IL-8與自身免疫性肝病的相關研究進展

楊向喆 解新科 邊倩

自身免疫性肝病是一種以肝臟為特異性免疫病理損傷的一類自身免疫性疾病，即患者的免疫系統出現一系列問題，攻擊自身肝細胞導致肝臟發生一系列慢性炎癥。作為一種特殊的慢性肝病，常由自身免疫因素所導致，如體液免疫及細胞免疫，表現為自身免疫耐受遭到破壞，在肝臟組織中可見免疫反應的特征細胞學改變，肝臟組織發生的改變與感染病毒性肝炎相似，但血清病毒學檢查結果呈陰性[1]。自身免疫性肝病是抗原激活，引起自身免疫反應、應答，進而導致的肝臟損害，患者常伴有肝外的一系列癥狀，以黃疸、發熱及關節炎等癥狀為主要臨床表現，甚至可見“狼瘡”現象[2]。隨著臨床對疾病認識水平及診斷水平的不斷提升，自身免疫性肝病的患病率逐年增加，因此越來越受到社會各界的關注及重視。白細胞介助于自身細胞膜上的受體,所感受的CF濃度梯度,向高濃度方向趨化,最近發現一種中性粒細胞的新的CF是白細胞介素-8(IL-8)。該因子是由脂多糖(LPS)、白細胞介素-1(IL-1)和腫瘤壞死因子(TNF)刺激單核細胞而產生的一種中性粒細胞趨化因子，在多種疾病中發揮非常重要的作用。既往研究顯示，IL-8作為趨化因子參與炎性反應，而近年來研究結果顯示，IL-8在自身免疫性肝病中呈高表達[3,4]，提示可能與疾病的細胞增殖及纖維化有關，其有望成為評估患者預后的參考指標，并為受體導向指標提供新靶點。

1 自身免疫性肝病概述

自身免疫性肝病在臨床具有一定的發病率，雖然在臨床較為少見，多與其它自身免疫性疾病相伴，是近年來新確定的疾病之一，治療難度較大，需要對疾病進行分析，具體內容如下。

1.1 發病機制 自身免疫性肝炎的發病機制尚不清楚，目前認為遺傳是自身免疫性肝炎的主要因素，遺傳易感性可影響機體自身抗原的免疫反應性及其臨床表現。類白細胞抗原和DR，是自身免疫性肝炎獨立的危險因子。此外，病毒感染、藥物和環境可作為促發因素，促使自身免疫性肝炎發病。患者由于免疫調控功能缺陷，導致機體對自身肝細胞抗原產生反應，表現為以細胞介導的細胞毒性作用和肝細胞表面特異性抗原與自身抗體結合而產生的免疫反應，并以后者為主。

1.2 發病特征 本病以女性多見，主要見于青少年期，另一個小高峰年齡為絕經期女性。起病大多隱襲或緩慢，類似急性病毒性肝炎。最常見的癥狀是疲乏，其次是黃疸，皮膚瘙癢。最常見的體征是肝腫大，脾腫大可出現在有肝硬化和無肝硬化患者，可發現蜘蛛痣，常位于面部、頸部和手臂。自身免疫性肝炎全身性的肝外表現更為明顯與多見，有時其癥狀掩蓋了原有的肝病。該病常見的癥狀以對稱性游走性關節炎，可反復發作，無關節畸形、低熱、皮疹、皮膚血管炎和皮下出血等為主，如情況嚴重可出現內分泌系統、腎臟、血液方面的病變，導致痤瘡、多毛、女性閉經、男性乳房發育、橋本甲狀腺炎、甲狀腺功能亢進、糖尿病、腎小管性酸中毒、腎小球腎炎、輕度貧血、白細胞和血小板減少等。

1.3 分型

1.3.1 自身免疫性肝炎：該病屬于一種慢性的肝炎，主要發生在女性群體，臨床上可有乏力，食欲減退，腹脹，停經等。化驗ALT明顯升高，血清中檢出自身抗體，根據自身抗體將AIH分三型，Ⅰ型中檢出ANA或SMA，Ⅱ型可檢出LKM1或LC1抗體，Ⅲ型檢出SLA/LP抗體，出現高IgG血癥，必要時需行肝組織活檢進一步明確診斷。

