土茯苓總黃酮通過p38/ERK MAPK通路調(diào)控膜性腎病大鼠足細(xì)胞上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化的作用機(jī)制研究

孫杰瑜，孫博蕊

（中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，遼寧 沈陽(yáng) 110000）

膜性腎病（membranous nephropathy，MN）一種自身免疫性疾病，是成人終末期腎病常見原因之一。MN又細(xì)分為特發(fā)性MN（idiopathic membranous nephropathy，IMN）和繼發(fā)性MN兩種，IMN以腎病綜合征為主要臨床特征（如蛋白尿、血尿、低白蛋白血癥等），而繼發(fā)性MN還伴有原發(fā)病表現(xiàn)。常見發(fā)病原因有感染、自身免疫性疾病、惡性腫瘤及藥物等[1-2]。因MN疾病異質(zhì)性，目前治療方案仍存在爭(zhēng)議，迫切需要更具前景的藥物進(jìn)行治療。土茯苓根莖主要用于治療重金屬中毒、腎炎和炎癥性疾病，還可作為功能性成分添加于藥膳中。現(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，土茯苓具有多種生物活性，如抗炎、抑菌、抗痛風(fēng)、肝和心腦血管保護(hù)作用[3]。土茯苓提取物中主要有效成分為黃酮類化合物，其中土茯苓總黃酮（smilax glabra flavonoids，SGF）具有較強(qiáng)抗氧化、降尿酸和肝、腎保護(hù)作用[4]。本研究擬通過建立大鼠MN模型，探討SGF對(duì)MN模型的作用和機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 100只7周齡SPF級(jí)雄性健康SD大鼠，體質(zhì)量180～220 g，購(gòu)自安徽醫(yī)科大學(xué)，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（皖）2017-001。購(gòu)入后保持室內(nèi)溫度（23±2）℃，空氣相對(duì)濕度（65±5）%，光照晝夜交替循環(huán)12 h，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。尿蛋白試紙定性檢測(cè)大鼠尿蛋白，結(jié)果均為陰性，且測(cè)其24 h尿蛋白定量（urine total protein,UTP）均＜10 mg。本研究符合動(dòng)物倫理要求，實(shí)驗(yàn)過程嚴(yán)格遵守《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》。

1.2 藥物與試劑 茯苓總黃酮（SGF）（純度≥98%，批號(hào)：191028）購(gòu)自通化德濟(jì)藥材公司；環(huán)孢素口服溶液（國(guó)藥準(zhǔn)字H10930130，批號(hào)：190916）購(gòu)自杭州中美華東制藥有限公司；Trizol試劑（批號(hào)：15596026）購(gòu)自美國(guó)Invitrogen公司；白細(xì)胞介素-4（interleukin-4，IL-4）ELISA試劑盒（批號(hào)：SEKR-0004）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）ELISA試劑盒（批號(hào)：SERK-0012）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor α，TNF-α）ELISA試劑盒（批號(hào)：SEKR-0009）、DAB顯色試劑盒（批號(hào)：DA1015）、TUNEL試劑盒（批號(hào)：T2190）、RIPA裂解液（批號(hào)：R0010）均購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司；弗氏不完全佐劑（批號(hào)：F5506）、陽(yáng)離子牛血清白蛋白（cationic bovine serum albumin，C-BSA）（批號(hào)：NA-BD6-1）購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；兔抗大鼠細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases，ERK）（批號(hào)：ab184699）、磷酸化細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（phosphorylated extracellular regulatory protein kinase，p-ERK）（批號(hào)：ab201015）、p38絲裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase，p38MAPK）（批 號(hào)：ab4822）、磷酸化p38絲裂原活化蛋白激酶（phosphorylated p38 mitogen -activated protein kinase，p -p38MAPK）（批 號(hào)：ab178867）、甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）單抗（批號(hào)：ab181602）、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（alpha-smooth muscle actin，α-SMA）多抗（批號(hào)：ab124964）、裂孔隔膜蛋白分子（Nephrin）多抗（批號(hào)：ab216341）和山羊抗兔二抗IgG（批號(hào)：ab6721）均購(gòu)自英國(guó)Abcam公司。

