不同肝損傷程度慢性乙型肝炎肝硬化患者血清Nrf2、HO-1水平的表達(dá)分析

陳繼德 何瑛 王鵬森 李健 馮華國(guó)

肝損傷是影響慢性乙型肝炎肝硬化預(yù)后的重要因素之一。研究表明，慢性乙型肝炎肝硬化患者的肝損傷是可逆的，早期分析慢性乙型肝炎肝硬化肝損傷程度，并采取有效的治療方案對(duì)改善患者的預(yù)后有積極意義[1]。氧化應(yīng)激及炎癥是誘發(fā)各類肝臟疾病的重要機(jī)制[2]。作為細(xì)胞抵御氧化應(yīng)激的重要轉(zhuǎn)錄因子，核因子E2相關(guān)因子2(Nuclear factor E2 related factor 2, Nrf2)可在活性氧或親電試劑的刺激下進(jìn)入細(xì)胞核，與抗氧化反應(yīng)原件相互作用，發(fā)揮保護(hù)細(xì)胞的作用[3]。同時(shí)，Nrf2是參與肝臟細(xì)胞抗氧化應(yīng)答反應(yīng)的核心途徑，與肝臟損傷的發(fā)生密切相關(guān)[4]。此外，作為催化膽紅素轉(zhuǎn)化為膽綠素的限速酶，血紅素氧合酶1(Heme oxygenase1, HO-1)在缺氧、高熱、缺血等多種應(yīng)激狀態(tài)下均具有細(xì)胞保護(hù)作用[5]。且有研究指出，HO-1參與了非酒精性脂肪性肝病的發(fā)生及發(fā)展[6]。基于血清Nrf2、HO-1的作用機(jī)制，推測(cè)二者可能與慢性乙型肝炎肝硬化患者的肝損傷程度有關(guān)。因此，本研究觀察血清Nrf2、HO-1水平與慢性乙型肝炎肝硬化患者肝損傷程度的關(guān)系，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

資料與方法

一、一般資料

選取2019年1月—2020年6月重慶醫(yī)科大學(xué)附屬璧山醫(yī)院收治的95例慢性乙型肝炎肝硬化患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合慢性乙型肝炎肝硬化的診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]；②存在乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus, HBV)感染史或乙型肝炎表面抗原(Hepatitis B surface antigen, HBsAg)陽性時(shí)間>6個(gè)月。排除標(biāo)準(zhǔn)：①近3個(gè)月接受抗病毒藥物治療；②存在心、腎等嚴(yán)重器質(zhì)性疾病；③合并其他類型病毒性肝炎；④合并惡性腫瘤；⑤妊娠期或哺乳期婦女；⑥合并骨質(zhì)疏松、原發(fā)或繼發(fā)性骨病、骨外傷。患者家屬均自愿簽署知情同意書。95例患者中男性52例，女性43例；年齡32～65歲，平均年齡(44.45 ± 5.28)歲；慢性乙型肝炎病程2～9年，平均病程(4.14 ± 1.08)年；有飲酒史28例，合并糖尿病11例，合并高血壓14例。本研究方案經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核通過。

二、方法

(一)肝損傷程度評(píng)估及分組方法 入院時(shí)，根據(jù)Child-Pugh分級(jí)[8]標(biāo)準(zhǔn)評(píng)估入選者肝功能。Child-Pugh A級(jí)為輕度損傷，納入輕度組；Child-Pugh B級(jí)為中度損傷，納入中度組；Child-Pugh C級(jí)為重度損傷，納入重度組。

(二)基線資料統(tǒng)計(jì) (1)一般資料：年齡、飲酒史(有、無)、性別(男、女)、病程、體質(zhì)指數(shù)(Bodymassindex，BMI)[BMI = 體質(zhì)量(kg)/身高(m)2]、合并基礎(chǔ)疾病(是、否，如高血壓、糖尿病)；(2)實(shí)驗(yàn)室檢查資料：采集患者入院時(shí)空腹靜脈血5 mL，3000 r/min離心10 min，離心半徑為15 cm，去上清，采用北京普朗醫(yī)療設(shè)備有限公司生產(chǎn)的PUZS-300全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定三酯酰甘油(Triglycerides, TG)、堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase, ALP)、總膽固醇(Total cholesterin, TC)、低密度脂蛋白膽固醇(Low density lipoprotein cholesterin, LDL-C)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Aspartic aminotransferase, AST)、高密度脂蛋白膽固醇(High density lipoprotein cholesterin，HDL-C)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Alanine aminotransferase, ALT)，血清Nrf2、HO-1水平采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定(試劑盒購于南京建成生物科技有限公司)；取患者空腹靜脈血3 mL，采用實(shí)時(shí)定量熒光PCR檢測(cè)儀(美國(guó)，PE9700)定量分析HBV DNA載量(試劑盒購于上海科華生物工程股份有限公司)。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 25.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以n(%)表示，采用Bonferroni方法校正多組間率的比較，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=原α水平/比較次數(shù)，即0.05/3 = 0.017；計(jì)量資料均經(jīng)過Shapiro-Wilk正態(tài)性檢驗(yàn)，以表示符合正態(tài)分布，采用單因素方差分析多組間比較，采用SNK-q檢驗(yàn)兩兩間比較；Kendall’s tau-b相關(guān)性分析血清Nrf2、HO-1水平與慢性乙型肝炎肝硬化患者肝損傷程度的關(guān)系；采用雙變量多項(xiàng)logistic回歸分析血清Nrf2、HO-1水平與慢性乙型肝炎肝硬化患者肝損傷程度的關(guān)系。P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、肝損傷程度評(píng)估結(jié)果