1.3.2 原發性膽汁性肝硬化：該病主要發病群體為中老年女性最常見。多數患者起病隱匿，發現時已進展至肝硬化。部分患者以皮膚發癢為最初癥狀，以后癥狀逐漸加重，可有黃疸，肝腫大，腹痛，皮下脂肪沉積，皮膚異常發黑，眼瞼上有淺黃色斑點，脂肪痢,有反復泌尿系感染。化驗血清轉氨酶輕到中度升高，免疫球蛋白IgM升高血，清堿性磷酸酶(ALP)、谷氨酰轉肽酶(GGT)、血清膽固醇和脂蛋白增高，抗線粒體(AMA)抗體陽性及M2陽性是本病的重要特征。

1.3.3 原發性硬化性膽管炎：該病屬于一種病因不明的慢性膽汁淤積綜合征，多發于中青年男性。典型癥狀為黃疸，瘙癢，全身不適、不安或食欲不振，消化不良，肝腫大，脾腫大等。化驗血清轉氨酶輕至中度升高，血清堿性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰轉肽酶(GGT)增高，可有自身抗體ANCA陽性，診斷需做內窺鏡逆行性膽胰造影(ERCP)。

1.4 治療方案 與其他類型肝炎相比，自身免疫性肝炎的預后較好，經過治療有80%～90%的患者能存活10年，治療的成功有賴于恰當地選擇適應證、選擇適當的治療方案、足夠的療程及時處理并發癥、定期復查。在治療方法的選擇方面，需要結合實際病情自身體質篩選合適的適應證，充分分析患者的疾病特征，實施個體化治療，選擇合適的治療方案。該病需要堅持長期治療，保證足夠的療程，如果在治療過程中出現并發癥，應及時采取有效措施阻止病情發展。一旦患者確定及被診斷為該疾病，應該定期進行肝功能、B超等檢查，觀察肝臟的大小、形態及有無脾臟的增厚，有無門靜脈、脾靜脈的增厚，以便醫生及時發現病情的變化調整治療方案。

2 IL-8概述

炎性反應屬于機體基本的防御反應的一個組成部分，早期的炎性反應包括血漿滲出和白細胞游出，結合組織損傷的種類、程度以及時間，出現白細胞浸潤的程度也存在較大的差異。而具有特異性中性白細胞趨化功能的白細胞介素8(IL-8)在多種疾病與損傷的病理中發揮非常重要的作用。具體內容如下。

2.1 IL-8組成 IL-8 分子量 8.3 kDa，不成熟的 IL-8 為 99 個氨基酸，單核細胞產生的成熟IL-8分子主要形式為72個氨基酸，而內皮細胞產生的成熟IL-8分子主要為77個氨基酸。IL-8分子含4個Cys，無N糖基化位點，耐熱、耐堿，但對巰基化合物敏感。IL-1、TNF、LPS 和 PHA 均能誘導單核細胞、巨噬細胞、內皮細胞、成纖維細胞和表皮細胞等合成分泌 IL-8；PHA 等絲裂原活的T細胞也可產生 IL-8；人類多種腫瘤細胞均可高表達IL-8。其中甲狀腺癌、鱗狀細胞癌、黑素瘤等可組成性產生 IL-8，而星狀細胞瘤、肝癌、腎細胞癌等則需要IL-1β或 TNF-α等刺激下才合成和分泌IL-8。

