血清miR-92a和miR-155-5p表達(dá)對老年高血壓合并腦梗死診斷與預(yù)后的影響

孫蓮紅 殷勇

急性腦梗死是神經(jīng)內(nèi)科常見疾病，具有高致殘、高致死和高復(fù)發(fā)等特點，是全球?qū)е滤劳龊蜌埣驳诙笤颉６哐獕夯颊吆喜⒓毙阅X梗死的幾率明顯提高，雖然高血壓的特點是長期血管處于高壓狀態(tài)下，但其并發(fā)癥不是出血，而是血栓形成發(fā)生急性腦梗死。急性腦梗死的診斷主要靠頭顱CT和MRI，但由于靈敏度不高，仍達(dá)不到快速診斷的要求[1]。急性腦梗死的治療是溶栓，但時間窗較短，只有3%的患者得到及時診斷，最終得到溶栓，因此，尋找具有靈敏度高和特異性好的生物標(biāo)記物成為研究的熱點。微小RNA(miRNAs)是一種非編碼RNA，其是由18～24個核苷酸組成，參與細(xì)胞的各種病理生理過程，現(xiàn)有研究證實miRNAs在急性腦梗死的動物模型中出現(xiàn)表達(dá)異常[2]，并認(rèn)為miRNAs在急性腦梗死的診斷，治療和預(yù)后判斷方面可能的生物標(biāo)記物。miR-155-5p和miR-92a在高血壓疾病中出現(xiàn)異常表達(dá)[3,4]，是否具有在高血壓急性腦梗死中的診斷和預(yù)后中具有臨床意義需要進(jìn)一步明確。本研究通過對高血壓急性腦梗死患者血清miR-155-5p和miR-92a檢測，觀察其在高血壓急性腦梗死診斷和預(yù)后的價值，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2017年1月至2018年12月在我院就診的高血壓急性腦梗死患者105例為高血壓合并腦梗死組，其中男70例，女35例；年齡60～85歲，平均年齡(73.14±6.88)歲；根據(jù)腦梗死的部位分為腦葉21例，腦干64例和基底節(jié)區(qū)20例。選擇同期在我院診斷為原發(fā)性高血壓患者89例，為高血壓組，其中男57例，女32例；年齡60～85歲，平均年齡(72.93±7.65)歲；同期在我院行健康體檢者45例，為健康對照組，男28例，女17例；年齡60～85歲，平均年齡(72.40±7.35)歲。3組基線資料具有均衡性。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn) (1)納入標(biāo)準(zhǔn)：高血壓組和高血壓合并腦梗死組均符合高血壓的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]；腦梗死組和高血壓合并腦梗死組均行顱腦CT和MRI均符合急性腦梗死的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]；腦梗死發(fā)病時間7～72 h；均知情同意簽署同意書；經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審核通過。(2)排除標(biāo)準(zhǔn)：繼發(fā)性高血壓；腦出血；急性冠脈綜合征，嚴(yán)重心律失常和腎功能不全；免疫學(xué)和血液性疾病；惡性腫瘤；精神性疾病和智力障礙者。

1.3 方法

1.3.1 治療方法與分組:腦梗死組患者入院后常規(guī)給予心電監(jiān)護(hù)，吸氧，調(diào)整血糖、血壓和抗血小板集聚等支持對癥治療；對于無明顯抗凝禁忌癥的患者采用抗凝治療；如果有腦水腫和顱內(nèi)壓升高予以脫水治療。患者舒張壓>120 mm Hg或者收縮壓>220 mm Hg則采用烏拉地爾靜脈泵入緩慢降壓至185/105 mm Hg，血壓<185/105 mm Hg無需降壓治療。出院90 d后進(jìn)行隨訪，用改良Rankin量表(mRS)[7]對患者預(yù)后進(jìn)行評價，mRS為0～2分為預(yù)后良好，3～6分為預(yù)后不良。本組預(yù)后不良組41例，預(yù)后良好組64例。

1.3.2 血液標(biāo)本留取:患者入院后空腹取肘靜脈血10 ml，放在抗凝管中，以3 000 r/min離心10 min，離心半徑10 cm，分離出血漿，放置在無RNA酶的Ep管中，保存在-80℃冰箱待測。