1.3 主要儀器 cobas c501型全自動(dòng)生化分析儀（瑞士Roche公司）；Multiskan GO型酶標(biāo)儀（美國(guó)thermofisher公司）；NP-T1型脫水機(jī)和NP-B1型包埋機(jī)（孝感市諾普電子科技有限責(zé)任公司）；RM2016型病理切片機(jī)（德國(guó)徠卡公司）；7500型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（美國(guó)ABI公司）；DYCZ-24F型電泳儀（北京六一生物科技有限公司）。

1.4 造模與分組 隨機(jī)取80只大鼠建立MN模型，依據(jù)Border法制備C-BSA于-80 ℃冰箱密封存儲(chǔ)備用。預(yù)免疫：取1 mg C-BSA溶于0.5 mL PBS，加入等體積弗氏不完全佐劑混勻并充分乳化后，在大鼠腋下和腹股溝等多點(diǎn)皮下不同部位注射1 mL C-BSA乳化液進(jìn)行預(yù)免疫，隔日1次，每周3次，共計(jì)1周；正式免疫：大鼠尾靜脈注射16 mg/kg C-BSA（溶于1 mL pH值=7.4 PBS），隔日1次，每周3次，共計(jì)4周[5]。造模結(jié)束后，尿蛋白試紙檢測(cè)大鼠尿蛋白為陽(yáng)性，并隨機(jī)處死2只造模大鼠，進(jìn)行病理學(xué)檢查，出現(xiàn)腎小球基底膜（glomerular basement membrane，GBM）上皮下免疫復(fù)合物沉積，導(dǎo)致GBM彌漫性增厚，即造模成功[6]。除2只大鼠無任何癥狀外，剩余76只大鼠造模成功。將造模成功大鼠隨機(jī)分為模型組、SGF低劑量組、SGF高劑量組和陽(yáng)性藥物組，每組19只。余下20只未造模大鼠作為對(duì)照組。預(yù)免疫：對(duì)照組在其相同位置注射等體積的生理鹽水與弗氏不完全佐劑混合溶液，隔日1次，每周3次，共計(jì)1周；正式免疫：對(duì)照組大鼠尾靜脈注射等體積生理鹽水，隔日1次，每周3次，共計(jì)4周。

1.5 實(shí)驗(yàn)給藥 造模成功24 h后，參照文獻(xiàn)[7]用量，SGF低、高劑量組大鼠按15、30 mg/（kg·d）劑量灌胃SGF溶液；陽(yáng)性藥物組大鼠按10 mg/（kg·d）劑量灌胃給予環(huán)孢素口服溶液，對(duì)照組和模型組大鼠灌胃等體積生理鹽水，1次/d，共計(jì)6周。

1.6 觀察指標(biāo)

1.6.1 常規(guī)指標(biāo)檢測(cè) 末次給藥后24 h，代謝籠收集當(dāng)日7:00:00至次日7∶00∶00大鼠24 h尿液，量杯計(jì)算總尿量，采用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定24 h UTP。留尿結(jié)束后，戊巴比妥鈉麻醉大鼠，剖開腹腔，取主動(dòng)脈血，4 ℃3 000 r/min離心10 min，離心半徑20 cm，取血清，全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清血肌酐（serum creatinine，Scr）、血尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）的含量。

1.6.2 血清IL-4、TGF-β1、TNF-α水平檢測(cè) 常規(guī)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)束后，ELISA法檢測(cè)血清IL-4、TGF-β1、TNF-α含量。嚴(yán)格按照ELISA試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.6.3 腎臟病理學(xué)觀察 脫頸椎處死大鼠，左側(cè)腎臟取2 mm×2 mm×10 mm的新鮮皮質(zhì)，石蠟包埋，切片4 μm，脫蠟20 min，蘇木精染色3～5 min，伊紅染色2 min，脫水，二甲苯透化10 min，中性樹脂封固，光學(xué)顯微鏡觀察。

1.6.4 腎臟細(xì)胞凋亡檢測(cè) 取腎臟切片，脫蠟至水，37 ℃蛋白酶K孵育30 min，依據(jù)TUNEL試劑盒說明書對(duì)切片染色、終止反應(yīng)、封片等，5個(gè)不同視野下顯微鏡觀察腎臟腎小球足細(xì)胞（podocyte，PC）凋亡情況，計(jì)算凋亡指數(shù)（apoptoticindex，AI）。AI（%）=凋亡細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)×100%。