2.2 IL-8作用 IL-8是一種由巨噬細胞和上皮細胞等分泌的細胞因子，屬于多功能因子，生物學功能方面無種屬特異性，早期發現中性粒細胞屬于其作用的包細胞，可特異性的趨化中性粒細胞，使其進入到炎癥組織中，并進行脫顆粒，發生超氧陰離子，導致呼吸爆發。同時可以刺激炎性細胞，使急性期蛋白合成，并促進炎性介質的釋放。該因子主要功效與作用表現在當IL-8結合趨化因子受體IL-8受體α，和IL-8受體β的時候，對中性粒細胞有細胞趨化作用，而實現對炎性反應的調節。此外IL-8還具有很強的促血管生成作用，IL-8在小支氣管炎和囊性纖維化的發病中，起重要作用。有研究發現IL-8幾乎參與到哺乳動物整個生殖過程，比如排卵、黃體形成、子宮內膜增殖、蛻膜化、胚胎著床，以及其生長發育等過程。臨床上IL-8主要對中性粒細胞有細胞作用，從而實現對其炎性反應的調節。隨著對IL-8的深入研究發現它可以調節成纖維細胞上皮細胞，內皮細胞，肝細胞等所發生的病變。并且中性粒細胞與白細胞介素-8結合后發生形態變化，可以定向的作用于反應部位，釋放活性產物來作用于炎癥的局部，從而發生作用。

2.2 IL-8受體特性 IL-8受體可以和配體結合，引起一系列的級聯反應。IL-8受體的cDNA可克隆出含有350個氨基酸殘基的蛋白質，并包括7個跨膜輸水階段，是G蛋白偶聯受體家族的重要組成部分，可以提升人體與高堿性IL-8的結核。其細胞外的第3個短環可作用趨化因子的受體。人體中正常的T細胞對IL-8反應濃度較PMN相差10倍，每個細胞僅表達300個受體，經研究顯示，小麥血凝素可以阻斷IL-8與受體的結合，而蛋白酶K則可以去除細胞結合IL-8的能力。

2.3 IL-8信號傳遞 IL-8信號與其他趨化因子受體存在較大的相似性，IL-8會導致人體內PMN細胞中鈣離子指標升高，出現PMN形態的改變，并導致呼吸爆發和顆粒釋放，發生生物反應，上述反應卻可以被PTX阻斷，可見其屬于G蛋白相關受體。同時對于其研究可以發現，IL-8在引起機體的呼吸爆發之后可以通過蛋白激酶C抑制劑17-羥渥曼青霉素等進行抑制，并且提升了P1P2的PIP激酶活性，因此可以看出蛋白激酶C的激活與磷脂酰肌醇代謝參與了IL-8多介導的信號傳遞。

2.4 IL-8的作用機制 IL-8作為CXC類趨化因子的一種，而該類趨化因子亞家族在分子的N端附近，具有谷氨酸—亮氨酸—精氨酸(ELR)基序，而ELR+CXC趨化因子可吸引中性粒細胞到炎癥部位，成為中性粒細胞的趨化因子[5]。IL-8及腫瘤壞死細胞因子-α(TNF-α)等炎性介質或細菌產物(脂多糖)可誘導ELR+CXC趨化因子產生。IL-8可吸引及激活中性粒細胞，也可由大量不同細胞合成，而所有具有Toll樣受體的細胞亞群均可產生IL-8，其主要來自單核巨噬細胞、上皮細胞、內皮細胞及平滑肌細胞，與胰腺、肺纖維化都有著極大關聯，還可刺激肝纖維化的發生，用于判斷肝硬化病變程度的敏感性[6]。但在肝纖維化/肝硬化中，IL-8的主要應答者是單核細胞/巨噬細胞上的趨化因子受體，并非中性粒細胞。臨床將IL-8的受體分為2種，即CXCR1及CXCR2，其均為細胞表面G蛋白偶聯受體。由于N-末端結構域的差異，使得以上2種受體結合時存在特異性。CXCR1與IL-6及IL-8結合，而CXCR2除以上炎性指標之外，還與IL-1、IL-2、IL-13、IL-4、IL-5、IL-7的親和力較高。以上2種受體可在中性粒細胞、單核細胞/巨噬細胞及T淋巴細胞中可見，存在于嗜中性粒細胞、單核細胞及內皮細胞表面。其中，單核細胞及巨噬細胞上的CXCR1及CXCR2是IL-8細胞靶點的代表。CXCR1可與IL-8完全結合，CXCR2與IL-8的親和力極高，其阻斷CXCR1或CXCR2，抑制中性粒細胞的過度浸潤[7]。自身免疫性肝病患者血清中的IL-8水平異常升高，提示IL-8不僅在肝臟中產生炎性反應，還能起到促纖維化及促細胞增殖的效果[8]。