1.3.3 qRT-PCR檢測:總RNA提?。喊凑誱iRNA試劑盒使用說明書，分離出總RNA，并使用核酸定量檢測儀測定RNA濃度和純度。qRT-PCR：使用Taqman microRNA RT Kit(ABI公司，美國)并用相應(yīng)的逆轉(zhuǎn)錄引物合成cDNA，并根據(jù)說明書進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。其中miR-155-5p上游引物序列5’-UUAAUGCUAAUCGUGAUAGGGGU-3’，下游引物5’-CCCUAUCACGAUUAGCAUUAAUU-3’； miR-92a上游引物5’-TACACAGGTTGGGATCGGTTG-3’，下游引物5’-GTGCAGGGTCCAGGT-3’； U6上游引物序列5’-CAAACTCAACAGGCCGGGAC-3’，下游引物5’-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3’。配置反應(yīng)體系：加入上游引物0.5 μl(20 μmol/L)，下游引物0.5 μl(20 μmol/L)，cDNA Template 0.5 μl，2×SYBR Green Master Mix 10 μl，加入ddH2O配至20 μl。在即時熒光定量系統(tǒng)上進(jìn)行擴(kuò)增，其擴(kuò)增條件為95℃ 10 min，95℃ 15 s，60℃ 1 min，循環(huán)40次，用U6來校正每個樣品的Ct值，用2-ΔΔCt方法表示相對表達(dá)量。

1.3.4 生化指標(biāo)測定:采集靜脈血采用日立7170A全自動生化分析儀測定血糖、纖維蛋白原、三酰甘油、膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、肌酐和D-二聚體。

1.4 觀察指標(biāo) 觀察高血壓合并腦梗死組、高血壓組和健康對照組血清miR-92a和miR-155-5p表達(dá)變化，對高血壓合并腦梗死影響預(yù)后因素進(jìn)行單因素和多因素分析，觀察血清miR-92a和miR-155-5p表達(dá)在高血壓合并腦梗死診斷和預(yù)測預(yù)后的靈敏度和特異性。

2 結(jié)果

2.1 影響高血壓合并腦梗死預(yù)后的單因素分析 根據(jù)mRS量表隨訪3個月后，41例患者評分為預(yù)后不良，64例患者為預(yù)后良好。單因素分析發(fā)現(xiàn)，性別、年齡、吸煙史、飲酒史、糖尿病史、冠心病史、心房顫動史、HDL-C、LDL-C、三酰甘油、總膽固醇、空腹血糖、血肌酐、NIHSS評分和梗死部位與高血壓合并腦梗死預(yù)后無明顯差異(P>0.05)，而收縮壓、舒張壓、D-二聚體、病灶直徑、miR-92a和miR-155-5p與高血壓合并腦梗死患者的預(yù)后呈密切相關(guān)(P<0.05)。見表1。

表1 影響高血壓合并腦梗死預(yù)后的單因素分析

2.2 3組血清miR-92a和miR-155-5p表達(dá)水平比較 高血壓合并腦梗死患者血清miR-92a表達(dá)水平高于高血壓組和健康對照組(P<0.01)，而高血壓組明顯高于健康對照組(P<0.01)；miR-155-5p表達(dá)水平明顯低于高血壓組和健康對照組(P<0.01)，而高血壓組低于健康對照組(P<0.01)。見表2。

表2 3組血清miR-92a和miR-155-5p表達(dá)水平比較

2.3 3組血清miR-92a和miR-155-5p表達(dá)在診斷腦梗死的診斷效能 miR-92a和miR-155-5p表達(dá)在診斷高血壓合并腦梗死具有較高診斷效能，將miR-92a和miR-155-5p表達(dá)進(jìn)行l(wèi)ogistics分析，得出方程=0.962XmiR-92a-3.163XmiR-155-5p-1.724，發(fā)現(xiàn)聯(lián)合檢測其靈敏度79.0%，特異性86.5%，AUC為0.900明顯高于miR-92a(Z=3.827，P<0.05)和miR-155-5p(Z=2.368，P<0.05)的檢測，而miR-92a和miR-155-5p間無明顯差異(P>0.05)。見圖1，表3。