1.6.5 ERK mRNA、p38MAPK mRNA、Nephrin mRNA、α-SMA mRNA水平檢測(cè) 取一半右側(cè)腎臟皮質(zhì)，勻漿，Trizol法提取RNA，測(cè)純度、濃度，逆轉(zhuǎn)錄得cDNA，實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)。反應(yīng)體系：1.8 μL Taq聚合酶、1 μL上下游引物、4 μL模板cDNA、13.2 μL ddH2O。擴(kuò)增條件：94 ℃預(yù)變性30 s、94 ℃變性5 s、59 ℃退火30 s，共40個(gè)循環(huán)，加熔解曲線，50 ℃降溫30 s。GAPDH為內(nèi)參對(duì)照，數(shù)據(jù)分析采用2-△△Ct法，重復(fù)多次，取Ct均值。引物序列見表1。

表1 引物序列

1.6.6 ERK、p-ERK、p38MAPK、p-p38MAPK、Nephrin、α-SMA蛋白水平檢測(cè) 取剩余右側(cè)腎臟皮質(zhì)，加RIPA裂解緩沖液，離心取上清，蛋白BCA試劑盒確定總蛋白濃度，100 V電泳分離80 min，250 mA轉(zhuǎn)至PVDF膜，5%脫脂牛奶磷酸鹽緩沖液封閉2 h，樣品與ERK（1∶500）、p-ERK（1∶250）、p38MAPK（1∶500）、p-p38MAPK（1∶250）、Nephrin（1∶250）和α-SMA（1∶500）一抗4 ℃過夜孵育，TBST緩沖液洗膜，加二抗（HRP標(biāo)記IgG，1∶2 000）室溫孵育2 h，洗膜，曝光，顯影。Image J軟件測(cè)樣品條帶與GAPDH條帶灰度值。計(jì)算目標(biāo)蛋白相對(duì)表達(dá)量，即目標(biāo)條帶與GAPDH條帶灰度比值。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 27.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料采用“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”（）表示，采用Levene檢驗(yàn)方差齊性，如檢驗(yàn)方差齊，多樣本計(jì)量資料比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)；如方差不齊，則用Welch's t檢驗(yàn)，再行Dunnett's T3檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠24 h UTP、Scr、BUN水平比較 與對(duì)照組比較，模型組大鼠24 h UTP、Scr、BUN水平均明顯升高（P＜0.05）；與模型組比較，SGF低劑量組、SGF高劑量組及陽(yáng)性藥物組大鼠24 h UTP、Scr、BUN水平均明顯降低（P＜0.05）；與SGF低劑量組比較，SGF高劑量組及陽(yáng)性藥物組大鼠24 h UTP、Scr、BUN水平均明顯降低（P＜0.05），且陽(yáng)性藥物組低于SGF高劑量組（P＜0.05）。（見表2）

表2 各組大鼠24 h UTP、Scr、BUN 水平比較（）

表2 各組大鼠24 h UTP、Scr、BUN 水平比較（）

注：與對(duì)照組比較，aP＜0.05；與模型組比較，bP＜0.05；與SGF低劑量組比較，cP＜0.05；與SGF高劑量組比較，dP＜0.05

2.2 各組大鼠血清IL-4、TGF-β1、TNF-α水平比較 與對(duì)照組比較，模型組大鼠TNF-α水平明顯升高（P＜0.05），IL-4、TGF-β1水平明顯降低（P＜0.05）；與模型組比較，SGF低劑量組、SGF高劑量組及陽(yáng)性藥物組大鼠TNF-α水平均明顯降低（P＜0.05），IL-4、TGF-β1水平均明顯升高（P＜0.05）；與SGF低劑量組比較，SGF高劑量組及陽(yáng)性藥物組TNF-α水平均明顯降低（P＜0.05），IL-4、TGF-β1水平均明顯升高（P＜0.05）；與SGF高劑量組比較，陽(yáng)性藥物組大鼠TNF-α水平明顯降低（P＜0.05），IL-4、TGF-β1水平明顯升高（P＜0.05）。（見表3）

