采血管中添加劑與血樣中乙醇含量的相關性研究

鄧 啟

廣東恒安司法鑒定所，廣東 云浮 527300

乙醇檢測在司法實踐中有著重要意義，不僅僅是測定患者體內酒精濃度的標準，還是確認受檢者酒后駕車的證據。然而在司法實踐中，乙醇檢測結果容易受到多種因素影響，采集、包裝、檢測技術都會導致乙醇含量檢測結果的偏差，從而導致結果失準的問題［1］。這不僅不利于受檢者行為性質的認定，在實際的司法活動中也會影響到其行為后果的認定。因此為了提高乙醇測定結果的可靠性，有效推進社會法治的進行，我們務必要做好檢測過程中的質量控制，明確影響測定結果的因素，找到其中的變化規律［2］。本文主要就采血管中添加劑差異對血樣乙醇含量測定結果影響進行研究與評價，從而找到合適的采血管添加劑，或者明確添加劑對乙醇測定結果的影響，形成一套相對完備、客觀的乙醇含量測定標準。現做以下報道：

一、資料與方法

（一）儀器和試劑

上海靈華氣相色譜儀GC9890B（單進樣口雙色譜柱雙檢測器），上海思達自動頂空進樣器HS-9A，氫火焰離子化檢測器（FID），上海靈華氣相色譜工作站。

無水乙醇和叔丁醇均為色譜純［3］。

乙醇標準液制備：乙醇母液——在100ml容量瓶中加入1/3超純水后將容量瓶置入分析天平中去皮，再用移液槍往容量瓶中加入1.0010g的無水乙醇，加超純水至容量瓶100ml刻度線，搖勻。得1000mg/100ml乙醇母液。用5ml分刻度吸管準確吸取5ml乙醇母液置于已經加入1/2超純水的50ml容量瓶中，容量瓶加水至50ml刻度線后搖勻。得100mg/100ml乙醇標準液。

叔丁醇內標工作液的制備：在100ml容量瓶中加入1/3超純水后將容量瓶置入分析天平中去皮然后用移液槍往容量瓶中加入0.5000g的叔丁醇后加超純水至100ml刻度線，得5mg/ml叔丁醇母液。用5ml分刻度吸管吸取4ml叔丁醇母液定容500ml搖勻后濃度為40μg/ml叔丁醇內標工作液［4］。

（二）方法

1.樣本處理及測定規則

取0.1ml乙醇標準液，置于頂空瓶內，加0.5ml叔丁醇內標工作液，鋁蓋密封墊密封后混勻，放入頂空進樣器自動進樣色譜檢測分析，內標標準曲線法進行定量［5］。乙醇標準液的檢測結果為103.50mg/100ml。

分別用移液槍吸取2ml乙醇標準液于山東省成武縣華博醫療器械有限公司5ml規格（批次：20220105）EDTA-K2采血管、深圳美訊醫學檢驗科技有限公司2ml規格（批次：202112305）檸檬酸鈉（1∶9）采血管、1.6ml規格（批次：20200528）檸檬酸鈉（1∶4）采血管、4ml規格（批次：2022 0113）肝素鋰采血管內。混勻，每種采血管平行測定9次。

2.色譜條件

自動頂空進樣器工作條件：頂空瓶平衡溫度80℃，環溫度90℃，傳輸管溫度105℃；樣品平衡時間 10min；加壓時間 0.2min；充樣時間 0.2min；充樣平衡 0.05min；進針時間 1.00min；清掃時間1.00min；載氣 N2純度 99.999%，載氣閥刻度4.0；加壓閥刻度 6.0。

氣相色譜儀工作條件：進樣口溫度150℃柱箱溫度：60℃（恒溫），色譜柱（DB-ALC1 30m×0.530 mm×3.00μm），清掃閥刻度：8.0；尾吹閥刻度：5.0；檢測器：250℃（FID）；燃氣：H2 閥刻度：4.5；空氣閥刻度：7.5；樣品分析時間 6min。

3.標準曲線

購買濃度為 0.1、0.2、0.5、0.8、1.0、2.0、3.0mg/ml有證乙醇標準液，用移液槍分別吸取系列濃度標準液0.1ml于頂空瓶內，各加0.5ml（40.0μg/ml）叔丁醇內標工作液，鋁蓋密封墊密封后混勻，放入頂空進樣器自動進樣色譜檢測分析，每個濃度平行測定2份。以乙醇與叔丁醇色譜峰面積比（y）對乙醇質量濃度（x）為橫坐標進行線性回歸。

（三）觀察指標

1.對不同添加劑采血管下樣本中乙醇含量測定結果進行評價和對比，分析不同添加劑對血樣中乙醇測定結果的影響特點。

2.在對比中總結不同添加劑對血樣中乙醇測定結果的影響，以此為基礎提高乙醇測定準確度的策略。

（四）統計學方法

研究相關數據均經SPSS19.0軟件進行統計學處理，計量資料采用均數±標準差表示，計數資料率表示，若涉及組間對比則分別經t檢驗或卡方檢驗，檢驗值P〈0.05為差異具有統計學意義。同時不同添加劑采血管連續9次乙醇測定結果使用Excel軟件進行匯總處理。