3 自身免疫性肝病的發病機制

3.2 自身抗體 自身免疫性肝病患者的肝臟會出現病理性炎癥損傷，其血清中含有多種自身抗體，一些病毒感染，如麻疹病毒、肝炎病毒、EB病毒感染等，以及藥物、毒素、交叉抗原等誘導自身抗體的產生和打破自身免疫耐受，發生針對肝臟的自身免疫反應。研究顯示，外源蛋白與自身抗原可通過分子模擬機制產生免疫反應，形成病理性抗體，參與到疾病的發病過程中，可見研究自身抗體及其相應的靶抗原，對明確自身免疫性肝病的發病機制有著顯著意義。唾液酸糖蛋白受體是自身免疫性肝炎患者常見的自身抗體，抗可溶性肝抗原/肝胰抗原抗體是是自身免疫性肝炎患者特異性抗體，抗線粒體抗體是原發性膽汁性膽管炎患者特異性抗體[10]，除此之外，抗核抗體、抗髓過氧化物酶抗體、抗中性粒細胞抗體也是自身免疫性肝病常見自身抗體，但其不具備特異性，因此無法判斷其是否與疾病的發生有關聯。

4 IL-8與自身免疫性肝病的關系

自身免疫性肝病包含自身免疫性肝炎、原發性膽汁性膽管炎及原發性硬化性膽管炎3種疾病及以上任意兩種疾病間的重疊綜合征，自身免疫性肝炎常見肝細胞損傷的情況，進而引發肝炎，使得白細胞浸潤，最終發展為肝硬化及肝纖維化[14]。患者自身免疫功能異常、細胞因子失衡，T細胞打破耐受而識別自身的抗原，導致T細胞與靶細胞結合形成復合體發生細胞溶解，引起肝損傷和壞死。原發性膽汁性膽管炎是一種慢性非化膿性破壞性肉芽腫性膽管炎，以100 mm以內的肝內膽管為病理中心，臨床上女性患者居多，是一種肝臟特異性自身免疫性疾病，常發生于遺傳易感性個體，與其他自身免疫疾病有關[15]。原發性硬化性膽管炎表現為慢性膽汁淤積癥，可影響肝內及肝外膽管，引發肝纖維化及肝硬化，尤其以男性患者居多，與潰瘍性結腸炎有極大關聯。原發性膽汁性膽管炎及原發性硬化性膽管炎患者，炎性貫穿在膽道系統周圍，導致膽汁淤積[16]。病理學研究得知，原發性膽汁性膽管炎主要由肝管破壞引起，而原發性硬化性膽管炎，纖維化在肝管周圍發生發展。自身免疫性肝炎及原發性膽汁性膽管炎可見患者IL-12p70、IL-5及IL-1b升高的情況，其表示免疫激活，與發生感染時的病理學特征具有一致性，提示患者疾病發展過程中伴隨肝內炎性反應[17]。自身免疫性肝炎以肝細胞為靶點，與肝細胞損傷存在密切聯系，而原發性膽汁性膽管炎及原發性硬化性膽管炎以膽管上皮細胞為靶點，常見膽汁淤積的一系列癥狀，伴隨炎性反應及纖維化。關于自身免疫性肝病的發病機制目前尚不明確，但以上三種類型疾病的致病途徑幾乎一致，由環境、遺傳、免疫耐受機制失調所導致，再協同誘導抗體及T淋巴細胞介導的肝臟特異性靶點的免疫攻擊，使得肝臟出現壞死及纖維化等現象。雖然自身免疫性肝病由T淋巴細胞導致，IL可對肝臟固有的淋巴細胞及T淋巴細胞的活化起到重要作用。