表3 各組大鼠血清IL-4、TGF-β、TNF-α 水平比較（）

表3 各組大鼠血清IL-4、TGF-β、TNF-α 水平比較（）

注：與對(duì)照組比較，aP＜0.05；與模型組比較，bP＜0.05；與SGF低劑量組比較，cP＜0.05；與SGF高劑量組比較，dP＜0.05

2.3 各組大鼠腎臟病理學(xué)改變情況 對(duì)照組大鼠腎皮質(zhì)內(nèi)腎小球結(jié)構(gòu)清晰，形態(tài)完整，細(xì)胞排列整齊，無系膜與基質(zhì)增生；模型組大鼠腎小球體積增大，細(xì)胞萎縮，系膜與基質(zhì)出現(xiàn)明顯增生，腎小管擴(kuò)張；SGF低劑量組大鼠腎小球體積增大，系膜與基質(zhì)增生，基底膜皺曲；SGF高劑量組大鼠腎小球基底膜增生減輕，上皮細(xì)胞水腫減輕；陽(yáng)性藥物組大鼠腎小球基底膜增生減輕，細(xì)胞萎縮減少，上皮細(xì)胞水腫減輕。（見圖1）

圖1 各組大鼠腎組織病理學(xué)改變比較（HE，×400）

2.4 各組大鼠腎臟腎小球足細(xì)胞AI比較 凋亡細(xì)胞呈棕黃色染色，對(duì)照組大鼠幾乎未見凋亡細(xì)胞；模型組大鼠陽(yáng)性染色細(xì)胞明顯增多；SGF低劑量組大鼠腎小球體積增大，棕黃色陽(yáng)性染色細(xì)胞減少；SGF高劑量組大鼠細(xì)胞排列紊亂，腎小球結(jié)構(gòu)模糊，陽(yáng)性染色細(xì)胞明顯減少；陽(yáng)性藥物組大鼠腎小球結(jié)構(gòu)清晰，基底膜稍增厚，陽(yáng)性染色細(xì)胞減少。（見圖2）

圖2 各組大鼠腎臟腎小球足細(xì)胞凋亡情況（TUNEL，×400）

與對(duì)照組比較，模型組大鼠腎皮質(zhì)組織腎小球足細(xì)胞AI明顯升高（P＜0.05）；與模型組比較，SGF低劑量組、SGF高劑量組及陽(yáng)性藥物組大鼠腎皮質(zhì)組織腎小球足細(xì)胞AI均明顯降低（P＜0.05）；與SGF低劑量組比較，SGF高劑量組及陽(yáng)性藥物組大鼠腎皮質(zhì)組織腎小球足細(xì)胞AI均明顯降低（P＜0.05），且陽(yáng)性藥物組低于SGF高劑量組（P＜0.05）。（見表4）

表4 各組大鼠腎臟腎小球足細(xì)胞AI 比較（）

表4 各組大鼠腎臟腎小球足細(xì)胞AI 比較（）

注：與對(duì)照組比較，aP＜0.05；與模型組比較，bP＜0.05；與SGF低劑量組比較，cP＜0.05；與SGF高劑量組比較，dP＜0.05

2.5 各組大鼠腎組織ERK mRNA、p38MAPK mRNA、Nephrin mRNA、α-SMA mRNA相對(duì)表達(dá)量比較 與對(duì)照組比較，模型組大鼠腎組織α-SMA mRNA相對(duì)表達(dá)量明顯升高（P＜0.05），Nephrin mRNA相對(duì)表達(dá)量明顯降低（P＜0.05）；與模型組比較，SGF低劑量組、SGF高劑量組及陽(yáng)性藥物組大鼠腎組織α-SMA mRNA相對(duì)表達(dá)量均明顯降低（P＜0.05），Nephrin mRNA相對(duì)表達(dá)量均明顯升高（P＜0.05）；與SGF低劑量組比較，SGF高劑量組及陽(yáng)性藥物組大鼠腎組織α-SMA mRNA相對(duì)表達(dá)量均明顯降低（P＜0.05），Nephrin mRNA相對(duì)表達(dá)量均明顯升高（P＜0.05）；與SGF高劑量組比較，陽(yáng)性藥物組大鼠腎組織α-SMA mRNA相對(duì)表達(dá)量明顯降低（P＜0.05），Nephrin mRNA相對(duì)表達(dá)量明顯升高（P＜0.05）。5組大鼠腎組織ERK mRNA、p38MAPK mRNA相對(duì)表達(dá)量比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（見表5）

