HPVE6/E7mRNA和HPV-DNA檢測在宮頸癌篩查中的價值

武振宇

(張家口市婦幼保健院微生物科，河北 張家口 075000)

宮頸癌是全世界高發的嚴重危害女性身心健康的惡性腫瘤。在全球范圍內，每年新發病例和死亡病例分別約為53萬和27.5萬[1]，且全球數據表明，宮頸癌的新發病例呈現越來越年輕化趨勢[2]。有研究[3]表明，高危型人乳頭瘤病毒(HPV)的持續性或反復性感染是宮頸癌的主要致病原因。宮頸癌可防可治，從宮頸癌癌前病變到宮頸癌確診需要5～12年，因此，早篩查早治療對宮頸癌的防治具有重要意義[4]。組織細胞學聯合HPV-DNA檢測是目前我國篩查宮頸癌的主要方案[5]，HPV-DNA檢測的敏感性較高，但其特異性和陽性預測值較低[6-7]。研究[8]表明，HPV E6/E7 mRNA 基因在癌基因的轉錄表達中發揮作用，可作為宮頸癌病變發展的早期標志物，其與HPV-DNA檢測相比，具有更高的特異性和相似的敏感性，能彌補HPV-DNA檢測的不足，具有較高的宮頸癌篩查價值。本研究通過分析不同組織病理學級別中HPV E6/E7 mRNA 和 HPV DNA檢測結果的差異，探討 HPV E6/E7mRNA和HPV-DNA檢測對宮頸癌的篩查價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2021年1月至2021年7月在張家口市婦幼保健院975例進行宮頸癌篩查并獲得病理結果者為研究對象，其中年齡20～70歲，平均(41.50±2.00)歲。本研究經醫院倫理會員會審核并批準，研究對象均自愿接受宮頸癌各項篩查方法并簽署知情同意書。納入標準：(1)檢查前3 d無陰道用藥治療史、無性生活；(2)月經結束后 3～7 d；(3)未進行宮頸錐切術或子宮切除術。排除標準：(1)已經確診為宮頸癌前病變或宮頸癌者；(2)子宮切除術后或其他宮頸手術者；(3)盆腔放射治療史者；(4)合并妊娠者；(5)合并其他惡性腫瘤者；(6)有自身免疫性疾病或正在接受免疫抑制治療者。

1.2 方法

1.2.1 HPVE6/E7mRNA檢測 使用鄭州Kodia 生物技術公司生產的宮頸穩態檢測試劑盒，采用支鏈DNA雜交捕獲技術(操作嚴格按照試劑盒說明書進行)定量檢測14 種高危型 HPV，分別為HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66 和 68型。其檢測探針是針對這14種高危型HPV病毒的E6/E7mRNA，只要任何一種存在即陽性。檢測結果由計算機軟件根據E6/E7mRNA的拷貝數、產品臨床實驗閾值等自動計算，結果<1為陰性，≥1為陽性。

1.2.2 HPV-DNA檢測 采用杭州德同生物技術有限公司提供的 HPV 核酸檢測試劑盒，在 HPV 取樣管中加入變性試劑，65 ℃水浴 45 min 后室溫保存，將樣本吸取至已經加入探針試劑的雜交板孔內，65 ℃孵育 60 min。降至室溫后將上述樣本轉移至對應捕獲板中振蕩 60 min，然后移除捕獲板中液體并拍干，加入檢測試劑25 ℃孵育45 min。接著移除液體、使用清洗液洗板并拍干，加入底物試劑，室溫避光15 min后于化學發光免疫分析儀上讀數。通過雜交捕獲-化學發光方法對14種HPV型[2種極度高危型(HPV16、HPV18)、12 種高危型(HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV56、HPV58、HPV59、HPV66、HPV68)]進行檢測，檢測到其中≥1種 HPV型者為陽性，未檢測到者為陰性。