圖1 聯(lián)合檢測miR-92a和miR-155-5p表達(dá)高血壓合并腦梗死的診斷效能

表3 血清miR-92a和miR-155-5p表達(dá)在診斷高血壓合并腦梗死的診斷效能

2.4 影響高血壓合并腦梗死預(yù)后的多因素分析 多因素分析發(fā)現(xiàn)收縮壓、病灶直徑、miR-92a和miR-155-5p是高血壓合并腦梗死預(yù)后的獨立預(yù)后因素(P<0.05)。見表4。

表4 影響高血壓合并腦梗死預(yù)后的多因素分析

2.5 血清miR-92a和miR-155-5p表達(dá)在預(yù)測高血壓合并腦梗死預(yù)后的效能 血清miR-92a和miR-155-5p表達(dá)在預(yù)測高血壓合并腦梗死具有較高的靈敏度和特異性，將miR-92a和miR-155-5p表達(dá)進(jìn)行Logistics分析，得出方程=1.285XmiR-92a-3.310XmiR-155-5p-2.135，發(fā)現(xiàn)聯(lián)合檢測其靈敏度87.7%，特異性82.8%，AUC為0.902明顯高于miR-92a(Z=2.060，P<0.05)和miR-155-5p(Z=2.548，P<0.05)的檢測，而miR-92a和miR-155-5p間無明顯差異(P>0.05)。見表5，圖2。

表5 血清miR-92a和miR-155-5p表達(dá)在預(yù)測高血壓合并腦梗死預(yù)后的效能

圖2 血清miR-92a和miR-155-5p表達(dá)在預(yù)測高血壓合并腦梗死預(yù)后的效能

3 討論

高血壓患者常合并動脈粥樣硬化，引起血栓形成，導(dǎo)致血管腔閉塞，出現(xiàn)急性腦供血不足導(dǎo)致急性腦梗死。miRNAs是一類約22個核苷酸組成的非編碼單鏈RNA，通過對mRNA的結(jié)合降解或者抑制，從而達(dá)到對蛋白質(zhì)合成的調(diào)控?，F(xiàn)有研究證實血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞能夠特異性的表達(dá)miRNAs，通過對細(xì)胞增殖，分化和凋亡等過程的調(diào)控，在血管病理生理過程中具有重要調(diào)控作用[8,9]。miRNA釋放入血主要通過2種方式[10]：由破碎組織細(xì)胞或者凋亡細(xì)胞中漏出釋放入血，或受損細(xì)胞主動分泌入血，以后者為主。在動物實驗發(fā)現(xiàn)大鼠腦缺血在24 h出現(xiàn)表達(dá)miRNA譜出現(xiàn)明顯的變化，在腦組織中高表達(dá)的miRNAs已經(jīng)可以在血液中檢測到[11]，并認(rèn)為血液中的miRNA水平是急性腦梗死診斷，指導(dǎo)治療和預(yù)后判斷的新型血液標(biāo)記物。