經(jīng)評(píng)估發(fā)現(xiàn)，95例慢性乙型肝炎肝硬化患者中Child-Pugh A級(jí)29例，占比30.53%(29/95)，Child-Pugh B級(jí)35例，占比36.84%(35/95)，Child-Pugh C級(jí)31例，占比32.63%(31/95)。

二、不同肝損傷程度慢性乙型肝炎肝硬化患者基線資料比較

比較不同肝損傷程度慢性乙型肝炎肝硬化患者的年齡、飲酒史、性別、合并基礎(chǔ)疾病、病程及BMI，組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 不同肝損傷程度慢性乙型肝炎肝硬化患者基線資料比較

三、不同肝損傷程度慢性乙型肝炎肝硬化患者實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)比較

重度組血清Nrf2、HO-1水平依次低于中度組、輕度組，中度組患者血清Nrf2、HO-1水平低于輕度組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，不同肝損傷程度慢性乙型肝炎肝硬化患者的其他實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 不同肝損傷程度慢性乙型肝炎肝硬化患者實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)比較(±s)

四、血清指標(biāo)與慢性乙型肝炎肝硬化患者肝損傷程度的關(guān)系

經(jīng)Kendall's tau-b相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，慢性乙型肝炎肝硬化患者肝損傷程度與血清Nrf2、HO-1水平呈負(fù)相關(guān)(r<0,P<0.05)。見表3。

表3 血清Nrf2、HO-1水平與慢性乙型肝炎肝硬化患者肝損傷程度的相關(guān)性

五、血清Nrf2、HO-1水平與慢性乙型肝炎肝硬化患者肝損傷程度的關(guān)系的logistic回歸分析

將慢性乙型肝炎肝硬化患者肝損傷程度作為因變量(1=輕度, 2=中度, 3=重度)，將入院時(shí)血清Nrf2、HO-1水平作為自變量，建立多項(xiàng)logistic回歸模型，以輕度肝損傷作為參照，檢驗(yàn)血清Nrf2、HO-1水平與慢性乙型肝炎肝硬化患者中、重度肝損傷的關(guān)系，結(jié)果顯示，血清Nrf2、HO-1異常表達(dá)可能與慢性乙型肝炎肝硬化肝損傷程度有關(guān)(OR<1,P<0.05)。見表4。

表4 血清Nrf2、HO-1水平與慢性乙型肝炎肝硬化患者肝損傷程度的關(guān)系的logistic回歸分析結(jié)果

討 論

研究表明，炎癥、氧化應(yīng)激是慢性乙型肝炎肝硬化發(fā)病的重要機(jī)制，參與了慢性乙型肝炎肝硬化發(fā)生、發(fā)展的全過程[9]。Nrf2作為一種有效的抗氧化劑，存在于各種組織器官，可調(diào)節(jié)一系列解毒防御、抗氧化基因，并能激活多種抗氧化酶，參與肝臟細(xì)胞的抗氧化應(yīng)答反應(yīng)[10]。作為一種保護(hù)性蛋白，HO-1分布在腎、肝、骨髓、脾等血細(xì)胞代謝活躍的組織器官中，參與機(jī)體各類疾病的發(fā)生、發(fā)展過程[11]。且有研究指出，Nrf2、HO-1與膽汁淤積性肝病患者肝損傷程度相關(guān)，可作為疾病嚴(yán)重程度的評(píng)估指標(biāo)[12]。基于上述Nrf2、HO-1與膽汁淤積性肝病患者肝損傷程度的關(guān)系，推測(cè)血清Nrf2、HO-1水平可能與慢性乙型肝炎肝硬化患者的肝損傷程度有關(guān)。本研究對(duì)比不同肝損傷程度慢性乙型肝炎肝硬化患者的基線資料，經(jīng)Kendall's tau-b相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，血清Nrf2、HO-1異常低表達(dá)可能與慢性乙型肝炎肝硬化患者肝損傷程度有關(guān)。作為一種抗氧化酶，HO-1不僅能利用游離血紅素阻斷氧化反應(yīng)，還可通過酶降解產(chǎn)物，來發(fā)揮抗炎、抗氧化的作用，參與慢性乙型肝炎肝硬化的發(fā)生與發(fā)展過程[13]。正常情況下，Nrf2可與Kelch樣環(huán)氧丙烷相關(guān)蛋白-1(Propylene oxide associated protein-1, kporp-1)在細(xì)胞質(zhì)結(jié)合，此時(shí)處于抑制狀態(tài)，當(dāng)機(jī)體為應(yīng)激狀態(tài)時(shí)，Nrf2與kporp-1解離，并轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核內(nèi)，結(jié)合抗氧化原件，對(duì)下游抗氧化酶HO-1表達(dá)進(jìn)行誘導(dǎo)[14-15]。氧化應(yīng)激將Nrf2激活后，繼而上調(diào)HO-1表達(dá)，通過Nrf2/HO-1信號(hào)通路，發(fā)揮肝臟保護(hù)作用，而當(dāng)慢性乙型肝炎肝硬化時(shí)，體內(nèi)的血清Nrf2、HO-1活性降低，可降低肝臟細(xì)胞的抗炎、抗凋亡及抗氧化作用，加重患者的肝損傷程度[16-17]。最后，本研究經(jīng)回歸分析發(fā)現(xiàn)，血清Nrf2、HO-1低表達(dá)可加重慢性乙型肝炎肝硬化患者的肝損傷程度。

綜上所述，慢性乙型肝炎肝硬化患者的肝損傷程度與血清Nrf2、HO-1異常表達(dá)有關(guān)，因此對(duì)于血清Nrf2、HO-1低表達(dá)的患者可采取積極的抗炎、抗氧化治療措施，以改善患者的預(yù)后，為臨床制訂診治策略提供參考依據(jù)。

利益沖突聲明：所有作者均聲明不存在利益沖突。