1.2.3 組織病理學檢查 醫師借助深圳市金科威公司生產的光電一體電子陰道鏡進行組織活檢。對無異常者進行3、6、9、12點取材，對于有異常者進行區域多點取材。病理標本由兩名資深的病理醫師進行閱片并作出病理診斷。按照病理學診斷標準[9]進行宮頸病變分型：(1)正常或炎癥；(2)宮頸上皮細胞內瘤變Ⅰ級(CINⅠ)；(3)CINⅡ；(4)CINⅢ或原位癌；(5)宮頸浸潤癌。將正常或炎癥判定為陰性，其他診斷結果判定為陽性。

1.3 統計學分析

2 結果

2.1 不同組織病理學結果分級中HPV-DNA和HPV E6/E7mRNA檢測結果比較

975名研究對象中，HPVE6/E7mRNA檢測陽性405例，陽性率41.83%；HPV-DNA檢測陽性564例，陽性率57.84%；陰道鏡組織病理學檢查結果為正常或炎癥515例、CINⅠ200例、CINⅡ129例、CINⅢ或原位癌123例、宮頸浸潤癌8例。兩種檢測方法的陽性率隨著宮頸組織病理學級別的增高呈逐漸上升的趨勢(P<0.05)；在正常或炎癥中HPV-DNA檢測的陽性率高于HPVE6/E7mRNA檢測(P<0.05)；在CINⅠ級中，HPV-DNA檢測的陽性率高于HPVE6/E7mRNA檢測(P<0.05)；在CINⅡ、CINⅢ或原位癌、宮頸浸潤癌中，兩種檢測方法比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 不同組織病理學分級中HPV-DNA檢測和HPVE6/E7mRNA檢測結果比較[n(%)]

2.2 HPV-DNA、HPV E6/E7mRNA檢測及兩者聯合檢測結果比較

病理學檢查結果中，將正常或炎癥判定為陰性，其他診斷結果判定為陽性。兩者聯合檢測時任一種檢測結果陽性即判定結果為陽性，兩種檢測結果均為陰性則判定結果為陰性。見表2。

表2 HPV-DNA、HPV E6/E7mRNA檢測及兩者聯合檢測結果比較(例)

2.3 HPV-DNA、HPV E6/E7mRNA檢測及兩者聯合檢測對宮頸癌的篩查價值

HPV-DNA檢測的敏感性高于HPVE6/E7mRNA檢測(P<0.05)；特異性、陽性預測值及準確性均低于HPVE6/E7mRNA檢測(P<0.05)；兩種檢測方法的陰性預測值比較，差異無統計學意義(P>0.05)。兩者聯合檢測的敏感性及陰性預測值高于兩者單獨檢測(P<0.05)；特異性低于兩者單獨檢測(P<0.05)；兩者聯合檢測的陽性預測值及準確性有所降低，但與HPV-DNA檢測比較，差異無統計學意義(P>0.05)，與HPVE6/E7mRNA檢測比較，差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 HPV-DNA、HPV E6/E7mRNA檢測及兩者聯合檢測對宮頸癌的篩查價值(%)

3 討論

宮頸癌是嚴重危害女性健康的惡性腫瘤之一，通過早期發現CIN并采取合適的治療措施，可使宮頸癌的發病率和死亡率明顯降低，且患者預后良好[10]。有研究表明，高危型HPV持續或反復感染是宮頸癌前病變及宮頸癌發生發展的必要條件，因此檢測HPV-DNA有助于宮頸癌的篩查和診斷，但HPV感染往往是一過性且無害的，HPV-DNA檢測僅能診斷是否出現HPV感染，對病毒的活躍狀態及宮頸病變的嚴重程度并不明確[11]。PVE6/E7mRNA是HPV致癌基因表達的直接標志物，是致癌蛋白合成的模板，是宮頸病變開始和進展的必經之路。有研究[12]指出，HPVE6/E7mRNA是HPV病毒活躍的指標，其表達水平提升提示HPV病毒與機體DNA發生整合，細胞惡化啟動。