4.1 IL-8與自身免疫性肝炎及重疊綜合征 自身免疫性肝炎由免疫介導，是一種病因不明的慢性肝病，女性患者居多，其可發生在各個年齡段。據文獻報道，自身免疫性肝炎患者的血清IL-8水平顯著升高[18]。Dilyara等[19]的研究中，對自身免疫性肝炎患者的血清細胞因子水平加以檢測，并對自身免疫性肝炎及重疊綜合征患者的血清細胞因子水平也加以檢測，結果顯示，以上患者的血清IL-8水平顯著高于對照組。自身免疫性肝炎患者的IL-6、IL-8及TNF-α水平均有所提升，IL-8與疾病發病關系密切，表明其是診斷疾病或治療疾病的重要靶點。李亞琴等[20]的研究中，與健康體檢者比較，慢性肝病和原發性肝癌患者的血清IL-8水平顯著高于對照組，進而得出血清IL-8水平高低與肝病患者的臨床表現關系密切，而通過觀察血清IL-8水平，可判斷原發性肝癌、慢性病毒性肝炎患者預后及死亡率。文獻研究發現，所有類型慢性肝病患者的血清IL-8水平均高于健康對照組，而合并肝硬化的患者血清IL-8水平高于非肝硬化患者，終末期肝病患者的IL-8水平最高，酒精性肝病及膽汁性肝病患者的IL-8水平高于病毒性肝炎及其他原因所致的慢性肝病患者[21]。可見，除促炎作用外，IL-8與自身免疫性肝病的肝纖維化及細胞增殖有密切關系，可作為疾病發展及判斷其預后的參考指標之一。

4.2 IL-8與原發性膽汁性膽管炎 該病是成年人原發性膽汁淤積性肝臟病，主要發病于中年女性，以肝內膽汁淤積、循環血液中出現抗線粒體抗體和肝內小膽管進行性、非化膿性炎癥性破壞，最終導致廣泛性肝管破壞、膽汁性肝硬化甚至肝衰竭為顯著特征。楊敏等[22]研究中發現，原發性膽汁性肝硬化患者的外周血IL-8水平顯著高于健康人，與測CXCR1呈正相關，與CXCR2關聯不緊密。原發性膽汁性膽管炎患者的IL-8水平顯著升高。IL-8的高表達，不僅體現在血清中，在肝內也呈高表達狀態。李青梅等[23]研究表明，原發性膽汁性膽管炎患者以身倦乏力、絕經、納差、脾腫大等為主要臨床特征，患者IL-6、TNF-α、IFN-γ較正常人高，且IL-8較正常人更高。文獻研究中顯示，熊去氧膽酸治療前IL-8水平升高與原發性膽汁性膽管炎的不良預后有關[24]。經多次比較，原發性膽汁性膽管炎患者中肝失代償者血清IL-8水平顯著升高，檢測患者熊去氧膽酸治療前的血清樣本，肝移植患者的血清IL-8水平顯著高于非肝移植患者。血清中IL-8水平與原發性膽汁性膽管炎患者的纖維化進展有著密切關系。因此，熊去氧膽酸治療前血清IL-8水平可作為判斷原發性膽汁性膽管炎患者預后的重要參考指標。

患者外周血IL-8的表達呈現出升高的狀態，并且與CXCR1的表達相反，同時經研究發現IL-8的高表達不僅體現在血清中，還會體現在患者因疾病受到損傷的膽管上皮細胞中，并且與中性粒細胞的浸潤之間存在一定的聯系。PBC患者外周血IL-8及其受體水平升高,推測IL-8及其受體信號轉導過程可能在PBC的發病過程中起重要作用,為PBC的免疫干預治療途徑提供新的方向,但其與PBC的嚴重程度并無明顯相關關系。可見，在原發性膽汁性肝硬化LRS/TLR4通路通過ERK等通路可以導致IL-8水平升高，最終導致疾病的進展，雖然通過熊去氧膽酸可以對疾病進行一定的治療，但是治療前后IL-8升高與不良預后之間的聯系非常顯著，因此可以作為預后判斷的重要指標。

