起感染，導致出現假陽性。因此對于胃液培養無法準確診斷的早產兒，建議聯合其他檢測指標進一步確診。

PCT 是診斷細菌性感染的常用標志物，在不同感染性疾病中的診斷價值已在國內外多項研究中得到證實［8-12］。PCT在新生兒出生0～6 h 時一般＜2 ng/mL，18～30 h 內達到生理性高峰（正常情況下＜21 ng/mL）。本研究抽取臍血檢測PCT水平，不僅能快速獲得血標本，避免出生后生理性增高，還可避免因抽血操作對患兒造成的痛苦。但早產兒若出現圍生期低氧血癥、羊水污染、宮內窘迫，或母親伴有子癇前期、妊娠期糖尿病等因素均會導致臍血PCT 水平異常升高，同時臍血PCT 水平會受胎齡大小影響［13-14］。故對于出現上述影響因素者需進一步采用其他方案確診。TREM 是免疫球蛋白超家族成員，TREM1 是其激活受體之一，在MONO 等髓系細胞中表達，可為蛋白酪氨酸激酶提供對接點，通過細胞外信號調節激酶重新排列肌動蛋白細胞骨架和激活轉錄因子，繼而促進促炎細胞因子表達［15-16］。CD14 是脂多糖（LPS）受體表面抗原，屬于細胞表面糖蛋白家族成員之一，能識別并結合LPS 誘導細胞酪氨酸磷酸化，參與機體免疫、防御等一系列生物學過程［17-18］。相關研究表明，CD14 通過識別革蘭陰性桿菌產生的內毒素，在膿毒癥的發病過程中發揮關鍵作用［19］。早產兒早發性感染是多種因素作用的結果，本研究發現妊娠期感染、胎膜早破、羊水胎糞污染均可能引發早發性感染，進一步校正混雜因素后發現，PCT、MONO-TREM1、MONO-CD14 仍與早產兒早發性感染有關（P＜0.05），可作為臨床診斷的客觀指標。為進一步提高診斷效果，本研究嘗試將臍血PCT、MONO-TREM1、MONO-CD14 與胃液細菌培養聯合，發現四者聯合診斷早產兒早發性感染特異度可提高至91.43%，誤診率降至8.57%，對臨床診治具有重要價值。

綜上所述，早產兒臍血PCT、MONO-TREM1、MONOCD14 異常表達可能參與早發性感染的發病，對于胃液細菌培養陽性但臨床表現不明顯的早產兒，可結合臍血PCT、MONO-TREM1、MONO-CD14 檢測水平進行判斷，以提高診斷效能，指導臨床合理應用抗生素。本研究的不足之處在于，未明確臍血PCT、MONO-TREM1、MONO-CD14 與早產兒感染范圍、感染嚴重程度的關系，可作為今后研究方向。