本研究中，隨著宮頸癌組織病理學級別的升高，兩種檢測方法的檢出陽性率隨之增加(P<0.05)，在宮頸浸潤癌，兩種檢測方法的陽性率均達到100%，說明HPV-DNA及HPVE6/E7mRNA表達水平與病變程度呈正相關，隨著宮頸癌級別加重呈上升趨勢。有研究[13]證實，絕大多數宮頸癌患者早期均有HPV感染，且多有反復或長期感染。HPV在機體定植后會與體內特異的基因組合并高度表達，促進宮頸癌細胞的增殖，宮頸癌組織病理學級別越高，機體HPV-DNA表達水平越高。在宮頸炎組、CINⅠ組、CINⅡ組、CINⅢ組及宮頸癌組中隨著病理學級別的升高，HPV-DNA的檢出陽性率隨著升高，與諶瓊華[14]的研究結果一致。HPVE6/E7是HPV的基因編碼的致癌蛋白，是導致宮頸細胞癌變的重要因子，其可使宮頸被感染的細胞無限增殖并惡化[15]。HPVE6/E7mRNA的表達水平是細胞高級別惡變的一個生物學標志，在各級別組織病理學檢查結果中，級別越高，HPVE6/E7病毒載量隨之升高[16]。也有研究[17]表明，隨著宮頸組織病理學級別升高，HPVE6/E7 mRNA檢出陽性率隨之升高。在正常或炎癥及CINⅠ中，HPV-DNA的陽性檢出率高于HPVE6/E7 mRNA檢測，這是因為在正常或炎癥及CINⅠ中，大部分HPV病毒呈游離態，尚未與機體DNA發生整合，即大多數HPV感染者可能是一過性的并未出現持續感染，部分HPV-DNA的陽性者可能出現HPVE6/E7 mRNA檢測陰性[18]。因此，HPVE6/E7 mRNA檢測的假陽性率相對較低，能減少一過性感染的檢出率。在CINⅡ及以上級別中，兩種檢測方法的陽性率差異無統計學意義(P>0.05)，可能是因為隨著HPV的持續感染，病毒與機體DNA發生整合，癌基因表達活躍，大量癌蛋白E6E7產生，宮頸癌風險增加。

本研究中，HPV-DNA檢測的敏感性高于HPVE6/E7mRNA檢測(P<0.05)，說明HPV-DNA檢測具有較高的敏感性，在宮頸癌篩查中不易發生漏診，與既往研究[19]相符。HPVE6/E7mRNA檢測的特異性、陽性預測值及準確性高于HPV-DNA檢測(P<0.05)，與雷冬梅等[20]的研究結果一致。HPV-DNA檢測僅說明感染了HPV，有些患者的HPV感染是一過性的，可自行消退，僅有小部分高危型HPV持續或反復感染者才發展為宮頸惡性腫瘤。因此，相對來說，HPV-DNA檢測對宮頸癌的特異性不高，風險預測過早，易造成某些僅感染HPV但未發展為宮頸癌者的誤診，而HPVE6/E7mRNA檢測有較高的特異性，可降低一過性感染者的過度醫療行為[21]。HPVE6/E7mRNA檢測能彌補傳統HPV-DNA檢測特異度和陽性預測值不高的問題，能更精確反映癌變風險。兩種檢測方法的陰性預測值比較，差異無統計學意義(P>0.05)，可能與本研究樣本量小有關。趙涌等[1]也指出，HPVE6/E7mRNA檢測有較高的敏感性、特異性、陽性預測值和陰性預測值。因此，HPVE6/E7mRNA和HPV-DNA檢測均對宮頸癌篩查具有較高的指導價值，當兩種檢測均為陽性時，應行宮頸癌組織病理學檢查及早明確診斷，早期進行干預[22]。本研究結果還顯示，兩種檢測方法聯合使用，能提高檢測的敏感性及陰性預測值，具有較好的診斷效能(P<0.05)。

綜上，HPV-DNA檢測用于宮頸癌一線篩查中，可提高篩查的敏感性和陽性檢測率。對一線篩查陽性者進行HPVE6/E7mRNA二線篩查，能將一過性感染者及低風險者重新納入常規篩查管理中，以減少不必要的檢查和治療，兩者聯合具有良好的篩查價值。