表5 各組大鼠腎組織ERK mRNA、p38MAPK mRNA、Nephrin mRNA、α-SMA mRNA 相對(duì)表達(dá)量比較（）

表5 各組大鼠腎組織ERK mRNA、p38MAPK mRNA、Nephrin mRNA、α-SMA mRNA 相對(duì)表達(dá)量比較（）

注：與對(duì)照組比較，aP＜0.05；與模型組比較，bP＜0.05；與SGF低劑量組比較，cP＜0.05；與SGF高劑量組比較，dP＜0.05

2.6 各組大鼠腎組織ERK、p-ERK、p38MAPK、p-p38MAPK、Nephrin、α-SMA蛋白相對(duì)表達(dá)量比較 與對(duì)照組比較，模型組大鼠腎組織p-ERK、p-p38MAPK、α-SMA蛋白相對(duì)表達(dá)量均明顯升高（P＜0.05），Nephrin蛋白相對(duì)表達(dá)量明顯降低（P＜0.05）；與模型組比較，SGF低劑量組、SGF高劑量組及陽(yáng)性藥物組大鼠腎組織p-ERK、p-p38MAPK、α-SMA蛋白相對(duì)表達(dá)量均明顯降低（P＜0.05），Nephrin蛋白相對(duì)表達(dá)量均明顯升高（P＜0.05）；與SGF低劑量組比較，SGF高劑量組及陽(yáng)性藥物組大鼠腎組織p-ERK、p-p38MAPK、α-SMA蛋白相對(duì)表達(dá)量均明顯降低（P＜0.05），Nephrin蛋白相對(duì)表達(dá)量均明顯升高（P＜0.05）；與SGF高劑量組比較，陽(yáng)性藥物組大鼠腎組織p-ERK、p-p38MAPK、α-SMA蛋白相對(duì)表達(dá)量均明顯降低（P＜0.05），Nephrin蛋白相對(duì)表達(dá)量均明顯升高（P＜0.05）。5組大鼠腎組織ERK、p38MAPK蛋白相對(duì)表達(dá)量比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。（見表6、圖3）

表6 各組大鼠腎組織ERK、p-ERK、p38MAPK、p-p38MAPK、Nephrin、α-SMA 蛋白相對(duì)表達(dá)量比較（）

表6 各組大鼠腎組織ERK、p-ERK、p38MAPK、p-p38MAPK、Nephrin、α-SMA 蛋白相對(duì)表達(dá)量比較（）

注：與對(duì)照組比較，aP＜0.05；與模型組比較，bP＜0.05；與SGF低劑量組比較，cP＜0.05；與SGF高劑量組比較，dP＜0.05

圖3 各組大鼠腎組織ERK、p-ERK、p38MAPK、p-p38MAPK、Nephrin、α-SMA 蛋白表達(dá)Western blotting 圖

3 討論

IMN是一類以腎小球足細(xì)胞（PC）損傷為核心機(jī)制的自身免疫性腎臟病，近年來發(fā)病率不斷攀升，是終末期腎臟病主因[8]。IMN的病理特征普遍認(rèn)為是PC膜上形成的抗原-抗體復(fù)合物，沉積于腎小球基膜（GBM）上皮細(xì)胞下，進(jìn)而激活補(bǔ)體引起腎損害，主要體現(xiàn)為大量蛋白尿、低蛋白血癥、漸進(jìn)性腎功能受損[9]。目前本病發(fā)病機(jī)制尚不明確，且常用免疫抑制類藥物存在諸多不良反應(yīng)，目前IMN仍缺乏特異性治療方案。故本研究通過建立MN大鼠模型，探討SGF對(duì)MN大鼠EMT的影響及作用機(jī)制。