4.3 IL-8與原發性硬化性膽管炎 原發性硬化性膽管炎由肝內外膽管彌漫性炎癥及纖維化所致，患者常見多灶性膽管狹窄，以慢性膽汁淤積為主要臨床癥狀[25]。膽汁淤積性肝病的血清IL-8水平高于其他慢性肝病。有文獻報道稱，原發性硬化性膽管炎患者的膽管細胞中血清IL-8水平顯著高于原發性膽汁性膽管炎、HCV感染及健康人，而此項文獻報道說明原發性膽汁性膽管炎患者血清IL-8水平高于慢性肝病，就此推測原發性膽汁性膽管炎及原發性硬化性膽管炎中的IL-8表達部位可能存在差異[26]。除血清及膽管細胞外，Vesterhus等[27]的研究還發現，IL-8水平在原發性硬化性膽管炎患者及健康對照組間和輕度與晚期原發性硬化性膽管炎患者間存在顯著差異。Serge等[28]的研究中，原發性硬化性膽管炎患者膽管及膽囊膽汁IL-8水平高于血清2個數量級，而升高的IL-8可能來自膽管上皮細胞，經過試驗顯示，IL-8可由多種細胞類型產生，包括內皮細胞及膽管上皮細胞。原發性硬化性膽管炎患者，IL-8升高會導致膽汁淤積，使得膽囊上皮細胞及膽管上皮細胞增殖，其有助于修復膽管損傷，但IL-8持續升高會導致細胞增生異常，進而引發肝管癌及膽囊癌[29,30]。IL-8還能誘導膽管細胞表達促纖維化基因抗平滑肌抗體，使得膽汁中IL-8升高，進而導致膽管周圍纖維化，引發病變。原發性硬化性膽管炎與IL-8的關系還體現在刺激各種類型細胞生長的方面，可刺激膽囊上皮細胞和膽管上皮細胞，導致膽汁淤積的出現，同時會刺激膽囊上皮細胞膽管上皮細胞增殖。從作用方面分析，IL-8對膽管細胞增殖的刺激有助于膽管損傷的修復，但是在長期刺激作用之下會出現細胞異常增殖的問題，引起膽管癌和膽囊癌[31,32]。同時IL-8還會誘導原代膽管細胞表達促纖維化基因，使其與平滑肌抗體形成對抗，導致膽汁中IL-8的表達提升，促使膽囊周圍發生纖維化，最終形成原發性硬化性膽管炎[33]。總之，原發性硬化性膽管炎患者的膽汁及IL-8水平較高，與病變嚴重程度及預后有極大關聯，可見IL-8對原發性硬化性膽管炎的發生發展起到重要作用，應用IL-8受體導向治療可為疾病的的治療提供新的可能[34,35]。

自身免疫性肝病是指由于機體的免疫系統攻擊自身的肝組織所造成的一種疾病,臨床上常見的自身免疫性肝病包括自身免疫性肝炎，原發性膽汁性膽管炎，原發性硬化性膽管炎。以原發性膽汁性膽管炎最為常見，其次為自身免疫性肝炎，原發性硬化性膽管炎較前兩者少見，自身免疫性肝病均不具有傳染性。這三種疾病的臨床表現、化驗檢查方面均有各自的特點，自身免疫性肝炎主要表現為肝細胞炎性壞死、原發性膽汁性膽管炎，原發性硬化性膽管炎主要表現為肝內膽汁淤積。自身抗體的出現在自身免疫性肝病發生過程中可能起著重要作用。在發病機制的研究方面，機體炎癥、免疫異常、自身患有免疫系統疾病等均屬于誘發因素，典型癥狀包括自身免疫性肝炎、原發性膽汁性膽管炎、原發性硬化性膽管炎等。在對疾病的發病機制進行深入研究，發現IL-8通過激活相關細胞的傳導通路，發揮促炎性反應、促纖維化及促細胞增殖等作用，促進疾病發生發展。由于小鼠體內不存在IL-8編碼基因，因此進行動物實驗的方法受到限制，目前關于IL-8參與自身免疫性肝病發病通路的研究較少。而研究自身免疫性肝病與IL-8相關性的研究對闡述疾病的發病機制、疾病的預后判斷及治療效果判斷提供參考指標，為疾病的治療提供更加完善的數據資料。