本研究顯示高血壓合并腦梗死患者血清miR-92a表達(dá)水平高于高血壓組和健康對照組，而高血壓組明顯高于健康對照組，說明miR-92a在高血壓及高血壓合并腦梗死疾病的中呈高表達(dá)，并且發(fā)現(xiàn)血清miR-92a表達(dá)在診斷高血壓合并腦梗死其靈敏度為63.8%，特異性84.3%，AUC為0.812，說明在診斷高血壓合并腦梗死具有較高的診斷效能。miR-92a是miR-17/92家族的成員之一，在基礎(chǔ)研究中發(fā)現(xiàn)miR-92a在血管內(nèi)皮細(xì)胞中呈高表達(dá)，且對新生血管具有明顯抑制作用[11]。在一項大鼠的心肌梗死模型的動物實驗中發(fā)現(xiàn)，注射miR-92a抑制劑后，能夠明顯縮小心臟梗死范圍，心臟的收縮和舒張功能均得到改善，梗死部位的周邊血管得到明顯的增加[12]。將miR-92a以微粒體的形式釋放入血，并且與疾病的嚴(yán)重程度呈相關(guān)性，故miR-92a在動脈粥樣硬化形成過程具有重要的意義[13]。本研究還發(fā)現(xiàn)高血壓合并腦梗死組血清miR-155-5p表達(dá)水平低于高血壓組和健康對照組，而高血壓組低于健康對照組，說明miR-155-5p是腦梗死發(fā)生的保護(hù)因子。與文獻(xiàn)報道血清miR-155表達(dá)水平在腦血管疾病患者明顯低于健康對照組[14]一致。miR-155位于人體的第3號染色體，基礎(chǔ)研究發(fā)現(xiàn)miR-155水平是腦血管疾病的危險因素，在高脂血癥，動脈粥樣硬化破裂和高血糖等病變具有密切聯(lián)系[15]。miR-155參與了動脈粥樣硬化病理生理過程，當(dāng)機(jī)體的miR-155表達(dá)量明顯減少時，導(dǎo)致下游的信號傳導(dǎo)值和轉(zhuǎn)錄激活因子表達(dá)明顯增加，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移加快，從而使動脈斑塊出現(xiàn)新生的毛細(xì)血管，促進(jìn)斑塊的破裂[16]；同時還可以通過調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞絡(luò)氨酸激酶細(xì)胞因子的表達(dá)，參與新生血管的病理生理過程[17]。此外有研究證實miRNA的異常表達(dá)與三酰甘油表達(dá)水平具有重要聯(lián)系，其中miR-155的表達(dá)與高脂血癥有密切聯(lián)系，與低密度脂蛋白合成呈負(fù)相關(guān)[18]。本研究發(fā)現(xiàn)血清miR-155-5p表達(dá)在診斷高血壓性腦梗死的靈敏度77.1%，特異性85.4%，AUC為0.852具有較高的診斷效能，聯(lián)合miR-92a和miR-155-5p檢測，其診斷效能明顯提高，其靈敏度79.0%，特異性86.5%，AUC為0.900明顯優(yōu)于單個指標(biāo)，說明兩個指標(biāo)有一定的互補(bǔ)性，能明顯提高診斷效能。

隨訪3個月后發(fā)現(xiàn)高血壓合并腦梗死預(yù)后不良的有41例，其中以收縮壓、舒張壓、D-二聚體、病灶直徑、miR-92a和miR-155-5p與高血壓合并腦梗死患者的預(yù)后呈密切相關(guān)，進(jìn)一步進(jìn)行多因素分析發(fā)現(xiàn)收縮壓，病灶直徑和miR-92a是高血壓合并腦梗死獨立預(yù)后的危險因素，而 miR-155-5p是高血壓合并腦梗死的保護(hù)因素。為進(jìn)一步探討在預(yù)測高血壓合并腦梗死預(yù)后的效能，本研究進(jìn)行ROC曲線分析，發(fā)現(xiàn)miR-92a在預(yù)測不良預(yù)后方面具有較高的效能，當(dāng)血清miR-92a>4.829時，其預(yù)測不良預(yù)后的靈敏度為63.4%，特異性93.7%，AUC為0.846，說明當(dāng)機(jī)體血清miR-92a>4.829對這類患者是否進(jìn)行進(jìn)一步干預(yù)措施干預(yù)不良預(yù)后的發(fā)生。血清miR-155-5p表達(dá)在預(yù)測高血壓合并腦梗死不良預(yù)后方面同樣具有較高的診斷效能，當(dāng)血清miR-155-5p表達(dá)≤1.111，其預(yù)測高血壓不良預(yù)后的靈敏度為85.4%，特異性為73.4%，AUC為0.802，說明當(dāng)機(jī)體血清miR-155-5p表達(dá)較低時，這部分患者應(yīng)采取有效措施干預(yù)，從而對預(yù)后進(jìn)行改善。本研究還發(fā)現(xiàn)聯(lián)合檢測miR-92a和miR-155-5p表達(dá)能夠提高對不良預(yù)后的診斷價值，其靈敏度為87.8%，特異性為82.8%，AUC為0.902，說明聯(lián)合檢測能夠提高對不良預(yù)后的診斷效能，當(dāng)機(jī)體miR-92a>4.829且miR-155-5p≤1.111，建議采取進(jìn)一步有效干預(yù)措施進(jìn)行干預(yù)，以期改善預(yù)后，提高生活質(zhì)量。

總之，在高血壓合并腦梗死患者中，血清miR-92a表達(dá)明顯升高，而miR-155-5p表達(dá)明顯降低，是高血壓合并腦梗死獨立預(yù)后因素，聯(lián)合檢測在高血壓合并腦梗死的診斷和預(yù)測預(yù)后方面具有較高的效能。