MN發(fā)病機(jī)理復(fù)雜，且和諸多因素有關(guān)。隨著PC細(xì)胞株構(gòu)建及生化技術(shù)發(fā)展，PC應(yīng)用越來越廣泛。PC即腎小球上皮細(xì)胞，屬于高度特化細(xì)胞，擁有規(guī)則的間隔足突，與GBM和腎小球內(nèi)皮細(xì)胞一起，維持腎血尿過濾屏障功能。MN發(fā)生過程中，由于免疫復(fù)合物激活補(bǔ)體級(jí)聯(lián)反應(yīng)，導(dǎo)致PC受損[10]。PC損傷被確定為MN典型特征，也被認(rèn)為是誘發(fā)蛋白尿和腎小球硬化的關(guān)鍵因素，其損傷導(dǎo)致細(xì)胞丟失和蛋白尿產(chǎn)生，且PC丟失已成為早期病理的重要標(biāo)記物[11]。大量研究表明，PC損傷潛在機(jī)制與多種生理變化有關(guān)，如細(xì)胞因子激活、炎癥和細(xì)胞凋亡等，但腎損傷PC具體機(jī)制尚未闡明[12]。PC損傷可導(dǎo)致阿霉素誘導(dǎo)的腎病綜合征大鼠足突廣泛融合和嚴(yán)重蛋白尿現(xiàn)象。已有研究證實(shí)，PC功能障礙可能通過EMT導(dǎo)致蛋白尿，阻斷EMT可逆轉(zhuǎn)早期階段PC凋亡[13]。本研究發(fā)現(xiàn)，藥物干預(yù)后，大鼠常規(guī)生化指標(biāo)24 h UTP、Scr、BUN水平和血清IL-4、TGF-β1、TNF-α水平降低，腎小球足細(xì)胞AI降低，炎癥反應(yīng)得到改善。HE結(jié)果顯示，SGF高、低劑量組大鼠腎臟病理?yè)p傷較模型組出現(xiàn)明顯改善，PC足突融合減少，提示SGF可通過減少腎小球PC凋亡，從而減緩大鼠腎臟病變，改善炎癥反應(yīng)，阻止MN發(fā)展。

作為MAPK信號(hào)通路重要分支，p38和多種病理生理過程密切相關(guān)。p38MAPK是MAPK超家族成員重要組成部分。p-p38MAPK表達(dá)升高，可導(dǎo)致PC凋亡，進(jìn)而引起GBM濾過屏障受到破壞，以致產(chǎn)生大量蛋白尿[14]。MAPK通路活化與PC損傷、足突融合、蛋白尿發(fā)生有關(guān)。Nephrin是PC足突間裂孔膜（slitdiaphragm，SD）結(jié)構(gòu)蛋白成員，特異表達(dá)于SD區(qū)，是PC上皮細(xì)胞表型之一[15]。α-SMA是肌成纖維細(xì)胞（myofibroblast，Myo F）標(biāo)志蛋白，纖維細(xì)胞激活可高表達(dá)，腎臟固有細(xì)胞在轉(zhuǎn)分化成Myo F后合成α-SMA，因此，α-SMA表達(dá)高低可間接反映腎臟固有細(xì)胞向肌成纖維轉(zhuǎn)化的程度[16]。α-SMA是上皮細(xì)胞EMT及纖維化標(biāo)志蛋白，纖維化是MN向腎小球硬化發(fā)展的最終途徑。研究發(fā)現(xiàn)，在IMN發(fā)病過程中，PC發(fā)生EMT，上皮細(xì)胞樣表型標(biāo)記物Nephrin表達(dá)下調(diào)，間充質(zhì)細(xì)胞樣表型標(biāo)記物結(jié)蛋白（Desmin）表達(dá)上調(diào)，導(dǎo)致PC形態(tài)和功能異常，腎小球?yàn)V過屏障受損，形成蛋白尿[17]。本研究結(jié)果顯示，與模型組比較，SGF高、低劑量組大鼠腎組織Nephrin mRNA和蛋白相對(duì)表達(dá)量明顯升高，α-SMA mRNA和蛋白相對(duì)表達(dá)量及p-ERK、p-p38MAPK蛋白相對(duì)表達(dá)量明顯降低，說明p38/ERK MAPK通路被抑制，揭示SGF可能通過抑制其通路，進(jìn)而調(diào)控PC損傷與細(xì)胞凋亡。

綜上所述，SGF能抑制MN大鼠EMT，可能通過調(diào)控p38/ERK MAPK通路相關(guān)分子表達(dá)發(fā)揮作用。