二、結果

（一）基本結果

從表1匯總結果可以發現，不同添加劑采血管血氧乙醇測定結果存在較大差異，差異具有統計學意義（P〈0.05），提示不同類型添加劑對血樣中乙醇測定結果的影響是不同的。

表1 不同添加劑采血管連續9次乙醇測定結果

單純就結果來看，采血管中添加劑為EDTA-K2和肝素鋰時乙醇含量測定結果最接近準確值，而檸檬酸鈉添加劑采血管樣本的乙醇測定結果均低于準確值且檸檬酸鈉添加比率越低測定結果偏差越大，差異具有統計學意義（P〈0.05）。

（二）精密度變化分析

表2為精密度變化匯總，以表1中數據為基準，其中當日數據為應試溶液配置完成后24h檢測結果，次日數據為應試溶液配置完成后48h檢測結果，第三日數據為應試溶液配置完成后72h檢測結果，連續平行檢測9次得到結果偏差和基準值之間的差異為精密度變化范圍，取最大差異和最小差異為界限。就精密度檢測結果來看，隨著溶液配置時間的增加，乙醇檢測結果偏差值越大，推測與乙醇緩慢揮發的特征有關。而不同添加劑采血管中樣本其精密度變化范圍和特點不同，其中檸檬酸鈉添加劑采血管中樣本乙醇檢測精準度變化幅度最小，且檸檬酸鈉添加量比率越低偏差值變化越小，差異具有統計學意義（P〈0.05），肝素鋰和EDTA-K2添加劑采血管中樣本乙醇檢測結果精密度變化幅度較大，精密度變化特點和檸檬酸鈉添加劑采血管相比存在顯著差異（P〈0.05）。推測導致上述結果的原因主要有兩點：1.隨著時間的推移，溶液中乙醇會緩慢揮發，不同的添加劑會影響到乙醇的揮發速度，從而對不同時間節點乙醇含量測定結果的影響幅度產生差異。2.不同添加劑對血液凝聚狀態的影響不同，而血液的凝聚程度會影響到色譜相分析結果導致乙醇檢測結果上的偏差。

表2 不同添加劑下乙醇測定精密度變化

三、討論

根據GB19522-2010《車輛駕駛人員血液、呼氣酒精含量閾值與檢驗》，車輛駕駛員血液中的乙醇含量是酒后駕駛認定的重要訴訟證據，然而血樣采集、送檢不規范都可能影響檢測結果，由于GA/T1556-2019《道路交通執法人體血液采集技術規范》未對交通執法活動中車輛駕駛人員的血液采集用何種抗凝劑采血管進行明文規定，這就導致乙醇檢測結果可靠性存在偏差，因此有必要就不同添加劑采血管對血樣中乙醇檢測的影響進行研究，總結不同添加劑對乙醇檢測的影響［6］。

采血管大體上可分為三類：1.無添加劑：此管通常無特殊的添加劑，只在內壁上涂有掛壁的藥劑，常用于腫瘤標志物檢測、血清學檢測等；2.促凝劑：此管除了內壁涂有防止掛壁的硅油外，管內還會添加促凝試劑，常應用于急診；3.抗凝劑：在采血管中的抗凝劑能對抗血液凝集，常用于血液成分檢測。

乙醇檢測中所用的采血管則是抗凝劑采血管，是為了獲取最接近采血時血液中的乙醇含量［7］。但添加劑的類型會影響到乙醇檢測結果，導致的原因主要有兩點：1.不同采血管中添加劑的液體體積不同，添加劑和血樣混合后對血樣的稀釋程度不同，因此在檢測時容易得到差異化的結果；2.受到檢測技術的限制，添加劑可對檢測結果產生干擾，從而導致檢測結果的偏差。因此在使用采血管時，我們要根據檢驗成分、檢驗技術和檢驗目標來選擇合適添加劑的采血管，以保證檢測結果的準確性。

乙醇檢驗是司法實踐中常見的檢驗項目，該檢驗結果或成為司法活動中的證據，因此務必保證乙醇檢驗結果的準確性和可靠性［8］。在本組研究中，就四種不同添加劑采血管的乙醇含量檢測結果進行了對比和評價，結果發現不同添加劑采血管乙醇檢測結果存在差異，差異具有統計學意義（P〈0.05）；而根據檢測結果我們發現，EDTA-K2和肝素鋰時乙醇含量測定結果最接近準確值，其中EDTA-K2添加劑采血管檢測結果略低于準確值，肝素鋰添加劑采血管檢測結果則略高于準確值，而出于司法的公正性考慮，EDTA-K2添加劑采血管應當是血樣乙醇檢測的首選。當然在使用其他類型添加劑采血管進行檢測時，我們可以通過建立相應算法的方式來規避檢測結果偏差導致的誤判。此外，在本研究中還對檢測精確度衰減進行了評價，單純就結果來看采樣后檢測時間越長偏差越大，因此在司法實踐中要盡可能優化血樣送檢流程，做到采血后第一時間送檢。